DB34-T 4340-2022 法醫(yī)物證鑒定 線粒體DNA種屬鑒定技術(shù)規(guī)范

DB34/T

4340—2022

DNA

1 范圍本文件規(guī)定了法醫(yī)物證鑒定線粒體種屬鑒定的基本要求、檢驗程序和鑒定意見書。本文件適用于安徽省法醫(yī)實驗室通過線粒體DNA測序的方法對動物源生物檢材（包括但不限于血液、肌肉、毛發(fā)、骨骼、牙齒）的種屬來源進行確認，確認范圍為人和高等脊椎動物。2 規(guī)范性引用文件文件。GA/T

法庭科學DNA實驗室檢驗規(guī)范SF/Z

法醫(yī)物證鑒定線粒體檢驗規(guī)范CNAS-CL08-A002:2018

司法鑒定/法庭科學機構(gòu)能力認可準則在法醫(yī)物證

DNA

鑒定領(lǐng)域的應(yīng)用說明《司法鑒定文書規(guī)范》 司發(fā)通〔2016〕112號3 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。法醫(yī)物證鑒定 forensic

biology

identification鑒定人運用法醫(yī)物證學的科學技術(shù)或者專門知識，對各類生物檢材進行鑒別和判斷并提供鑒定意見的活動。種屬鑒定 speciesidentification廣義上的種屬鑒定包括動植物的類屬確定，狹義的種屬鑒定指的是動物的生物檢材的種屬來源鑒定，即確定檢材是否屬于人體所有，有時還要確定檢材屬于何種動物。線粒體

DNA

DNA,

mtDNA位于線粒體中的DNA，呈雙鏈環(huán)狀結(jié)構(gòu)。序列比對 alignment為確定兩個或多個序列之間的相似性和同源性，將它們按照一定的規(guī)律進行排列。4 縮略語下列縮略語適用于本文件。CO

I:細胞色素c氧化酶亞基Ⅰ（cytochrome

c

I）DB34/T

4340—2022DNA:脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic

acid）PCR:

chain

reaction）12SrRNA:12S核糖體核糖核酸（

ribosomal

RNA）5 基本要求應(yīng)符合SF/Z

中～的要求。6 檢驗程序樣本采集6.1.1 含有

的生物檢材（包括但不限于血液、肌肉、毛發(fā)、骨骼、牙齒）均可采集。6.1.2 樣本應(yīng)分別包裝，注明編號、采樣日期、采樣地點等信息。6.1.3 樣本采集后應(yīng)及時進行實驗。DNA

提取和純化按照GA/T

中附錄A的方法執(zhí)行。PCR

擴增與產(chǎn)物測序6.3.1 PCR

根據(jù)需要，宜選擇通用引物或自行設(shè)計引物進行擴增。本文件提供了兩個線粒體片段通用引物示例供參考：

-AAACTGGGATTAGATACCCCACTAT-3-GAGGGTGACGGGCGGTGTGT-3CO

-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-36.3.2PCR

擴增產(chǎn)物測序宜采用純化試劑盒或其他同行公認的純化方法對

擴增產(chǎn)物進行純化；宜采用商品化測序試劑盒進行測序PCR反應(yīng)及毛細管測序電泳，獲得序列信息。6.3.3質(zhì)量控制從事種屬鑒定的實驗室至少應(yīng)該包括以下質(zhì)量控制措施：a)

對照設(shè)置：每次實驗需嚴格設(shè)置陽性（已知的

DNA

樣品）和陰性（不加

DNA

的空白）對照；b)

次測序；c)

污染防控：實驗室應(yīng)采取措施以防止污染，并符合

CNAS-CL08-A002:2018

中

7.4.4

要求。序列比對鑒定DB34/T

4340—2022將測序獲得的DNA序列在國際通用的基因數(shù)據(jù)庫中進行核苷酸序列比對，宜結(jié)合序列比對結(jié)果、物種形態(tài)、地理分布、時間等綜合信息出具鑒定意見。7 鑒定意見書鑒定人根據(jù)

6.4

結(jié)果撰寫鑒定意見書。鑒定意見書的格式要求參照《司法鑒定文書規(guī)范》的規(guī)定執(zhí)行。DB34/T

4340—2022參 考 文

獻[1]

GA/T

法庭科學實驗室建設(shè)規(guī)范[2]

SF/T

0069-2