器官移植和HLA配型

臨床免疫學(xué)檢驗吉林醫(yī)藥學(xué)院檢驗學(xué)院當(dāng)前1頁，總共58頁。

器官移植與HLA分型檢測技術(shù)當(dāng)前2頁，總共58頁。majorhistocompatibilitycomplex,

MHC主要組織相容性復(fù)合體人類白細(xì)胞抗原h(huán)umanleukocyteantigen,HLA/HLA復(fù)合體/MHC分子/MHC抗原當(dāng)前3頁，總共58頁。HLA的結(jié)構(gòu)HLA-Ⅱ類分子HLA-Ⅰ類分子當(dāng)前4頁，總共58頁。公元4世紀(jì)羅馬教堂當(dāng)前5頁，總共58頁。自體移植同種同基因移植同種異基因移植異種移植移植物抗原刺激受者的免疫系統(tǒng)/受者組織抗原刺激移植物中的免疫細(xì)胞誘發(fā)的免疫應(yīng)答稱為移植排斥反應(yīng)同種異型移植排斥反應(yīng)當(dāng)前6頁，總共58頁。第1節(jié)MHC基因和遺傳特點（復(fù)習(xí)）MHC基因的構(gòu)成MHC基因的特性MHC基因的意義當(dāng)前7頁，總共58頁。一、MHC基因的構(gòu)成（一）定位

第6號染色體短臂（6p21.31）全長3600kb，共有224個基因座位，128個表達(dá)產(chǎn)物。（二）基因區(qū)經(jīng)典Ⅰ類基因：B、C、A位點經(jīng)典Ⅱ類基因：DP、DQ、DR位點當(dāng)前8頁，總共58頁。Ⅰ類基因區(qū)HLA復(fù)合體3600kb長度224基因座位Ⅱ類基因區(qū)ACBDRDQDP著絲點Pq人6號染色體MHC-Ⅱ類分子MHC-Ⅰ類分子當(dāng)前9頁，總共58頁。αβDPDQDRBCAαβαββααα當(dāng)前10頁，總共58頁。二、MHC基因遺傳特點（一）HLA為高度多態(tài)性基因

MHC基因復(fù)合體是由多個位置相鄰的基因座位組成，可以編碼相同或相似的MHC抗原。當(dāng)前11頁，總共58頁。MHC為共顯性表達(dá)當(dāng)前12頁，總共58頁。Ⅱ類基因Ⅰ類基因αβDPDQDRBCAαβαβααα2496281062抗原特異性5593812412623506276851等位基因數(shù)DRBDRADQBDQADPBDPAACBⅡ類基因Ⅰ類基因基因型別當(dāng)前13頁，總共58頁。2496281062抗原特異性5593812412623506276851等位基因數(shù)DRBDRADQBDQADPBDPAACBⅡ類基因Ⅰ類基因基因型別人群之中所有基因座位等位基因都相同的幾率：

1262381245593851276506≈11019

人群之中MHC抗原相同的幾率：

6924621028≈1109

當(dāng)前14頁，總共58頁。（二）單體型和連鎖不平衡性意義：器官移植選擇供體順序自身﹥同卵雙生﹥兄弟姐妹﹥父母﹥親屬﹥無關(guān)人群父母與子女完全相同的幾率：父母與子女一半相同的幾率：子女間完全相同的幾率：子女間一半相同的幾率：子女間完全不同的幾率：0100%25%50%25%1.單體型遺傳當(dāng)前15頁，總共58頁。1.單體型遺傳（二）單體型和連鎖不平衡性2.連鎖不平衡性（一）HLA為高度多態(tài)性基因當(dāng)前16頁，總共58頁。第2節(jié)HLA與器官移植當(dāng)前17頁，總共58頁。

在三類HLA分子中，Ⅰ、Ⅱ類分子是觸發(fā)移植排斥反應(yīng)的首要抗原。次要組織相容性抗原ABO血型抗原系統(tǒng)其他組織特異性抗原主要組織相容性抗原

決定移植“成敗”的抗原當(dāng)前18頁，總共58頁。

一、器官移植的類型

（1）自體移植（autograft）皮膚，骨髓，軟骨和骨（2）同種同基因移植（syngraft）（3）同種異基因移植（allograft）

同種異型移植（4）異種移植（xenograft）當(dāng)前19頁，總共58頁。一、同種異型排斥反應(yīng)的識別機制受者對T細(xì)胞對供者的MHC分子的直接與間接識別。（一）直接識別機制：

當(dāng)前20頁，總共58頁。直接識別受者T細(xì)胞當(dāng)前21頁，總共58頁。受者T細(xì)胞直接識別的靶結(jié)構(gòu)

當(dāng)前22頁，總共58頁。同種異型抗原的直接識別及其效應(yīng)

當(dāng)前23頁，總共58頁。（二）間接識別受者T細(xì)胞識別受者APC加工處理的供者的MHC分子在急性排斥反應(yīng)中、晚期以及慢性排斥反應(yīng)中起重要作用。當(dāng)前24頁，總共58頁。識別方式間接識別當(dāng)前25頁，總共58頁。

同種異型抗原的間接識別

當(dāng)前26頁，總共58頁。當(dāng)前27頁，總共58頁。二、同種異型移植排斥反應(yīng)的類型及效應(yīng)機制（一）宿主抗移植物反應(yīng)（hostversusgraftreaction,HVGR）依據(jù)反應(yīng)發(fā)生的時間及病理強度分為：

1、超急性排斥反應(yīng)（術(shù)后開始至幾個小時）

2、急性排斥反應(yīng)（術(shù)后幾天至幾周）

3、慢性排斥反應(yīng)（術(shù)后數(shù)月至數(shù)年）當(dāng)前28頁，總共58頁。

超急性排斥反應(yīng)發(fā)生示意圖

當(dāng)前29頁，總共58頁。（二）移植物抗宿主反應(yīng)

（graft

versushostreaction,GVHR

）更為嚴(yán)重的一種排斥反應(yīng)原因：（1）受者與供者HLA不相匹配；（2）移植物中成熟的T細(xì)胞多；（3）受者處于免疫功能極度低下的狀態(tài)常見于：骨髓移植（造血干細(xì)胞移植）、胸腺、脾移植及新生兒接受大量輸血。當(dāng)前30頁，總共58頁。三、同種異體移植排斥反應(yīng)的防治（一）尋求與受者MHC相配的供者組織或器官是目前最為有效多見的方法。

1、ABO血型抗原配型

2、HLA抗原配型①供者與受者HLA-A、B相配的位點越多存活率越高；②上述的基礎(chǔ)上，HLA-DR、DQ盡可能的匹配；③HLA-DR類型對存活率影響較大。當(dāng)前31頁，總共58頁。（二）使用免疫抑制藥物

1、多為抑制T細(xì)胞藥物環(huán)孢菌素A（CsA），

FK-506、Rapamycin2、去氧精胍菌素等抗生素類；阻斷T細(xì)胞的生長周期

3、激素

4、可溶性CK受體、抗CK抗體和抗粘附分子抗體當(dāng)前32頁，總共58頁。阻斷協(xié)同刺激信號誘導(dǎo)T細(xì)胞失能當(dāng)前33頁，總共58頁。（三）誘導(dǎo)對移植抗原的特異性耐受免疫抑制劑的毒副作用（致死性感染和腫瘤）理想方法是誘導(dǎo)特異性耐受。新方案：①誘導(dǎo)凋亡；②誘導(dǎo)T細(xì)胞無應(yīng)答（anergy）包括輸入可溶性CTLA-4及CD40L-CD40、CD2-CD58等信息傳遞阻斷。當(dāng)前34頁，總共58頁。第3節(jié)HLA分型檢測技術(shù)分子生物學(xué)分型血清學(xué)分型技術(shù)細(xì)胞分型技術(shù)20世紀(jì)60年代20世紀(jì)80年代20世紀(jì)70年代當(dāng)前35頁，總共58頁。一、血清學(xué)分型技術(shù)1.原理

應(yīng)用一系列已知HLA特異性的分型血清與待測的淋巴細(xì)胞反應(yīng)，通過補體依賴的細(xì)胞毒性實驗，來檢測HLA抗原特異性。典型技術(shù)：定型板法（微量細(xì)胞毒實驗）當(dāng)前36頁，總共58頁。反應(yīng)結(jié)果測定1.染料拒染法臺盼藍(lán)伊紅碘化丙啶7-AAD2.流式細(xì)胞術(shù)當(dāng)前37頁，總共58頁。死（著染）細(xì)胞（%）記分結(jié)果判斷0～101陰性11～202可疑陰性21～504弱陽性51～806陽性>808強陽性0未試驗或不能讀數(shù)染料拒染法的判定標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前38頁，總共58頁。當(dāng)前39頁，總共58頁。2.血清學(xué)分型可檢測的抗原（SD抗原）HLA-Ⅱ類分子:HLA-Ⅰ類分子:B,C,ADR,DQ（B細(xì)胞為靶細(xì)胞）當(dāng)前40頁，總共58頁。3.方法學(xué)評價操作簡便易行節(jié)約試劑、結(jié)果可靠、重復(fù)性好無需特殊設(shè)備耗時長不同批號抗血清結(jié)果常有不同優(yōu)點缺點當(dāng)前41頁，總共58頁。二、細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)（LD抗原）1.原理混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，檢測細(xì)胞增殖（mixedlymphocyteculture,MLC）單向MLC雙向MLC當(dāng)前42頁，總共58頁。陰性分型法

陽性分型法

1.單向MLC刺激細(xì)胞：已知HLA型別的分型細(xì)胞（預(yù)處理，使其失去增殖能力）反應(yīng)細(xì)胞：受檢者外周血單個核細(xì)胞（具有增殖能力）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化（形態(tài)學(xué)）3H-TdR摻入法MTT還原法當(dāng)前43頁，總共58頁。（1）陰性分型法

刺激細(xì)胞

HLA-DP1受者T淋巴細(xì)胞

+增殖弱HLA-DP1非HLA-DP1

增殖強

純合子細(xì)胞只表達(dá)HLA-DP1

照射處理當(dāng)前44頁，總共58頁。（2）陽性分型法

預(yù)致T敏細(xì)胞

非HLA-DP1待測B淋巴細(xì)胞

+增殖弱非HLA-DP1HLA-DP1

增殖強

刺激細(xì)胞

HLA-DP1

除DP抗原外，其他HLA抗原相同照射處理當(dāng)前45頁，總共58頁。2.雙向MLC

遺傳型不同的兩個個體淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)時，由于兩者HLA不同，能相互刺激導(dǎo)致對方淋巴細(xì)胞增殖，故稱雙向MLC。方法學(xué)評價：不能分型，但可全面地反應(yīng)供-受雙方組織相容性。當(dāng)前46頁，總共58頁。三、分子生物學(xué)分型技術(shù)(一）基本技術(shù)1.限制性片斷長度多態(tài)性分析（restrictionfragmentlengthpolymorphism,

RFLP）2.PCR/SSP3.PCR-SSCP分型法4.序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-sequencespecificoligonucleotide,PCR-SSO）5.基于序列的HLA分型法（sequence-basedHLAtyping,SBT）當(dāng)前47頁，總共58頁。芯片技術(shù)原理：PCR-SSO反向斑點或印漬法的微型化。(二）集成技術(shù)當(dāng)前48頁，總共58頁。（三）PCR-SSCP分型法原理：對ssDNA進行無變性劑的聚丙烯酰凝膠電泳，序列的差異可形成不同的空間構(gòu)象而導(dǎo)致電泳遷移率的差異，如此可分辨出單一堿基的差異和檢測出DNA多態(tài)性或點突變。（單鏈非變性電泳遷移分析）當(dāng)前49頁，總共58頁。病例介紹一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。男，14歲。首診前3個月，感冒發(fā)燒病史。首次就診原因:頭痛，乏力，眼瞼浮腫。實驗室檢查：蛋白尿，尿紅細(xì)胞陽性。抗炎癥治療1周，稍好，恢復(fù)上學(xué)，正常飲食。2月后，惡心、乏力，眼瞼浮腫加重，24小時尿量減少，蛋白管型。住院治療2個月，腎臟衰竭加重，每周透析3到4次。活檢見腎小球內(nèi)CIC沉淀，抗人IgA、IgG陽性。建議：申請腎移植手術(shù)。親屬自愿做HLA配型，同時申請自無關(guān)人群尋找供體腎。當(dāng)前50頁，總共58頁。半年后分配到合適供體腎（無關(guān)人群）；檢查身體，符合手術(shù)要求，進行腎臟移植手術(shù)。術(shù)后臨床觀察并服用移植排斥抑制藥物，補充EPO。定期到醫(yī)院檢測血藥濃度，檢測免疫功能。（移植后8年后生存狀態(tài)良好，但長期服用抗移植排斥藥物。病例介紹一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。當(dāng)前51頁，總共58頁。腎臟移植前選擇供者的檢查項目：傳染性疾病病原學(xué)檢查

ABO血型配型

HLA配型符合要求供受雙方淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)陰性腎源選擇的原則：以ABO血型完全相同者為好，選擇最佳HLA配型的供者器官，供者無傳染性疾病。當(dāng)前52頁，總共58頁。移植后的臨床觀測:1.T細(xì)胞總數(shù)、CD4/CD8比值、IL-2及其受體的檢測，判斷排斥反應(yīng)的發(fā)生和評估免疫抑制劑治療效果；2.必要時做腎組織活檢；3.血藥濃度檢測，指導(dǎo)合理用藥，減肝、臟腎毒性和免疫抑制。當(dāng)前53頁，總共58頁。1.ABO血型抗原一致2.HLA配型主要做HLA-DR、A、B3.混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)：陰性4.受者血清細(xì)胞毒性實驗：陰性

受者血清+供者細(xì)胞移植前免疫學(xué)檢測當(dāng)前54頁，總共58頁。HLA匹配與移植排斥反應(yīng)020406