【畜牧課件】實(shí)驗(yàn)六新城疫實(shí)驗(yàn)室診斷

實(shí)驗(yàn)六新城疫的實(shí)驗(yàn)室診療（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模莆针u新城疫的臨診診療重點(diǎn)。2．掌握雞胚接種、病毒分別方法并用HA、HI試驗(yàn)判定其病毒（二）實(shí)驗(yàn)原理有些病毒，如禽流感病毒、新城疫病毒、Eds76等，能凝聚某種動(dòng)物的紅血球，故能夠來(lái)推斷資料中有無(wú)該病毒的存在。若有能凝聚血球的病毒，其凝聚性可為相應(yīng)的抗體所克制，這類(lèi)克制還有特異性，故病毒的血球凝聚克制試驗(yàn)，可用已知病毒來(lái)檢查被檢血清中的相應(yīng)抗體，也可用已知血清來(lái)判定未知病毒。（三）實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備抗凝劑的制備：5%枸椽酸鈉+0.9%生理鹽水，分裝、紗布扎口、滅菌消毒15磅/20min。1％紅細(xì)胞懸液制備：采集無(wú)禽流感和新城疫等抗體的健康成年公雞的血液與1／4體積的抗凝劑混合，用PH7.2、0.01mol／LPBS液清洗3次，每次均以3000rpm離心10min，清洗后用PBS配成體積分?jǐn)?shù)為1％紅細(xì)胞懸液，4℃保留備用。器具：96孔V型微量反響板、微量移液器(配有滴頭)、0.9%的生理鹽水。（四）實(shí)驗(yàn)步驟1、雞新城疫的臨診診療重點(diǎn)由新城疫病毒(NDV)惹起的臨診癥狀依宿主和病毒毒力雙方面的要素而定。在雞不一樣的毒株惹起疾病的嚴(yán)重程度不一樣，有的造成急性死亡，死亡率可高達(dá)100％，有的僅表現(xiàn)為亞臨床型。、不一樣的宿主感染同一毒株的結(jié)果也不一樣。比如某些毒株可惹起雞和火雞發(fā)生嚴(yán)重疾病，但它們?cè)邙喓往Z僅惹起隱性感染。別的，我國(guó)的商業(yè)雞群絕大部分為新城疫(ND)的免疫雞群，發(fā)生ND流行主假如因?yàn)楦鳂釉稍斐杉w對(duì)ND的免疫保護(hù)水平降落或免疫失敗所致，在臨診癥狀上大多不典型。與NDV相關(guān)的臨診癥狀有：呼吸困難、腹瀉、產(chǎn)蛋降落或停止、精神抑郁、神經(jīng)癥狀和死亡。這些癥狀在有的病例可所有出現(xiàn)，但大部分病例僅部分出現(xiàn)。對(duì)不一樣的雞群來(lái)說(shuō)，出現(xiàn)臨診癥狀的雞所占的比率及發(fā)病雞的嚴(yán)重程度可能有很大差別。典型ND的特色性病變是渾身呈出血性敗血變化：腺胃乳頭出血或潰瘍；腸道，特別是盲腸扁桃體和直腸一泄殖腔粘膜呈條紋狀出血，間有纖維生性壞死點(diǎn)；腺胃和肌胃的漿膜以及渾身脂肪組織常見(jiàn)針尖樣出血點(diǎn)。非典型ND的出血性變化大多不顯然，剖檢時(shí)需認(rèn)真辨識(shí)，盲腸扁桃體和直腸一泄殖腔粘膜出血變化發(fā)生的頻率往常較高。這里一定指出，ND的臨診癥狀，不論是消化道、呼吸道或神經(jīng)系統(tǒng)，都不是ND所獨(dú)有的。所以，ND的臨診診療只好是初步的診療。ND確實(shí)診還需進(jìn)一步進(jìn)行流行病學(xué)檢查，血清學(xué)試驗(yàn)等綜合判斷。但最后確診需要對(duì)感染雞進(jìn)行病原分別、判定。2、雞新城疫病毒的分別（1）接種資料：無(wú)菌取病死雞病料（腦、肝、脾、喉氣管）1g左右放入研磨器內(nèi)，加入3-5ml生理鹽水，研磨后倒入離心管內(nèi)，加入新大霧頭0.1ml（總濃度800單位/ml）；置水溶箱37℃/30min，離心后取上清，作為接種資料。（2）雞胚接種：尿囊腔接種9-11日齡非免胚0.1~0.2ml/胚，醋封后持續(xù)卵乳化24/ml，開(kāi)始照蛋每天兩次，連續(xù)5日，棄去24h內(nèi)死胚，采集24~120h死胚和節(jié)余活胚置4℃保持，雞胚液（尿素液和羊水）置幸虧24h內(nèi)采集，作HA、HI試驗(yàn)，進(jìn)行病毒判定用。、雞新城疫病毒的判定血凝（HA）試驗(yàn)單位：ml孔號(hào)123456789101112稀釋度1∶2231∶241∶2561∶71∶1∶1∶1∶1∶1∶21∶21∶222210211212289生理鹽水252525252525252525252525雞胚液2525252525252525252525/紅血球252525252525252525252525（1%）振蕩混勻37℃作用15min察看結(jié)果結(jié)果舉例++++++++++++++++++++++++++++++―――為完整凝聚；+++和++為不完整凝聚；一為不凝聚。凡能使雞紅細(xì)胞完整凝聚的病毒最高稀釋倍數(shù)，稱(chēng)為該病毒的血凝滴度，如表所示，病毒滴度為1：26。用于下述血凝克制試驗(yàn)的病毒需含4個(gè)血凝單位，馬上一個(gè)血凝單位的稀釋度增添4倍濃度，比如，一個(gè)血凝單位為1：26，4個(gè)血凝單位則為1：24。HA試驗(yàn)達(dá)成后，確立4個(gè)HA單位的抗原，進(jìn)行HI試驗(yàn)。血凝克制（HI試驗(yàn)）單位：ml孔號(hào)123456789101112稀釋度1∶223456781∶291∶1∶1∶1∶21∶21∶21∶21∶21∶21∶2210211212生理鹽252525252525252525252525水標(biāo)準(zhǔn)血25252525252525252525/25清雞胚液252525252525252525252525振蕩感作：37℃10min紅血球252525252525252525252525振蕩混勻37℃或常溫作用15min察看結(jié)果為完整凝聚；+++和++為不完整凝聚；一為不凝聚。（五）結(jié)果剖析血凝克制試驗(yàn)結(jié)果判斷在比較出現(xiàn)正確結(jié)果的狀況下，以完整克制紅細(xì)胞凝聚的最大稀釋度為該血清的HI滴度（如圖例HI試驗(yàn)）HI價(jià)為1:26，一般寫(xiě)作6lg2，證明該病雞中含有ND病毒（因?yàn)槠錁?biāo)準(zhǔn)血清為ND標(biāo)準(zhǔn)）。血清雞群HI滴度的高低在必定程度上反應(yīng)了免疫保護(hù)水平的高低。雞群HI滴度失散度較小時(shí)，而HI滴度較高，其保護(hù)水平也高。HI滴度在4lg。的雞群保護(hù)率約為50％；在4lgz以下的非免疫雞群約為10％，免疫雞群約為40％；HI滴度在6～10lgz的雞群保護(hù)率達(dá)90％～100％。若雞群有10％左右雞出現(xiàn)111g。或ll以上的HI滴度，說(shuō)明雞群已發(fā)生新城疫強(qiáng)毒的感染。（六）注意事項(xiàng)1、NDV中含有HN→神經(jīng)氨球酶→解凝作用可與紅血球發(fā)生凝聚作用，但時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，又發(fā)生解凝作用，在時(shí)間掌握上很重要，解凝后，紅CELL受體被