2014級碩士高級免疫學實驗技術-概述

免疫學實驗技術概述第一頁，共21頁。免疫學實驗技術概述第二頁，共21頁。小調查-對免疫學實驗技術的了解目前你知道的免疫學實驗技術有哪些？這些免疫學實驗技術的原理是什么？這些技術有什么應用？第三頁，共21頁。免疫學實驗技術概述現(xiàn)代免疫學技術第四頁，共21頁。免疫學技術的范疇1、對具有免疫活性物質的定性、定量測定2、對免疫系統(tǒng)的組成成分的數(shù)量、狀態(tài)的測定第五頁，共21頁。免疫學檢測技術的評價一、評價標準Specificity（特異）Sensitivity（敏感）Simplicity（簡便）Safety（安全）Saving（節(jié)約）二、特異性與敏感性的關系特異性高、敏感性低敏感性高、特異性低第六頁，共21頁。免疫學實驗技術概述抗原抗體反應淋巴細胞的檢測技術細胞因子的檢測技術免疫學常用的分子生物學技術第七頁，共21頁。多克隆抗體單克隆抗體基因工程抗體前兩者常用于實驗研究，而后者用于臨床治療研究?？贵w的應用第八頁，共21頁。多克隆抗體是通過免疫動物血清分離獲得優(yōu)點：制備方法比較簡單，價格低廉，制備所需時間短等

在確定新基因編碼蛋白研究方面，仍然是首選抗體類型。但由于多克隆抗體含有針對多個抗原表位的抗體成分，也可能包括抗原變性后暴露的新抗原表位，因此，多克隆抗體在檢測變性抗原——如采用WesternBlot檢測蛋白時，其效果比單克隆抗體更敏感。多克隆抗體第九頁，共21頁。缺點：純度差易發(fā)生交叉反應來源有限所產生的抗體因動物個體差異滴度不同不易標準化

因免疫動物血清中含有非常復雜的多種蛋白質成分，所以在進行實驗室分析、檢測之前，必須將其有效的抗體成分分離、純化。多克隆抗體第十頁，共21頁。單克隆抗體(mAb)是通過B細胞雜交瘤獲得與多克隆抗體相比，單克隆抗體主要具有以下三個顯著特點（優(yōu)點）：①高度均質性②高度特異性③來源穩(wěn)定不足：制備方法比較復雜，價格昂貴，制備所需時間較長。單克隆抗體第十一頁，共21頁。根據(jù)實驗的目的不同，其分離、純化的純度要求也不同。作為ELISA檢測時的抗體，部分情況下飽和硫酸胺純化即可；最常使用的抗體是經(jīng)過A蛋白(ProteinA)親和層析獲得的IgG型抗體；免疫放射測定的標記用抗體必須達到雙級純才可應用(親和層析純+SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳純)。純度要求第十二頁，共21頁。單克隆抗體在制備過程中經(jīng)過嚴格的篩選，因此應根據(jù)不同的應用目的選擇不同單克隆抗體亞類，如標明供ELISA檢測用的單克隆抗體，可能不適合WesternBlot檢測。作為初學者尤其應該注意各類單克隆抗體標明的應用范圍，而多克隆抗體一般情況下均有較寬的適用范圍。適用范圍第十三頁，共21頁。一抗和二抗一級抗體：抗原特異性的抗體二級抗體：抗抗體（針對一抗的Fc段，具有種屬特異性）AgAg第十四頁，共21頁。沉淀反應凝集反應免疫標記技術抗原抗體反應第十五頁，共21頁。

淋巴細胞的檢測技術淋巴細胞的分離淋巴細胞的功能測定技術第十六頁，共21頁。細胞因子的檢測技術生物活性檢測免疫學檢測分子雜交PCR檢測第十七頁，共21頁。免疫學常用的分子生物學技術免疫印跡技術免疫PCR免疫沉淀第十八頁，共21頁。mAb是由起始于一個B淋巴細胞的單克隆細胞系所分泌的，因此是一種每個抗體分子的結構(包括氨基酸排列順序和空間構型)都相同的均質性抗體。高度均質性第十九頁，共21頁。mAb只專一的識別抗原分子上單個抗原位點，因此容易獲得特異性抗體，較少產生交叉反應。高度特異性第二十頁，共21頁?？纱罅可a，當?shù)玫椒€(wěn)定分泌mAb的雜交瘤細胞系后，可置液氮中