抗生素類藥物的分析

關(guān)于抗生素類藥物的分析第一頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一第一節(jié)概述抗生素的定義

在低微濃度下即可對(duì)某些生物（病原微生物）的生命活動(dòng)有特異抑制作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱抗生素是細(xì)菌、放線菌和真菌等微生物的代謝產(chǎn)物，對(duì)各種病原微生物有強(qiáng)大的抑制或殺滅作用。第二頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一一、抗生素類藥物的特點(diǎn)1.化學(xué)純度低同系物多、異構(gòu)體多、降解物多2.活性組分易發(fā)生變異微生物菌株的變化、發(fā)酵條件改變3.穩(wěn)定性差分子結(jié)構(gòu)大多不穩(wěn)定，降解后療效下降、失效或增加毒副作用第三頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一二、抗生素類藥物的質(zhì)量分析（一）鑒別試驗(yàn)1.化學(xué)方法利用某些官能團(tuán)的特性，利用適當(dāng)?shù)脑囈号c其反應(yīng)顯色2.物理化學(xué)方法紫外分光光度法、紅外分光光度法3.生物學(xué)方法特異的酶反應(yīng)第四頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一二、抗生素類藥物的質(zhì)量分析（二）雜質(zhì)檢查1.影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的指標(biāo)水分、酸堿度、干燥失重2.控制有機(jī)、無(wú)機(jī)雜質(zhì)的指標(biāo)溶液的澄清度與顏色、重金屬、殘留溶劑、熾灼殘?jiān)?.與臨床安全性密切相關(guān)的指標(biāo)熱源、細(xì)菌內(nèi)毒素、無(wú)菌、降壓物質(zhì)4.其他指標(biāo)β-內(nèi)酰胺類抗生素：聚合物第五頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一（三）含量測(cè)定或效價(jià)測(cè)定1.微生物檢定法以抗生素對(duì)微生物的殺傷或抑制程度為指標(biāo)來(lái)衡量抗生素效價(jià)的一種方法。第六頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一（三）含量測(cè)定或效價(jià)測(cè)定1.微生物檢定法優(yōu)點(diǎn)1、靈敏度高、需用量小、測(cè)定結(jié)果直觀2、測(cè)定原理與臨床一致，適用范圍廣3、同一類型的抗生素?zé)o需分離，一次測(cè)定總效價(jià)缺點(diǎn)1、操作繁瑣2、培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)3、測(cè)定誤差大第七頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一2.理化方法適用于提純的以及化學(xué)結(jié)構(gòu)已確定的抗生素優(yōu)點(diǎn)1.操作簡(jiǎn)單、省時(shí)、方法準(zhǔn)確2.專屬性1.不一定代表生物效價(jià)缺點(diǎn)2.易受雜質(zhì)干擾第八頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一3.抗生素活性表示方法效價(jià)：每ml或每mg中含有某種抗生素的有效成分的多少第九頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一三、抗生素的分類（按結(jié)構(gòu)與性質(zhì)）：

β–內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素類、其他抗生素類第十頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一第二節(jié)β–內(nèi)酰胺類抗生素

青霉素類第十一頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一頭孢菌素類第十二頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一青霉素（青霉素G、芐青霉素）第十三頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一氨芐西林

（氨芐青霉素）第十四頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一阿莫西林

（羥氨芐青霉素）第十五頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一普魯卡因青霉素第十六頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一頭孢氨芐第十七頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一頭孢拉定第十八頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一頭孢羥氨芐第十九頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一頭孢噻吩鈉第二十頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)Na與堿金屬(Na+、K+)成鹽1.酸性和溶解度易溶于水第二十一頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一與有機(jī)堿(普魯卡因)成鹽

難溶于水，易溶于甲醇普魯卡因青霉素第二十二頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一2.旋光性

頭孢菌素類C6C7青霉素類C3C5C6

﹡﹡﹡﹡﹡第二十三頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一

3.紫外吸收特征頭孢菌素類母核有共軛體系青霉素類母核無(wú)明顯UV

多數(shù)有苯環(huán)取代基第二十四頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一4.β-內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性水溶液不穩(wěn)定干燥純凈穩(wěn)定不穩(wěn)定性因素四元環(huán)張力大酰胺鍵易水解第二十五頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一例青霉素的降解反應(yīng)青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑?；u胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2第二十六頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一（一）呈色反應(yīng)1.羥肟酸鐵反應(yīng)β-內(nèi)酰胺類NaOH呈色硫酸鐵銨試液H+二、鑒別第二十七頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一2.茚三酮反應(yīng)△α-氨基第二十八頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一2.雙縮脲反應(yīng)β-內(nèi)酰胺類（開環(huán)分解）似肽鍵第二十九頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一3.與重氮苯磺酸反應(yīng)（偶合）酚羥基頭孢哌酮第三十頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一（二）沉淀反應(yīng)1.遇酸→↓在過(guò)量HCl或有機(jī)溶劑（乙醇、三氯甲烷、乙醚）中溶解第三十一頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一2.重氮化-偶合反應(yīng)重氮化-偶合反應(yīng)芳伯氨基第三十二頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一K+、Na+反應(yīng)（三）

焰色→鮮黃色

+醋酸氧鈾鋅→↓黃

Na+

焰色→紫色

+0.1%四苯硼鈉+Ac→↓白

K+第三十三頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一光譜法（四）1、UV法樣品、分解產(chǎn)物第三十四頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一（五）IR法第三十五頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一色譜法（五）1、TLC法對(duì)照品對(duì)照法2、HPLC法第三十六頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一三、特殊雜質(zhì)的檢查高分子雜質(zhì)檢查頭孢他啶、頭孢曲松鈉、頭孢哌酮鈉分子排阻色潽法、離子交換色譜法、反相色譜法吸光度檢查青霉素鈉吸光度：0.80-0.8第三十七頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一四、含量測(cè)定微生物檢定法汞量法HPLC第三十八頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一汞量法（一）1.原理（水解）青霉素族ChP青霉素與汞鹽不反應(yīng)降解產(chǎn)物與汞鹽反應(yīng)巰基化合物與汞定量反應(yīng)，可測(cè)得總青霉素含量第三十九頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一2.方法青霉素鈉含量測(cè)定

取本品約50mg，精密稱定，加水5ml溶解后，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，放置15分鐘，加1mol/L硝酸溶液5ml，醋酸鹽緩沖(pH4.6)20ml及水20ml，搖勻，照電位滴定法，在35～40℃，用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)緩慢滴定（控制滴定過(guò)程約為15分鐘）。每1ml硝酸汞滴定(0.02mol/L)相當(dāng)于7.128mg的總青霉素

第四十頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一另取本品約0.5g，精密稱定，加水與上述醋酸鹽緩沖液各25ml，振搖使完全溶解，在室溫下，立即用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)滴定，終點(diǎn)判斷方法同上。每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當(dāng)于7.128mg的降解物?？偳嗝顾氐陌俜趾颗c降解物的百分含量之差值即為青霉素的含量。第四十一頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一4、計(jì)算第四十二頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一

精密稱取含水量為0.5%的青霉素鈉0.0502g，按藥典方法測(cè)定總青霉素含量時(shí)，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)6.97ml。另精密稱取上述樣品0.5013g，按藥典方法測(cè)定降解物含量時(shí)，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)1.33ml。以干燥品計(jì)算，求樣品中青霉素的含量。例青霉素鈉含量測(cè)定第四十三頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一HPLC法（二）ChP頭孢菌素類內(nèi)標(biāo)法＋校正因子外標(biāo)法特點(diǎn)快速、高效、靈敏專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好一法多用（鑒別、檢查、含測(cè)）第四十四頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一第三節(jié)氨基糖苷類抗生素常見藥物：硫酸鏈霉素硫酸阿米卡星新霉素卡那霉素硫酸慶大霉素妥布霉素氨基環(huán)醇與氨基糖縮合形成含有多羥基，又稱為多羥基抗生素第四十五頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一鏈霉素鏈霉胍+鏈霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺苷元糖鏈霉雙糖胺第四十六頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一鏈霉胍鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺第四十七頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一鏈霉胍鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺第四十八頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一慶大霉素

糖苷元絳紅糖胺+脫氧鏈霉胺+加洛糖胺

糖第四十九頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺第五十頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺第五十一頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一慶大霉素C復(fù)合物慶大霉素C1R=HR1、R2=CH3

慶大霉素C2R=R2=H

R1=CH3

慶大霉素C1aR、R1、R2=H

慶大霉素C2aR=CH3R1=R2=H慶大霉素C2bR=R1=HR2=CH3第五十二頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一二、性質(zhì)多與硫酸成鹽鏈霉素3個(gè)慶大霉素5個(gè)堿性中心堿性1水溶性溶解性2.旋光性第五十三頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一鏈霉素pH4～7慶大霉素pH2～12穩(wěn)定UV4.穩(wěn)定性3.鏈霉素在230nm處有紫外吸收第五十四頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一坂口反應(yīng)N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)水解產(chǎn)物第五十五頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一二、鑒別試驗(yàn)

茚三酮反應(yīng)（一）△羥基胺結(jié)構(gòu)第五十六頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一鏈霉胍特有反應(yīng)（或α-萘酚）坂口反應(yīng)（二）方法：取本品0.5mg，加水4ml溶解，加氫氧化鈉試液2.5ml與0.1%8-羥基喹啉的乙醇溶液1ml，放冷至15℃，加次溴酸鈉試液3滴，即顯橙紅色第五十七頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一

麥芽酚反應(yīng)（三）

鏈霉糖特有反應(yīng)H+分子重排硫酸鏈霉素的反應(yīng)：取本品約20mg，加水5ml溶解后，加氫氧化鈉溶液0.3ml，置水浴上加熱5分鐘，加硫酸鐵銨溶液0.5ml，即顯紫紅色第五十八頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（四）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對(duì)二甲氨基苯甲醛H+紅色（Elson-Morgan反應(yīng)）第五十九頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一（五）硫酸鹽的鑒別反應(yīng)H+TLC法（六）第六十頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一三、特殊雜質(zhì)檢查及組分分析鏈霉素雜質(zhì)鏈霉素B（水解后為甘露糖、鏈霉素）

方法TLC中的對(duì)照品法1.來(lái)源反應(yīng)中間體第六十一頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一薄層色譜法檢查鏈霉素B取本品0.25g，精密稱定，置回流瓶中，加5ml新鮮配制的硫酸-甲醇溶液溶解，加熱回流1小時(shí)，冷卻，用甲醇沖洗冷凝管，合并沖洗液，并用甲醇定量稀釋成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液。第六十二頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一薄層色譜法檢查鏈霉素B精密稱取甘露糖對(duì)照品36mg，置回流瓶中，同法處理后定量制成每1ml中含72ug的溶液，作為對(duì)照溶液取上述溶液，點(diǎn)于同一薄層板上，展開，晾干，顯色供試品溶液所顯鏈霉素B斑點(diǎn)的顏色與對(duì)照溶液主斑點(diǎn)比較，不得更深第六十三頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一四、含量測(cè)定鏈霉素、慶大霉素微生物檢定法本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散作用量反應(yīng)平行線原理的設(shè)計(jì)，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者對(duì)接種的試驗(yàn)菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測(cè)定供試品效價(jià)的一種方法。第六十四頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一第四節(jié)四環(huán)素類抗生素ABCD第六十五頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一123456789101112第六十六頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一四環(huán)素（TC）tetracycline第六十七頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一金霉素(CTC)chlortetracycline氯四環(huán)素第六十八頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一土霉素(OTC)oxytetracycline氧四環(huán)素第六十九頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一多西環(huán)素(DOTC)doxycycline脫氧土霉素第七十頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一美他環(huán)素（METC）metacycline第七十一頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一第七十二頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一（二）性質(zhì)酸堿性1.與酸、堿均能成鹽強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中溶解度↑

酚羥基、烯醇型羥基弱酸性二甲胺基弱堿性第七十三頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一2.溶解性和吸濕性pH4.5-7.2，難溶于水pH低于4或高于8，溶解度增大具引濕性，含有結(jié)晶水第七十四頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一3.旋光性用于定性或定量4.紫外吸收和熒光性質(zhì)第七十五頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一5.不穩(wěn)定性（1）差向異構(gòu)化淡黃→黑藍(lán)色熒光第七十六頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一差向四環(huán)素第七十七頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一（土霉素、多西環(huán)素不易差向異構(gòu)化）第七十八頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一（2）酸性條件下的降解λmax=445nmλmax=435nm橙黃色第七十九頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一脫水四環(huán)素第八十頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一（3）堿性條件下的降解（熒光）第八十一頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一與金屬離子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+與金屬離子絡(luò)合6.第八十二頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一二、鑒別試驗(yàn)H2SO4反應(yīng)（一）第八十三頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一FeCl3反應(yīng)（二）第八十四頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一熒光法（三）UV綠色熒光H+UV第八十五頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一TLC法（四）正相分配薄層色譜HPLC法（五）EDTA克服痕量金屬造成的拖尾現(xiàn)象第八十六頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一三、檢查有關(guān)物質(zhì)（一）HPLC法（2010版）第八十七頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一吸收度（二）第八十八頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一四、含量測(cè)定ChP、USPHPLC法（外標(biāo)法）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)1.防護(hù)柱2.預(yù)試溶液

4-差向脫水四環(huán)素四環(huán)素3.RSD≤2.0%第八十九頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一1．下列哪個(gè)藥物會(huì)發(fā)生羥肟酸鐵反應(yīng)

A.青霉素

B.慶大霉素

C.紅霉素

D.鏈霉素

E.維生素C第九十頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一2．中國(guó)藥典(2010年版)測(cè)定頭孢菌素類藥物的含量時(shí)，多數(shù)采用的方法是

A.微生物法

B.碘量法

C.汞量法

D.正相高效液相色譜法

E.反相高效液相色譜法第九十一頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一3．屬于-內(nèi)酰胺類的抗生素藥物有

A.青霉素

B.紅霉素

C.頭孢菌素

D.慶大霉素

E.四環(huán)素第九十二頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一4．能和茚三酮發(fā)生呈色反應(yīng)的物質(zhì)有

A．鏈霉素

B．慶大霉素

C．土霉素

D．氨基酸

E．苯巴比妥第九十三頁(yè)，共一百頁(yè)，編輯于2023年，星期一5.青霉素類藥物可用下面哪些方法測(cè)定

A.三氯化鐵比色法

B.汞量法

C.碘量法

D.硫醇汞鹽法