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文檔簡(jiǎn)介

PCR引物設(shè)計(jì)軟件

primerPremier5.0

應(yīng)用簡(jiǎn)介一.引物設(shè)計(jì)的基本原則

引物長(zhǎng)度（primerlength）產(chǎn)物長(zhǎng)度（productlength）序列Tm值(meltingtemperature)ΔG值(internalstability)引物二聚體及發(fā)夾結(jié)構(gòu)（duplexformationandhairpin）錯(cuò)誤引發(fā)位點(diǎn)（falseprimingsite）引物及產(chǎn)物GC含量（composition）

1.引物的長(zhǎng)度

一般為15-30bp，常用的是18-27bp，但不能大于38，因?yàn)檫^(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致其延伸溫度大于74℃，即Taq酶的最適溫度3.引物的GC含量

一般為40-60%，過(guò)高或過(guò)低都不利于引發(fā)反應(yīng)。上下游引物的GC含量不能相差太大。4.引物所對(duì)應(yīng)模板序列的Tm值最好在72℃左右5.ΔG值(自由能)，

反映了引物與模板結(jié)合的強(qiáng)弱程度。一般情況下，引物的ΔG值最好呈正弦曲線形狀，即5’端和中間ΔG值較高，而3’端ΔG值相對(duì)較低二.PrimerPremier5.0

引物設(shè)計(jì)軟件簡(jiǎn)介

PrimerPremier5.0用途：

引物分析評(píng)價(jià)

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