初始污染菌檢測(cè)講義

關(guān)于初始污染菌檢測(cè)講義2008年5月1第一頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日微生物基礎(chǔ)知識(shí)微生物基礎(chǔ)知識(shí)無(wú)菌技術(shù)初始污染菌檢測(cè)關(guān)鍵步驟致病菌檢查2008年5月2第二頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日微生物學(xué)檢查無(wú)菌檢查微生物限度檢查細(xì)菌、真菌數(shù)量控制菌其他（初始污染菌）2008年5月3第三頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日微生物基礎(chǔ)知識(shí)微生物與微生物學(xué)

自然界中存在著一個(gè)數(shù)量極其龐大、個(gè)體微小和結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的生物類群，即微生物。微生物大多數(shù)為單細(xì)胞，必須借助光學(xué)顯微鏡放大千倍或電子顯微鏡放大數(shù)萬(wàn)倍才能肉眼可見(jiàn)的一類微小生物的統(tǒng)稱。

微生物學(xué)是研究微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)、分類、生理代謝、遺傳變異、生態(tài)分布和微生物與人類、動(dòng)植物關(guān)系等的一門學(xué)科。我們對(duì)微生物深入研究的目的在于更好地開(kāi)發(fā)微生物資源，充分利用微生物有利于人類生活方面?？刂莆⑸锏挠泻Ψ矫?，使之更好地為人類服務(wù)。

2008年5月4第四頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日微生物的分類微生物非細(xì)胞型微生物原核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物病毒亞病毒因子細(xì)菌放線菌衣原體支原體等真菌原生生物2008年5月5第五頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日細(xì)菌形態(tài)特征細(xì)菌個(gè)體形態(tài)

細(xì)菌是一類細(xì)胞細(xì)而短（細(xì)胞直徑約0.5μm,0.5-5μm）、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、細(xì)胞壁堅(jiān)韌以二等分裂方式繁殖和水生性較強(qiáng)的原核微生物，分布廣泛。

形態(tài)圖細(xì)菌菌落形態(tài)單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖后，會(huì)形成以母細(xì)胞為中心的一堆肉眼可見(jiàn)、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞集團(tuán)，這就是菌落。細(xì)菌菌落常表現(xiàn)為濕潤(rùn)、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。細(xì)菌的菌落特征因種而異?？勺鳛殍b定細(xì)菌種的依據(jù)。

菌落圖2008年5月6第六頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日細(xì)菌形態(tài)特征2008年5月7第七頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日細(xì)菌形態(tài)特征粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征

2008年5月8第八頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日細(xì)菌形態(tài)特征銅綠假單孢菌的菌落特征

2008年5月9第九頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日細(xì)菌形態(tài)特征金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度37°C，最適生長(zhǎng)pH7.4。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑1-2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。2008年5月10第十頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日細(xì)菌形態(tài)特征金黃色葡萄球菌的單個(gè)菌落在Baird-Parker瓊脂平板上呈圓形,表面光滑、凸起、濕潤(rùn),直徑2～3mm?；液谏梁谏?有光澤,常有淺色(非白色)的邊緣,周圍繞以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰帶。當(dāng)用接種針觸及菌落時(shí)具有黃油樣粘稠感。2008年5月11第十一頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日細(xì)菌形態(tài)特征描述大?。褐睆叫螤睿簣A形、假根形、不規(guī)則型隆起形狀：擴(kuò)展、苔狀、低凸、凸面、乳頭狀邊緣：整齊、波狀、裂葉狀、圓鋸齒狀、有緣毛表面狀態(tài)：光滑、皺褶、顆粒狀、龜裂狀、同心環(huán)狀表面光澤：閃光、不閃光、金屬光澤質(zhì)地：油脂狀、膜狀、脆透明程度：不透明、半透明

細(xì)菌菌落的常規(guī)描述2008年5月12第十二頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日細(xì)菌形態(tài)特征細(xì)菌基本結(jié)構(gòu)莢膜細(xì)胞壁胞漿膜核蛋白核質(zhì)2008年5月13第十三頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日細(xì)菌形態(tài)特征革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)比較細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)G＋G－厚度20－80nm10－15nm強(qiáng)度堅(jiān)韌疏松糖類含量約45％約15％脂類含量約2％約20％磷壁酸無(wú)有脂多糖無(wú)有脂多糖（LPS）,包括脂蛋白A，核心多糖和特異性多糖三個(gè)部分。LPS對(duì)動(dòng)物具有毒性作用，它牢固地結(jié)合在細(xì)胞表面，只在菌體融解時(shí)才釋放，稱為細(xì)菌內(nèi)毒素。其中脂蛋白A是內(nèi)毒素的主要生物學(xué)活性組分。2008年5月14第十四頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日真菌形態(tài)特征霉菌個(gè)體形態(tài)

霉菌亦稱絲狀真菌，是在分類學(xué)上很不相同的許多真菌的一部分，凡是生長(zhǎng)在營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)上形成絨毛狀、蜘蛛網(wǎng)狀或絮狀菌絲體的真菌，統(tǒng)稱為霉菌，霉菌為真核微生物，其結(jié)構(gòu)比細(xì)菌復(fù)雜。酵母菌個(gè)體形態(tài)

酵母菌是單細(xì)胞真核微生物。酵母菌細(xì)胞的形態(tài)通常有球形、卵圓形、臘腸形、橢圓形、檸檬形或藕節(jié)形等。比細(xì)菌的單細(xì)胞個(gè)體要大得多，一般為1~5微米′5~30微米。酵母菌無(wú)鞭毛，不能游動(dòng)。酵母菌具有典型的真核細(xì)胞結(jié)構(gòu),有細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、液泡、線粒體等，有的還具有微體。2008年5月15第十五頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日霉菌形態(tài)特征由于霉菌的菌絲較粗而長(zhǎng)，因而霉菌的菌落較大，有的霉菌的菌絲蔓延，沒(méi)有局限性，其菌落可擴(kuò)展到整個(gè)培養(yǎng)皿，有的種則有一定的局限性，直徑1~2厘米或更小。菌落質(zhì)地一般比放線菌疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀、絨毛狀或棉絮狀；菌落與培養(yǎng)基的連接緊密，不易挑取；菌落正反面的顏色和邊緣與中心的顏色常不一致。2008年5月16第十六頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日酵母菌形態(tài)特征啤酒酵母的菌落

大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似，但比細(xì)菌菌落大而厚，菌落表面光滑、濕潤(rùn)、粘稠，容易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個(gè)別為黑色。2008年5月17第十七頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日微生物群體生長(zhǎng)規(guī)律

將少量單細(xì)胞純培養(yǎng)接種到一恒定容積的新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)，定時(shí)取樣測(cè)定其細(xì)菌含量，可以看到以下現(xiàn)象：開(kāi)始有一短暫時(shí)間，細(xì)菌數(shù)量并不增加，隨之細(xì)菌數(shù)目增加很快，既而細(xì)菌數(shù)又趨穩(wěn)定，最后逐漸下降。如果以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速度為縱坐標(biāo)作圖，可以得到一條曲線，稱為繁殖曲線，通常又稱為生長(zhǎng)曲線。生長(zhǎng)曲線代表了細(xì)菌在新的適宜的環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖直至衰老死亡全過(guò)程的動(dòng)態(tài)變化。根據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖速率的不同，可將生長(zhǎng)曲線大致分為延遲期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)階段。規(guī)律的描述規(guī)律示意圖2008年5月18第十八頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日微生物群體生長(zhǎng)規(guī)律延遲期：少量細(xì)菌接種到新鮮培養(yǎng)基后，一般不立即進(jìn)行繁殖，生長(zhǎng)速度近于零。處于延遲期細(xì)菌細(xì)胞的特點(diǎn)是分裂遲緩、代謝活躍。對(duì)數(shù)期：對(duì)數(shù)期又稱指數(shù)期。這一階段突出特點(diǎn)是細(xì)菌數(shù)以幾何級(jí)數(shù)增加，代時(shí)穩(wěn)定，細(xì)菌數(shù)目的增加與原生質(zhì)總量的增加，與菌液混濁度的增加均呈正相關(guān)性。穩(wěn)定期：又稱恒定期或最高生長(zhǎng)期。處于穩(wěn)定期的微生物，新增殖的細(xì)胞數(shù)與老細(xì)胞的死亡數(shù)幾乎相等，整個(gè)培養(yǎng)物中二者處于動(dòng)態(tài)平衡，此時(shí)生長(zhǎng)速度又逐漸趨向零。衰亡期：穩(wěn)定期后如再繼續(xù)培養(yǎng)，細(xì)菌死亡率逐漸增加，以致死亡數(shù)大大超過(guò)新生數(shù)，群體中活菌數(shù)目急劇下降，出現(xiàn)了“負(fù)生長(zhǎng)”，此階段叫衰亡期。2008年5月19第十九頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日微生物操作技術(shù)－無(wú)菌環(huán)境是前提！

主要是指在微生物實(shí)驗(yàn)工作中，控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施，其中包括無(wú)菌環(huán)境設(shè)施、無(wú)菌實(shí)驗(yàn)器材等，統(tǒng)稱為無(wú)菌技術(shù)。無(wú)菌環(huán)境的應(yīng)用是一個(gè)完整的操作技術(shù)體系。若其中的任何一個(gè)環(huán)節(jié)污染，那么其他環(huán)節(jié)雖是無(wú)菌操作，也將完全失去意義。無(wú)菌技術(shù)概念無(wú)菌環(huán)境

無(wú)菌環(huán)境是指人們用物理的或化學(xué)的方法，在某一可控的空間內(nèi)使微生物數(shù)量降低到最低限度，接近于無(wú)菌的一種空間。2008年5月20第二十頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日試驗(yàn)環(huán)境的要求及無(wú)菌操作

環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)室、檢查間分離。嚴(yán)格按無(wú)菌操作,防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染；避免操作者自身被微生物感染。無(wú)菌操作在有潔凈級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，與試驗(yàn)相關(guān)的金屬器械、玻璃器皿、稀釋劑等應(yīng)經(jīng)過(guò)滅菌處理；其他的材料應(yīng)經(jīng)過(guò)表面消毒、紫外線照射消毒后，再帶入實(shí)驗(yàn)室。2008年5月21第二十一頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日無(wú)菌技術(shù)技術(shù)培訓(xùn)和考核制度儀器和試劑的校對(duì)制度實(shí)驗(yàn)記錄制度結(jié)果質(zhì)疑和核對(duì)制度技術(shù)方法的規(guī)范制度實(shí)驗(yàn)室安全制度安全通則生物安全微生物檢驗(yàn)質(zhì)量控制制度2008年5月22第二十二頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日無(wú)菌技術(shù)菌種菌種保藏原理保藏的原則是根據(jù)微生物的菌種生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細(xì)胞的代謝強(qiáng)度，使細(xì)胞基本上處于休眠狀態(tài)，生長(zhǎng)繁殖受到抑制但又不至于死亡，以降低菌種的變異率。菌種保藏步驟選擇典型菌落確定菌體形態(tài)選擇保藏方法定期檢查方法主要原理適用的微生物包藏時(shí)間特點(diǎn)瓊脂斜面低溫保藏法低溫（4℃）廣泛1～6個(gè)月簡(jiǎn)便液體石蠟保藏法低溫，缺氧廣泛1年以上簡(jiǎn)便干燥（砂土）保藏法干燥，無(wú)營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)孢微生物1～10年簡(jiǎn)便有效冷凍真空干燥法干燥，缺氧、低溫廣泛5～10年復(fù)雜但有效液氮超低溫保藏法超低溫廣泛數(shù)十年復(fù)雜但有效菌種保藏方法2008年5月23第二十三頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日無(wú)菌技術(shù)瓊脂斜面低溫保存法方法適用范圍特點(diǎn)注意事項(xiàng)

將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面上，按規(guī)定的溫度和時(shí)間培養(yǎng)，待充分生長(zhǎng)后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種管用牛皮紙包好，4度冰箱保藏。每隔1個(gè)月移種一次，繼續(xù)進(jìn)行保藏。

本法適用與經(jīng)常使用的細(xì)菌、酵母菌等。（1）優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便，易推廣；一般不需要另選則保藏用培養(yǎng)基；對(duì)大多數(shù)都適用。（2）缺點(diǎn)：保藏期短；傳代次數(shù)多，易變異和污染。（1）保藏菌種的選擇。（2）定期檢查。（3）做好記錄。2008年5月24第二十四頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日無(wú)菌技術(shù)半固體石蠟保存法方法適用范圍特點(diǎn)注意事項(xiàng)

用石蠟讓培養(yǎng)物與空氣隔絕，以降低菌種的生理生化水平，并可防止水分蒸發(fā)，從而延長(zhǎng)菌種的保藏時(shí)間。

本法適用與部分霉菌、酵母菌和放線菌等，對(duì)細(xì)菌的效果較差。（1）優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便，易推廣。（1）液體石蠟的高度。（2）定期檢查。（3）做好記錄。2008年5月25第二十五頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日無(wú)菌技術(shù)斜面培養(yǎng)基接種技術(shù)方法左手持分離培養(yǎng)的平板培養(yǎng)基，右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰燒灼，冷卻后在平板上挑取菌落。左手立即放下平板，換持斜面培養(yǎng)基，用右手小指和無(wú)名指拔出管塞，夾持于手指之間。將管口在火焰上通過(guò)兩三次，但勿燒燙。再迅速將挑取有菌的接種環(huán)伸進(jìn)斜面內(nèi)，從斜面的底部向上劃一條接種線，又自下而上蜿蜒接種成曲線。退出接種環(huán)，塞上管塞。接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后放置。培養(yǎng)后，沿接種線長(zhǎng)出菌苔，非接種線的部位應(yīng)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。2008年5月26第二十六頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日無(wú)菌技術(shù)分離技術(shù)劃線分離法分段劃線法組段間接種環(huán)的滅菌、冷卻！2008年5月27第二十七頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日無(wú)菌技術(shù)金黃色葡萄球菌的保藏一般為凍干粉劑，安瓿瓶密封包裝。選擇性培養(yǎng)基分離菌種。增菌性培養(yǎng)選擇性培養(yǎng)基分離菌種。斜面接種、培養(yǎng)低溫保藏2008年5月28第二十八頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日無(wú)菌技術(shù)無(wú)菌器材實(shí)驗(yàn)器材滅菌器材消毒器材凡是檢驗(yàn)中使用的器材，能滅菌處理的，必須滅菌處理。如：玻璃器皿、吸管、培養(yǎng)基、稀釋劑、無(wú)菌衣、口罩等，在使用前必須經(jīng)過(guò)適當(dāng)方法滅菌，并在較潔凈的環(huán)境中保存?zhèn)溆?。凡檢驗(yàn)用器材無(wú)法滅菌處理的，使用前必須經(jīng)消毒處理。如：無(wú)菌室的桌凳、天平、工作臺(tái)以及工作人員的手等。2008年5月29第二十九頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日無(wú)菌技術(shù)無(wú)菌操作基本概念：無(wú)菌操作一般是指在無(wú)菌環(huán)境條件下，使用無(wú)菌制品或無(wú)菌器材進(jìn)行檢驗(yàn)或?qū)嶒?yàn)的過(guò)程中，能防止微生物污染與干擾的一種常規(guī)操作方法。操作目的：（1）保證檢驗(yàn)物品不被環(huán)境中的微生物的污染；（2）防止被檢微生物在操作中污染實(shí)驗(yàn)人員和實(shí)驗(yàn)環(huán)境。主要方面：（1）實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備（2）實(shí)驗(yàn)中的操作（3）意外事故的處理2008年5月30第三十頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日無(wú)菌技術(shù)進(jìn)入無(wú)菌室的控制1、定期檢查無(wú)菌環(huán)境的空氣是否符合規(guī)定；2、無(wú)菌室在使用前開(kāi)啟紫外線燈30~60min進(jìn)行空氣消毒；3、在進(jìn)行接種傾注瓊脂平板均需在無(wú)菌室超凈工作臺(tái)或接種罩內(nèi)操作3、檢查一切進(jìn)入無(wú)菌環(huán)境的器材滅菌、消毒的標(biāo)志物是否完備；4、洗手消毒：首先用肥皂涂在手上揉搓10～15s，肥皂雖不殺菌，有去污作用，然后用流水徹底沖洗，可有效除去手上大多數(shù)暫住菌，如連續(xù)洗2～3次(視手的污染程度)，使殘余的微生物減少到最低水平，再用消毒液洗手，如洗必泰、苯扎溴銨、碘伏、乙醇、過(guò)氧乙酸等。5、操作人員將手部消毒后，再穿戴無(wú)菌工作服(包括鞋、帽、口罩等)。嚴(yán)格的無(wú)菌服應(yīng)是戴帽套頭的無(wú)扣的上衣，頸部、臉部及袖口是緊口的，以保護(hù)身體，防止污染。一般的無(wú)菌衣是背開(kāi)口，圍胸部、緊扣頸部與長(zhǎng)袖緊口的，以保護(hù)身體，防止污染。6、在進(jìn)入無(wú)菌室后，進(jìn)一步用浸有消毒液的棉球或泡沫塑料物消毒手，然后可進(jìn)行檢驗(yàn)或?qū)嶒?yàn)操作。2008年5月31第三十一頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日無(wú)菌技術(shù)檢驗(yàn)過(guò)程的控制1、在所有操作中均不應(yīng)大幅度或快速動(dòng)作，以免攪動(dòng)空氣中塵埃微粒。2、使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放，避免破損，以防培養(yǎng)物擴(kuò)散。3、在近火焰區(qū)操作。4、使用金屬接種器具、用前、用后均需燃燒滅菌。5、應(yīng)用橡膠乳頭套在吸管上端，吸吹供試液或培養(yǎng)液等，切勿用嘴直接吸吹吸管。6、用注射器吸取樣品、培養(yǎng)物時(shí)，注射器內(nèi)應(yīng)無(wú)空氣；裝卸針頭時(shí)應(yīng)用滅菌的鑷子；從密封容器內(nèi)抽取液體時(shí)，應(yīng)注入無(wú)菌空氣；帶液體的針筒針頭應(yīng)向上傾斜，并用75%乙醇棉球(擠干)保護(hù)針頭根部；注射時(shí)勿用力過(guò)猛，以免內(nèi)容物噴出或針頭脫落使溢出液體污染滅菌器材或環(huán)境。7、當(dāng)滅菌瓶塞或試管塞掉落在工作臺(tái)上，一般不宜再用，應(yīng)另?yè)Q無(wú)菌塞，或通過(guò)火焰處理后再用。2008年5月32第三十二頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日無(wú)菌技術(shù)意外事故的控制1、假定無(wú)菌衣受污染，應(yīng)脫下翻轉(zhuǎn)包裹，使污染部分包在內(nèi)部，送往消毒，經(jīng)滅菌后，洗滌再用。2、因偶然打破盛有培養(yǎng)物的器皿，致使病原性的菌毒種外溢，污染了工作室及操作者的衣物及體表時(shí)，當(dāng)事人應(yīng)冷靜，切勿亂動(dòng)以免擴(kuò)大污染面。應(yīng)喚他人用浸透消毒液的毛巾或紗布覆蓋于碎片上，或?qū)⑾疽旱乖谖廴緟^(qū)，浸沒(méi)一定時(shí)間。先從外至內(nèi)逐步清理污染源，最后將衣物徹底滅菌。清理時(shí)應(yīng)避免用手指收集玻璃碎片，以防污染皮膚，造成病原性微生物感染事故。3、對(duì)一般小面積的污染可自行處理，較大范圍的污染則請(qǐng)人協(xié)助。2008年5月33第三十三頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日消毒滅菌技術(shù)消毒disinfection消毒基本概念：消毒是殺滅清除傳播媒介上病原微生物。但不能殺死芽孢等全部微生物。所以消毒是不徹底的，不能代替滅菌。消毒方法：見(jiàn)下頁(yè)滅菌sterilization滅菌基本概念：凡能殺滅物體中所有活的微生物的作用稱為滅菌。常用滅菌方法：濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法等。2008年5月34第三十四頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日消毒滅菌技術(shù)消毒劑消毒原理常用濃度備注乙醇蛋白質(zhì)變性、溶解細(xì)胞70%～75%能迅速殺死細(xì)菌繁殖體，對(duì)一般病毒有一定的消毒作用。一般用95%乙醇稀釋成70%～75%的乙醇溶液，常用于皮膚消毒。市售或自配的75%乙醇并非無(wú)菌洗必太0.1%～0.5%消毒器械，0.05%用于皮膚、黏膜和沖洗傷口。難溶于水，常制成葡萄糖酸鹽、鹽酸鹽、醋酸鹽使用，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌、陰性菌均有殺菌作用，但對(duì)前者作用較強(qiáng)。0.5%的洗必太與70%的乙醇混合用，比單一用一種殺菌效果好。不能與肥皂、洗衣粉、其他陰離子物質(zhì)、升汞合用過(guò)氧乙酸蛋白質(zhì)沉淀0.5%皮膚消毒廣譜消毒劑。能殺死細(xì)菌繁殖體、芽孢、真菌與某些病毒，對(duì)空氣、皮膚和食品消毒常用，0.2%～0.5%用于塑料、織物、等消毒；用1g/m3熏蒸，過(guò)氧乙酸產(chǎn)生的蒸汽，對(duì)空氣的消毒效果很好。碘伏鹵化作用市售碘伏為0.75%、10%、7.5%、5%、1%廣譜殺菌劑，對(duì)革蘭陽(yáng)性、陰性菌類、炭疽芽孢菌均有殺滅作用。來(lái)蘇(甲酚肥皂液)損傷細(xì)胞膜2%2%水溶液可用于皮膚消毒來(lái)蘇比苯酚的殺菌作用強(qiáng)，有毒性，消毒手后有麻木感2008年5月35第三十五頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日消毒滅菌技術(shù)儀器準(zhǔn)備和包裝滅菌方法時(shí)間濕度(℃)濾器用洗碟機(jī)清洗，分別放在不銹鋼小車上高壓滅菌40min121擦凈劑用棕色紙包在原包裝上高壓滅菌40min121金屬試管架放在不銹鋼小車上高壓滅菌40min121鑷子、刮刀插在試管里，塞塞子，放入玻璃紙信封，封口烘箱干熱滅菌高壓滅菌4h不少于15min205121吸管(移液管)用清潔器清洗，烘干，分別放入金屬筒中烘箱干熱滅菌4h205燒杯清洗，用箔封口烘箱干熱滅菌4h20510ml、20ml帶螺旋帽的小瓶置不銹鋼小車上高壓滅菌不少于15min1210.45μm微孔濾膜的濾器按原包裝或從原包裝移去濾器置玻璃培養(yǎng)皿內(nèi)高壓滅菌15min1212008年5月36第三十六頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)培養(yǎng)基水分炭源氮源無(wú)機(jī)鹽類生長(zhǎng)因子凝固劑其他培養(yǎng)基的概念培養(yǎng)基是人工配制的生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，即用人工的方法將多種物質(zhì)按各種微生物生長(zhǎng)繁殖的需要配成的一種混合營(yíng)養(yǎng)物。培養(yǎng)基的主要成份培養(yǎng)基的分類培養(yǎng)基形態(tài)用途成份固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基等天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基2008年5月37第三十七頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)培養(yǎng)基制備常用儀器的準(zhǔn)備平皿用紙或者布包好，或裝在金屬盒內(nèi)，于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干。試管試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好，用布或報(bào)紙包好，于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干。移液管先用少許棉花塞于吸口端，然后用紙包好或裝入金屬吸管筒內(nèi)，于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干。2008年5月38第三十八頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)培養(yǎng)基制備溶化校正酸堿度熱過(guò)濾分裝滅菌（1）先將卵磷脂加入少量蒸餾水低溫加熱溶解溶、再加吐溫80混勻，，加入瓊脂，靜置15分鐘。高壓滅菌前培養(yǎng)基的pH可比最終pH值調(diào)高0.2左右，滅菌后基本合適。營(yíng)養(yǎng)瓊脂：調(diào)PH7.1-7.4營(yíng)養(yǎng)瓊脂一般采用121℃、103.42kPa蒸汽滅菌30min。液體培養(yǎng)基用濾紙過(guò)濾，固體培養(yǎng)基用紗布?jí)K中夾薄層脫脂棉過(guò)濾2008年5月39第三十九頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日細(xì)菌計(jì)數(shù)基本概念

細(xì)菌數(shù)測(cè)定是微生物的定量檢查，對(duì)非規(guī)定滅菌產(chǎn)品中污染的活菌數(shù)量進(jìn)行測(cè)定，通常以每克或每毫升供試品作為計(jì)量單位。限制條件

平板菌落計(jì)數(shù)法的特點(diǎn)是先使細(xì)胞分散、定位，增生可見(jiàn)菌落后計(jì)數(shù)。它是一種有條件的計(jì)數(shù)法，其限制條件大致如下：⑴以菌落數(shù)為基礎(chǔ)。

CFU(colonyformingunits):一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌形成單位，它可以由一個(gè)也可以由多個(gè)菌細(xì)胞形成。⑵受特定培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件限制。⑶有繁殖能力的菌細(xì)胞才能認(rèn)定“活菌”。2008年5月40第四十頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日初始污染菌檢測(cè)初始污染菌檢測(cè)：目前使用標(biāo)準(zhǔn)GB15980（一次性使用醫(yī)療衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)）。本標(biāo)規(guī)定了一次性使用醫(yī)療用品滅菌、消毒前、后的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)對(duì)一次性使用醫(yī)療用品（包括滅菌的和消毒的一次性使用醫(yī)療用品）生產(chǎn)、裝配，包裝車間等生產(chǎn)過(guò)程和生產(chǎn)工人手提出衛(wèi)生的質(zhì)量控制。引用標(biāo)準(zhǔn)：GB7918.2、GB8368、GB8369、中華人民共和國(guó)藥典。2008年5月41第四十一頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日初始污染菌檢測(cè)指標(biāo)含義測(cè)定檢品細(xì)菌總數(shù)可用來(lái)判明檢品細(xì)菌污染的程度，以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)人員的衛(wèi)生狀況，是對(duì)檢品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。方法主要步驟采樣供試液制備培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)2008年5月42第四十二頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日初始污染菌檢測(cè)采樣方法供試液制備供試品是敷料、可以破壞性類可用無(wú)菌手續(xù)稱取10g,放入100ml滅菌生理鹽水中充分振蕩后取樣。作為1：10的供試液。2.供試品是液體取10ml加至100ml滅菌生理鹽水中充分振蕩后取樣。作為1：10的供試液。3.對(duì)供試品不能采用破壞性取樣可用浸有無(wú)菌生理鹽水拭子涂抹采樣，被采表面積為100cm2.加入滅菌生理鹽水100ml。作為1：10的供試液。4.可用破壞性方法取樣供試品：（參照中華人民共和國(guó)藥典2005年規(guī)定進(jìn)行)5、采樣數(shù)量：各類產(chǎn)品每批隨機(jī)抽取10件樣品。6、檢驗(yàn)方法：將每樣取5份平行樣，參照GB7918.2規(guī)定進(jìn)行。

2008年5月43第四十三頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日初始污染菌檢測(cè)7、結(jié)果計(jì)算公式：

平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)菌數(shù)菌數(shù)/每件次（或g）=———————————————————

件次或重量（g）注意事項(xiàng)：

供試品的取樣必須在萬(wàn)級(jí)環(huán)境中100級(jí)凈化條件下，無(wú)菌操作，防止污染。應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，同時(shí)消除抑菌成份的干擾。2008年5月44第四十四頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日初始污染菌檢測(cè)供試液制備推薦的制備方法樣品制備供試液制備梯度稀釋加樣用滅菌剪刀將紗布剪成小塊，稱取10g，移入100ml稀釋劑中，保溫于45℃水浴中5～10min，不時(shí)振搖。作為1：10供試液。供試液10倍遞減稀釋。盡量避免絲線等雜物的混入。（1）每個(gè)稀釋級(jí)各吸取1ml至每個(gè)滅菌平皿，每個(gè)稀釋級(jí)注2個(gè)平皿。（2）經(jīng)滅菌完畢的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基冷卻至45-50℃時(shí)，傾注上述各個(gè)平皿15ml，另傾注一個(gè)不加樣品滅菌空平皿作空白對(duì)照。以順時(shí)針或逆時(shí)針?lè)较蚩焖俎D(zhuǎn)動(dòng)平皿，使供試液與培養(yǎng)基充分混勻。紗布模擬2008年5月45第四十五頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日初始污染菌檢測(cè)梯度稀釋1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml供試液9mlNacl9mlNacl1:10 1:100 1:1000 2008年5月46第四十六頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日平皿號(hào)細(xì)菌數(shù)平行行間1：101:100空白對(duì)照37℃48h菌落計(jì)數(shù)37℃48h菌落計(jì)數(shù)1＃2＃1＃2＃ⅠⅡⅢⅣⅤ菌落均值2008年5月47第四十七頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日初始污染菌檢測(cè)培養(yǎng)將已經(jīng)凝固的平板倒置于37℃培養(yǎng)箱中，一般培養(yǎng)48±2h。菌落計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)方法：將平板置菌落計(jì)數(shù)器或從平板的背面直接以肉眼用標(biāo)記筆點(diǎn)計(jì)，以投射光襯以暗色背景，仔細(xì)觀察，計(jì)數(shù)。必要時(shí)可以借助于放大鏡、菌落計(jì)數(shù)器。菌落特征：⑴形態(tài)特征：常為白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黃色（如果培養(yǎng)基中加入0.1%TTC試劑，菌落為紅色）⑵邊緣整齊或不整齊，表面有光滑、粗糙，皺褶、突起或扁平。⑶大小差異很大。2008年5月48第四十八頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日初始污染菌檢測(cè)菌落計(jì)數(shù)菌落計(jì)數(shù)基本規(guī)則1、選取平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋級(jí)作為報(bào)告菌落數(shù)測(cè)定范圍。如只有1個(gè)稀釋級(jí)平均菌落數(shù)在30～300之間，則將稀釋級(jí)的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。2、如有兩個(gè)相鄰稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)在30～300之間，則先計(jì)算兩稀釋級(jí)菌落數(shù)的比值。高稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)比值=————————————————————低稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)當(dāng)比值≤2時(shí)，則以2個(gè)稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)均值報(bào)告。當(dāng)比值>2時(shí)，則以低稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。3、如各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均在300以上，則按最高平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；如各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均在30以下，則按最低平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。2008年5月49第四十九頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日初始污染菌檢測(cè)菌落計(jì)數(shù)菌落計(jì)數(shù)基本規(guī)則4、如各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均不在30～300之間，則以最接近30或300的稀釋級(jí)平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。5、如各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均無(wú)菌落生長(zhǎng)或最低稀釋級(jí)平均菌落數(shù)小于1時(shí)，應(yīng)報(bào)告菌數(shù)為<10個(gè)/g或ml。6、如有3個(gè)稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均在30～300之間，則以后2級(jí)計(jì)算級(jí)間比值報(bào)告。7、菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告，菌落數(shù)在10以內(nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)值報(bào)告。大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)值后面，應(yīng)以四舍五入法計(jì)算。在報(bào)告菌落數(shù)為“不可計(jì)”時(shí)，應(yīng)表明樣品的稀釋度。2008年5月50第五十頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日初始污染菌檢測(cè)菌落計(jì)數(shù)細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果及報(bào)告方法例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩稀釋度菌數(shù)之比菌落總數(shù)個(gè)/g或個(gè)/ml報(bào)告方式個(gè)/g或個(gè)/ml10-110-210-31136516420－1640016000或1.6×10422760295461.63800038000或3.8×10432890271602.22710027000或2.7×1044不可計(jì)4650513－513000510000或5.1×105527115－270270或2.7×1026不可計(jì)30512－3050031000或3.1×1042008年5月51第五十一頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日控制菌的檢查:參照《藥典》2005版、GB15979-2002

1.大腸埃希菌

BL增菌培養(yǎng)→MUG培養(yǎng)→靛基質(zhì)試驗(yàn)

具體檢查見(jiàn)表1：結(jié)果判斷MUG陽(yáng)性、靛基質(zhì)陰性，或MUG陰性、靛基質(zhì)陽(yáng)性，則應(yīng)取膽鹽乳糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)物劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)18～24小時(shí)。若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)、或生長(zhǎng)的菌落與表3所列的菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出大腸桿菌。若有可疑菌落，進(jìn)行IMVic。2008年5月52第五十二頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日表3大腸埃希菌菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)曙紅亞甲藍(lán)瓊呈紫黑色,淺黑色,藍(lán)紫色或粉色,菌落中心呈深紫色或無(wú)明顯暗色中心,圓形,稍凸起,邊緣整齊,表面光滑,濕潤(rùn),常有金屬光澤.麥康凱瓊脂鮮桃紅色或微紅色,菌落中心呈深桃紅色,圓形,扁平,邊緣整齊,表面光滑.2008年5月53第五十三頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日表1大腸桿菌的檢查試驗(yàn)組培養(yǎng)基加入培養(yǎng)時(shí)間h5mlMUG培養(yǎng)基5h、24h366nm紫外燈觀察24h后加入靛基質(zhì)供試品陽(yáng)性對(duì)照膽鹽乳糖培養(yǎng)基100ml10ml供試液+50～100cfu大腸24-480.2ml有熒光玫瑰紅供試品10ml供試液0.2ml無(wú)熒光試劑本色陰性對(duì)照10ml稀釋劑0.2ml無(wú)熒光試劑本色2008年5月54第五十四頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日表2結(jié)果判斷MUG-I麥康凱培養(yǎng)基IMVic結(jié)果++檢出大腸桿菌--未檢出+-無(wú)菌生長(zhǎng)未檢出-+無(wú)菌生長(zhǎng)未檢出+-有菌生長(zhǎng)-+--檢出大腸桿菌-+有菌生長(zhǎng)++--檢出大腸桿菌2008年5月55第五十五頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.金黃色葡萄球菌

營(yíng)養(yǎng)肉湯增菌培養(yǎng)→平板（高鹽）劃線培養(yǎng)→觀察→血漿凝固酶試驗(yàn)

具體檢查方法見(jiàn)表3：2008年5月56第五十六頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日表3金黃色葡萄球菌的檢查試驗(yàn)組培養(yǎng)基加入培養(yǎng)時(shí)間h再培養(yǎng)結(jié)果供試品陽(yáng)性對(duì)照營(yíng)養(yǎng)肉湯100ml10ml供試液+50～100cfu金葡18～24小時(shí)，必要時(shí)可延至48小時(shí)劃線接種于卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基或甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)24～72小時(shí)。典型菌落生長(zhǎng)供試品10ml供試液?陰性對(duì)照10ml稀釋劑無(wú)菌落生長(zhǎng)2008年5月57第五十七頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日表4金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)特征

培養(yǎng)基菌落形態(tài)卵黃氯化鈉瓊脂金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有卵磷脂分解的乳濁圈，菌落直徑1～2mm。甘露醇氯化鈉瓊脂金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有黃色環(huán)，菌落直徑0.7～1mm。

平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落不同于表4所列特征，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。平板上生長(zhǎng)的菌落與表4所列的菌落特征相符或疑似，應(yīng)挑選2～3個(gè)菌落，分別接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)18～24小時(shí)。取營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭染色，并接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24小時(shí)，作血漿凝固酶試驗(yàn)。2008年5月58第五十八頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日表5金黃色葡萄球菌鑒定鑒定方法結(jié)果革蘭氏染色G+球菌，呈葡萄狀排列無(wú)芽孢、無(wú)莢膜血漿凝固酶試驗(yàn)(玻片法)陽(yáng)性對(duì)照管血漿凝固應(yīng)為陽(yáng)性可疑菌株培養(yǎng)液若血漿凝固者則檢出金葡菌陰性對(duì)照管血漿應(yīng)流動(dòng)自如2008年5月59第五十九頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日3.銅綠假單胞菌增菌培養(yǎng)→平板劃線培養(yǎng)→觀察

具體檢查方法見(jiàn)表8：2008年5月60第六十頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日表5銅綠假單胞菌的檢查（一）試驗(yàn)組培養(yǎng)基加入培養(yǎng)時(shí)間h培養(yǎng)基結(jié)果供試品陽(yáng)性對(duì)照膽鹽乳糖培養(yǎng)基100ml10ml供試液+50～100cfu綠膿18~24h，必要時(shí)延長(zhǎng)至48h劃線接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)18～24小時(shí)典型菌落供試品10ml供試液?陰性對(duì)照10ml稀釋劑無(wú)菌落生長(zhǎng)2008年5月61第六十一頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日

菌落特點(diǎn):銅綠假單胞菌典型菌落呈扁平、無(wú)定形、周邊擴(kuò)散、表面濕潤(rùn)，灰白色，周圍時(shí)有藍(lán)綠色素?cái)U(kuò)散。如供試品平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落與上述菌落特征不符，判供試品未檢出銅綠假單胞菌。如平板生長(zhǎng)的菌落特征與上述菌落特征相符或疑似，應(yīng)挑選2～3個(gè)菌落，分別接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)18～24小時(shí)。取斜面培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭染色，鏡檢及氧化酶試驗(yàn)。2008年5月62第六十二頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.沙門菌試驗(yàn)組培養(yǎng)基加入培養(yǎng)時(shí)間h結(jié)果供試品陽(yáng)性對(duì)照營(yíng)養(yǎng)肉湯100ml10ml供試液+50～100cfu沙門菌18~24h，必要時(shí)延長(zhǎng)至48h下面試驗(yàn)?供試品10ml供試液陰性對(duì)照10ml稀釋劑無(wú)菌落生長(zhǎng)表6沙門菌的檢查（一）2008年5月63第六十三頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日菌的名稱試驗(yàn)名稱培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)間h結(jié)果沙門菌1mL試液加入四硫酸鈉亮綠培養(yǎng)基10mL中劃線接種膽鹽乳酸瓊脂和麥康凱瓊脂18～2418～24無(wú)菌或特征不符，判斷未檢出有菌生長(zhǎng)或可疑菌做三鐵糖2～3菌落接種三鐵糖瓊脂培養(yǎng)基、穿刺高層接種18～24斜面未見(jiàn)紅色、底層未見(jiàn)黃色；或斜面黃色、底層無(wú)黑色。判未檢出。否則取三鐵糖斜面培養(yǎng)物繼續(xù)做下面試驗(yàn)及血清凝集試驗(yàn)。靛基質(zhì)試驗(yàn)蛋白胨水培養(yǎng)基24靛基質(zhì)數(shù)滴陽(yáng)性：液面玫瑰紅色陰性：試劑本色表7沙門菌的檢查（二）2008年5月64第六十四頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日沙門菌脲酶試驗(yàn)?zāi)蛩嘏囵B(yǎng)基24陽(yáng)性：斜面變紅色陰性：不變色氰化鉀試驗(yàn)各一環(huán)氰化鉀培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基24～48對(duì)照管有菌生長(zhǎng)，試驗(yàn)管有菌生長(zhǎng)是陽(yáng)性賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基24～48對(duì)照管應(yīng)為黃色，試驗(yàn)管紫色為陽(yáng)性，黃色為陰性動(dòng)力檢查穿刺半固體培養(yǎng)基24細(xì)菌沿穿刺外周擴(kuò)散生長(zhǎng)為動(dòng)力陽(yáng)性。陽(yáng)性培養(yǎng)物在室溫保存2~3d再觀察2008年5月65第六十五頁(yè)，共七十八頁(yè)，編輯于2023年，星期日表9沙門菌菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)膽鹽硫乳瓊脂無(wú)色至淺橙色，半透明，菌落中心帶黑色或全部黑色或無(wú)黑色。沙門、志賀菌屬瓊脂無(wú)色至淡紅色，半透明或不透明，菌落中