cn.0a一種高效的三七總皂苷注射劑及其制備方法

(19)中民國(guó)家知識(shí)

(21)(22)））地址543000廣西壯族梧州市工業(yè)園區(qū)工業(yè)大道1號(hào)(72)發(fā)明人 (74)專利機(jī)構(gòu)路浩知識(shí)有公司

(10)申請(qǐng)公布號(hào) (43)A61K31/704人36/2589/089/149/199/00權(quán)利要求書1說(shuō)明書19本發(fā)明公開了一種高效的三七總皂苷注射劑及其方法，該注射劑中含有以下重量百分比的活性成分19.5-150R137.056.0Re5.0-8.參皂苷Rb121.0-32.0Rd不低于0.45A1.5-3.5∶1。經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，符合本發(fā)明三醇AA權(quán)利要求1/1三七皂苷R19.5-15.0％、人參皂苷Rg137.0-56.0％、人參皂苷Re Rb121.0-32.0％、人參皂苷Rd不低于0.45％，且三七三醇苷與三七二醇苷的重量比為1.5-3.5∶1。2.0-3.512.5-3.51取三七用乙醇2-5每次2-2050-95％的乙1-5小時(shí)，合并提取1ml含生藥0.5-1g加氯化鈉0.5-10BV/h0.5-30.1％氫氧化鈉溶液洗脫，流速0.5-15BV/h，洗脫液棄10％乙醇液洗45-49.5％的乙醇洗脫大孔吸附樹脂控制在10-40乙醇提取2-4次，每次加8-12倍60-80％的乙次提取2-5并提取液，濾過(guò)，取濾液回收乙醇至無(wú)醇減壓濃縮成每1ml含生藥約0.5-1g加氯化鈉使取濾液加0.3-0.6％的枸櫞1-8倍三七重量的大孔吸附樹5.0BV/h1-30.1％氫氧化鈉溶液以1-6BV/h的流速洗脫，洗脫液棄去，再分別用3BV1045-49.5％ A說(shuō)明1/19一種高效的三七總皂苷注射劑及其方[0002]三七總皂苷是臨用于治療心腦血管疾病的一種常用藥。目前用于治療心腦血下表： Rb1(C54H92O23Rd(C48H82O18 三七三醇苷主要含人參皂苷Rg1(C42H72O14Re(C48H82O18R1(C47H80O18) 說(shuō)明書A2/194說(shuō)明書A2/1941.08879∶1.029915∶1.085787∶1.25049∶1.096497∶0.695569∶0.864894∶0.758933∶0.809495∶0.809332∶0.854163∶[0013]國(guó)家法定三七總皂苷注射劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雖然對(duì)三七三醇苷與三七二醇苷比例沒(méi)二醇苷實(shí)際比例在0.6-1.31之間。[0014]現(xiàn)有的三七總皂苷是從三七原料中提取得到，三七總皂苷中各皂苷的成分組成比 本發(fā)明提供的一種三七總皂苷注射劑，含有以下重量百分比的活性成分：Rb121.0-32.0Rd不低于0.451.5-3.5∶1。 1-5小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，取濾液回收乙醇至無(wú)濃縮成1ml含生藥0.5- 2)0.1-1.0％0.5-10 [0030]2)0.3-0.6％1-8速為0.5-5.0BV/h0.5-3度為0.1％氫氧化鈉溶液洗1-6BV/h液棄去再分別用純化水洗脫至中洗脫液棄去3BV濃度為10％乙醇溶液洗柱洗脫液棄去45-49.5％的乙醇洗脫大孔吸附樹脂收集洗脫液吸附脫色，65以下減壓回收溶劑并濃縮至在60℃時(shí)相對(duì)密度為1.05-1.203)按照注射劑的常規(guī)方法將三七總皂苷制成三七總皂苷注射劑[0040]三七三醇苷主要是溶解在低濃度的乙醇，三七二醇苷主要溶解在高濃度的乙醇[0042] 與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明提供的提取方法主要區(qū)別在于三七總皂苷過(guò)程中，因?yàn)槿呷架斩嗳苡诘投纫掖既叨架斩嗳苡诟哂?0％的乙醇使用45-49.5％的乙醇洗脫大孔樹脂吸附的三七總皂苷可以得到三七三醇苷比例較高的三七總皂苷。[0043] 2本發(fā)明中對(duì)三醇苷和二醇苷比例進(jìn)行協(xié)調(diào)經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)符合本發(fā)明三醇苷和二醇苷比例的三七總皂苷注射劑治療瘀血阻絡(luò)中風(fēng)偏癱胸痹心痛及視網(wǎng)膜靜脈阻塞癥等心腦血管疾病時(shí)效果更好且優(yōu)于與其他方法的過(guò)高的三七三醇苷或過(guò)高的三七二醇苷及其重量比在不在本發(fā)明1.5-3.5∶1范圍內(nèi)的注射劑。 內(nèi)血栓所致有顯著的保護(hù)作用 合并液回收乙醇至無(wú)減壓濃縮1ml含生藥約05g加氯化鈉[0055]0.1％0.5[0057]1ml150mg，冷凍干燥，分裝，B按下表進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算6000Rg1Re1.5。 [0065]R110.5Rg137.0Re為6.2人參皂苷Rb132.0％皂苷Rd3.5％。R1皂苷Rg1人參皂苷Re人參皂苷Rb1人參皂苷Rd總量為89.2％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝1.51。[0066]實(shí)施例2[09]1.0％100.BV0.115BV/h3BV10％縮至在60℃時(shí)相對(duì)密度為1.20的清膏低溫干燥得三七總皂苷(收率是10％)。 2粉針劑的方法： 醇苷＝2.5∶1。 合并液回收乙醇至無(wú)減壓濃縮1ml含生藥約06g加氯化鈉[0077]取濾液加1.0％的枸櫞酸鈉，過(guò)31.0BV/h3BV濃度0.1％氫氧化鈉流速為5BV/h再用純化水洗柱，至流出液為中液棄去；再用3BV10％乙醇溶液洗洗脫液棄去48％乙醇洗 1R19.5Rg1醇苷＝2.0∶1。 [0085]取濾液加0.6％8倍三七重量的大孔吸附樹脂柱吸附，流速為10BV/h2BV濃度為0.1％氫氧化鈉流速為15BV/h洗脫液棄去；再用純化水洗柱至流出液為中3BV10％乙醇溶液洗脫液棄去46％乙醇洗脫大孔吸附樹 醇苷＝3.5∶1。 1R110.2Rg1為醇苷＝2.6∶1。 醇苷＝2.3∶1。 3BV的10％乙醇溶液洗液棄去46％乙醇洗脫大孔吸附樹脂吸附脫65以下減壓回收溶并濃縮至在65℃時(shí)相對(duì)密度為1.15的清膏低溫干三七總皂苷(收率是7.5％)。[0111]1ml150mg，除菌濾過(guò)，凍干， 醇苷＝2.6∶1。[0114] 從背景技術(shù)市場(chǎng)的三七總皂苷注射劑實(shí)際檢驗(yàn)數(shù)可以看到血塞通射劑與血栓通注射劑相比三七三醇苷的含量比例是偏低的其原因在于三七提取以及大孔樹脂洗脫時(shí)使用的乙醇濃度比較高。由此發(fā)明人參照血塞通注射劑三七總皂苷的提取方法了對(duì)比例1-4三七三醇苷含量比例比較低的樣品作為實(shí)施例的對(duì)照用藥物。[0115] 對(duì)比例1三七總皂苷的提取方法(參照血塞通注射劑的三七總皂苷提取方法)[0116] 1提取方法： 取濾液加0.6％的枸櫞酸鈉，過(guò)8倍三七重量的大孔吸附樹脂柱吸附，流速為10BV/h0.5BV濃度為0.1％氫氧化鈉溶液洗流速為15BV/h洗脫液棄去；再用純化水出液為3BV10％乙醇溶液洗脫液棄去；用50-80依次洗脫的乙醇濃度分別為50556065707580％)的乙醇梯度洗脫大孔吸附樹洗脫液，吸附脫65減壓回濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度1.10的清膏，低溫干燥，6％)。 [0122]方法同實(shí)施例1，本品按干燥品計(jì)算，三七皂苷R19.8Rg1醇苷＝1.25∶1。 [0126]取濾液加0.6％8倍三七重量的大孔吸附樹脂柱吸附，流速為10BV/h0.5BV濃度為0.1％氫氧化鈉溶液以15BV/h流速洗液棄去再用純化水洗至流出液為中3BV量10％乙醇溶液棄去；用50-80％(依次洗脫的乙醇濃度分別為50556065707580％)的乙醇梯度洗脫大孔吸附樹吸附脫65減壓回濃縮至在60℃時(shí)相對(duì)密度為1.15的清燥，7％)。[0127]2、粉針劑的方法： 1R19.6Rg1醇苷＝1.11∶1。 [0134]取濾液加0.8％8倍三七重量的大孔吸附樹脂柱吸附，流速為10BV/h0.5BV濃度為0.1％氫氧化鈉溶液洗流速為15BV/h洗脫液棄去；再用純化水出液為中性，再用3BV10％乙醇溶液洗脫液棄去50-80％(依次洗脫的乙醇濃度分別為50556065707580％)的乙醇梯度洗脫大孔吸附樹脂收集洗脫附脫色，65下減壓回收溶60℃時(shí)相對(duì)密度為1.2低溫干燥，得7％)。[0136]1ml150mg，冷凍干燥，分裝，[0138]方法同實(shí)施例1，本品按干燥品計(jì)算，三七皂苷R18.3Rg128.3Re34人參Rb137.8Rd10.1％。三七皂苷R1人參皂苷Rg1ReRb1Rd總量為87.9％。三七三醇苷∶三七二醇苷＝0.84∶1。[0142]取濾液加0.5％8倍三七重量的大孔吸附樹脂柱吸附，流速為10BV/h0.5BV濃度為0.1％氫氧化鈉溶液洗流速為15BV/h洗脫液棄去；再用純化水出液為中性，再用3BV10％乙醇溶液洗脫液棄去50-80％(依次洗脫的乙醇濃度分別為50556065707580％)的乙醇梯度洗脫大孔吸附樹脂收集洗脫附脫色，65下減壓回收溶60℃時(shí)相對(duì)密度為1.2低溫干燥，得8％)。 1R19.8Rg1醇苷＝0.96∶1。1 ，證號(hào)：SCXK桂2009-0002)，SPF級(jí)SD大鼠，150-200g性自南方醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)SCXK)2006-0015)。，[0157]3 模型。于栓塞2h時(shí)不再麻醉拔出24h處死動(dòng)物。模型成功的標(biāo)志是動(dòng)物蘇[0163]3.1.3[0164]3.1.3.1[0165]Longa-Zea524h01[0166]3.1.3.2斷頭取全腦速凍15min經(jīng)視交叉水平行冠狀切片(共ABCDE5個(gè)腦腦片厚度約2mm)，C片常規(guī)做石蠟做免疫組化和HE其余腦片置于2％TTC磷酸鹽緩沖液中避光，37℃恒溫溫育30min10后固定正常腦組織著深紅色梗死腦組織不?？偯娣e按：[(各片正梗死面積之和/2)×片厚]/[(各片正總面積之和/2)×片厚]]×100％計(jì)算出梗死體積/大腦體積百作統(tǒng)計(jì)分析。其中C片腦片正BD [0169]采用濕-干對(duì)腦水腫進(jìn)行定量。腦缺血2h再灌注24小時(shí)后迅速取出腦組織 (3 l0m藍(lán)ventricleLV)riskAARsizeISIS/AAR重量百分比為心肌梗死范圍。[0179]缺血面積百分比(AAR/LV)＝(缺血面積/面積)×100％[0180](IS/AAR)＝)×100％[0181]3.3 施例34實(shí)施例5組、實(shí)施例67組，每組10只，藥物組按0.1ml/10g體重尾靜脈注射受試藥物2次，間30min一次，模型組注射等體積生理鹽水(NS)。末次給藥30min后，尾靜脈注射膠原蛋白與腎上腺素聯(lián)合混合誘導(dǎo)劑(膠原蛋白90ug/只，腎上腺素9ug/只)，注射后立即觀察5min之內(nèi)小鼠數(shù)計(jì)算藥物對(duì)小鼠腦血栓的保護(hù)率，X2 [0184]采用SPSS12.0進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示組間比較用t檢驗(yàn)(方差不齊時(shí)采用t檢驗(yàn)校正 表2對(duì)大鼠神經(jīng)行為學(xué)的影響(n＝ n1.80±0.77##※△1.15±0.37##※△1.70±0.80##※△1.45±0.60##※△1.20±0.41##※△1.65±0.67##※△1.25±0.55##※△0.05##P1組相比，P0.05與對(duì)比2組相比△P＜0.05與對(duì)比例3組相比，$P＜0.05與對(duì)4組相比，&P0.05。[0191]3(n＝10，)n18.79±1.64##※△18.13±1.80##※△18.36±1.70##※△17.45±1.89##※△18.61±1.45##※△18.02±1.67##※△17.10±1.59##※△比1組相比，P0.05與對(duì)比2組相比△P＜0.05與對(duì)比例3組相比，$P＜0.054比，&P0.05。[0194]4(n＝10，)n80.16±1.98##※△79.01±1.90##※△80.01±2.09##※△78.82±2.63##※△80.30±1.89##※△78.91±1.74##※△78.60±1.71##※△比1組相比，P0.05與對(duì)比2組相比△P＜0.05與對(duì)比例3組相比，$P＜0.054比，&P0.05。[0198]2-4 度并減少腦梗死體積(P0.05，P0.01) 671(P0.05)。[0202]由此可見本發(fā)明提供的藥物能縮小局灶性腦缺血損傷所造成的腦組織梗死范圍，5(n＝)組劑量n假手術(shù) △0.05對(duì)比4&P0.05 (P0.05，P0.01)； 少(P＜0.05)。 4.2.2對(duì)大鼠CK及LDH值的影響見表6 表6對(duì)CK及LDH值的影響(n＝10，)n1502.9±171.0##※△1326.8±160.7##※△1580.