DB12T 1012-2020食用菌液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范

ICS65.020.20天津市地DB12方標(biāo)準(zhǔn)DBT1012—2020echniquestandardforliquidspawnproductionofediblemushroom天津市市場(chǎng)監(jiān)督管理委員會(huì)發(fā)布前言。草單位：天津市林業(yè)果樹(shù)研究所。食用菌液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范用于食用菌液體菌種的生產(chǎn)。范性引用文件(包括所有的修改單)適用于本文件。GB9生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GBT2728食用菌術(shù)語(yǔ)GB0073潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范NY5099無(wú)公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程定義GB/T12728界定的術(shù)語(yǔ)以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。jar-pressure體菌種培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)器保持的空氣壓力，單位：Mpa。quantityofaerationinoculum體積與培養(yǎng)基體積的百分比標(biāo)示。ageofliquidspawn開(kāi)始計(jì)算的液體菌種生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)間。lizingfermentor行加熱滅菌的過(guò)程。ittentsterilization的過(guò)程。liquidspawninshakeflask的液體菌種。4要求4.1生產(chǎn)場(chǎng)地4.1.1基本要求B4.1.2環(huán)境衛(wèi)生要求NYT規(guī)定。4.2生產(chǎn)設(shè)備設(shè)施4.2.1廠房設(shè)置和布局應(yīng)符合NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程要求。水、易清洗。4.2.4主要儀器設(shè)備應(yīng)配備水處理設(shè)備、液體菌種培養(yǎng)器、空氣壓縮機(jī)、空氣過(guò)濾器、液體菌種接種、顯微鏡、磁力攪拌機(jī)、磅秤、天平、酸度計(jì)等。在經(jīng)常停電的地方應(yīng)有自備電源(發(fā)電機(jī))。4.2.5主要生產(chǎn)用具應(yīng)配備玻璃三角瓶、接種器、試管、量杯量瓶、玻璃漏斗、定量定性濾紙、精密4.3培養(yǎng)基質(zhì)NY99無(wú)公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求的規(guī)定。4.4生產(chǎn)品種4.4.1選用高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗逆性強(qiáng)、商品性好的食用菌品種，使用經(jīng)省級(jí)以上農(nóng)作物品種審定委員會(huì)并且從具有相應(yīng)技術(shù)資質(zhì)的供種單位引種且種性清楚。液體菌種生產(chǎn)工藝5.1工藝流程化←母種↓制→空消→實(shí)消→冷卻→種子罐→發(fā)酵培養(yǎng)→液體菌種↑5.2制備母種5.2.1容器8mm×180mm或20mm×200mm玻璃試管,試管應(yīng)保持清潔、干燥。5.2.2培養(yǎng)基不同微生物的營(yíng)養(yǎng)需要配制不同的培養(yǎng)基，常用的配方參見(jiàn)附錄A。5.2.3滅菌21℃，0.11MPa~0.12MPa的壓力下，維持30min。5.2.4接種在超凈工作臺(tái)上嚴(yán)格按無(wú)菌操作接種。接種完成后，在試管上注明菌種名稱、接種時(shí)間。5.2.5培養(yǎng)根據(jù)食用菌菌種的生長(zhǎng)要求，給予其適宜的培養(yǎng)溫度22℃~28℃，保持空氣相對(duì)濕度在65%~75%，5.2.6留樣菌種應(yīng)留樣備查，留樣的數(shù)量應(yīng)以每個(gè)批次母種3支~5支。草菇在13℃~16℃貯存，其他種類母種菇。5.3制備搖瓶液體種5.3.1容器ml干燥。5.3.2裝液量400ml，用通氧砂芯硅膠塞封口。5.3.3培養(yǎng)基食用菌品種的營(yíng)養(yǎng)需要配制不同的搖瓶培養(yǎng)基，常用的配方參見(jiàn)附錄B。5.3.4滅菌。5.3.5接種5.3.6培養(yǎng)溫度22℃~28℃，保持空氣相對(duì)濕度在65%~75%，避光培養(yǎng)。頻率隨具體品種而定。5.4發(fā)酵罐檢查與清洗.4.1檢查5.4.2清洗行沖洗，達(dá)到無(wú)死角、內(nèi)壁無(wú)任何培養(yǎng)料殘余物的潔凈程度。5.5煮罐和空消棒的培養(yǎng)器加水至容積的80%加熱至121℃，滅菌40min。用外源蒸汽滅菌的培養(yǎng)器，蒸汽壓力達(dá)到0.11Mpa~0.12Mpa、溫度121℃~124℃、滅菌40min。5.6液體菌種培養(yǎng)基配方合GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。常用的配方見(jiàn)附錄B。5.7投料與定容積的70%~80%，然后擰緊上料口蓋。5.8培養(yǎng)器實(shí)消和培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)器內(nèi)蒸汽壓力達(dá)到0.11Mpa~0.12Mpa，培養(yǎng)基溫度達(dá)到121℃~124℃、保持時(shí)間40min。5.9冷卻降溫5.10接種5.11液體菌種培養(yǎng)條件5.11.1通風(fēng)量通過(guò)進(jìn)氣閥和排氣閥將通風(fēng)量調(diào)節(jié)至1：0.5V／V~1：1.2V／V(料液體積／空氣體積)。5.11.2罐壓罐壓保持在0.02Mpa~0.04Mpa。5.11.3溫度常見(jiàn)品種培養(yǎng)溫度調(diào)節(jié)在24℃~28℃，少數(shù)品種根據(jù)特殊需求具體設(shè)定。5.11.4培養(yǎng)時(shí)間而定。5.12留樣與檢測(cè)5.12.1留樣冰箱內(nèi)保存一周以上。5.12.2無(wú)菌檢測(cè)對(duì)上述留存樣品應(yīng)在無(wú)菌檢測(cè)瓊脂平板上劃線培養(yǎng)，在28℃恒溫培養(yǎng)2d~5d，每天觀察菌落生長(zhǎng)情。PH之內(nèi)。5.12.4菌絲濕重5.12.5鏡檢5.13液體菌種放罐指標(biāo)5.13.1經(jīng)鏡檢和其它理化指標(biāo)等方法檢驗(yàn)質(zhì)量合格即可放罐接種。菌液稍粘稠，有大量片狀或球狀菌絲體懸浮、分布均勻、。范圍內(nèi)菌絲濕重(g／100ml)鑒別可見(jiàn)食用菌菌種液體培養(yǎng)中特有的菌絲形態(tài)，球狀和叢狀菌絲體大量分布，菌絲粗壯，菌絲內(nèi)原生質(zhì)分布均勻、染有食用菌菌絲生長(zhǎng)，劃痕處無(wú)霉菌、酵母菌、細(xì)菌菌落生方法將待接種的食用菌三級(jí)固體種袋(瓶)或栽培袋放置在輸送帶，輸入至無(wú)菌接種區(qū)。在接種區(qū)用接種器將液體菌種注入，每個(gè)接種點(diǎn)15ml~30ml。移至發(fā)菌室培養(yǎng)。LL種種類、級(jí)別、品種、生產(chǎn)單位、接種日期。L貯存L瓶種保存方法4℃的溫度下可保存5天~7天。L種子罐液體菌種保存方法15℃~20℃室溫可保存1天~2天。A(資料性附錄