博士生科研計劃清單書實用模板

實用標(biāo)準(zhǔn)文檔博士研究生科研計劃書（）姓名：報考專業(yè)：計劃書題目：細(xì)胞角蛋白CK20對胃癌微轉(zhuǎn)移的預(yù)測價值及臨床意義2013年2月一、立題依據(jù)文案大全重點介紹本項目的科學(xué)意義、國內(nèi)外現(xiàn)狀，并附主要參考文獻(xiàn)胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，居消化道腫瘤發(fā)病率之首，多見于男性，男女發(fā)病率之比為2:1，死亡率居惡性腫瘤首位，平均死亡年齡為61.6歲。臨床上診斷的多為進(jìn)展期胃癌患者，即使經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)的根治性手術(shù)治療，其5年生存率仍在40%左右，其中最重要的原因是胃癌患者術(shù)后了腹膜轉(zhuǎn)移。近年來在臨床開展的術(shù)前輔助化療，也即新輔助化療(neoadjuvantchemotherapy,NACT是指在惡性腫瘤)局部治療、手術(shù)或放療前給予的全身或局部化療，也稱術(shù)前化療(preoperativechemotherapy。新輔助化)療是對腫瘤外科醫(yī)生及內(nèi)科醫(yī)生觀念上的一個挑戰(zhàn)，其理論依據(jù)是:手術(shù)切除原發(fā)腫瘤可能會刺激剩余腫瘤細(xì)胞的生長;腫瘤周圍組織在術(shù)后血供改變影響化療藥物濃度及放療效果;新輔助化療、放療的組織病理學(xué)反應(yīng)與預(yù)后呈正相關(guān):可以達(dá)到預(yù)期的目的以提高手術(shù)切除率，減少術(shù)中播散可能性，降低腫瘤細(xì)胞活性;消除潛在的微轉(zhuǎn)移灶，降低術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的可能;術(shù)前通過可測量病灶及術(shù)后標(biāo)本準(zhǔn)確判定臨床緩解率和病理學(xué)有效率;新輔助治療可剔除不宜手術(shù)治療的患者。新輔助化療使進(jìn)展期胃癌治療的效果得到顯著改善，Wilke等[1]和Plukker[2]的II期臨床試驗發(fā)現(xiàn)，NACT能夠使原剖腹探查無法切除的胃癌獲得30%-50%的再切除率，這些再切除患者的中位生存期為24個月，遠(yuǎn)高于原無法切除患者小于6個月的生存期。胃癌的腹膜轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)占所有胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)的半數(shù)以上，而腹膜轉(zhuǎn)移者的5年生存率低于20%。臨床所遇腹膜轉(zhuǎn)移患者多數(shù)在已出現(xiàn)腹水、盆腔腫塊或腸梗阻時才得以確診，已失去治療最好時機(jī)，故胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的早期診斷和治療具有重要意義。腹膜轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素是腹腔內(nèi)脫落的癌細(xì)胞和腹膜微轉(zhuǎn)移灶的存在。微轉(zhuǎn)移是指在手術(shù)治療時已經(jīng)存在的各種機(jī)體組織、及細(xì)胞移植物中的腫瘤殘留，是用常規(guī)形態(tài)學(xué)診斷技術(shù)不能檢測出的、隱匿在原發(fā)灶以外的轉(zhuǎn)移。胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移指術(shù)前或術(shù)中常規(guī)檢查難以發(fā)現(xiàn)的，單個癌細(xì)胞或一小簇癌細(xì)胞構(gòu)成的種植于腹膜的微小轉(zhuǎn)移。胃癌腹膜轉(zhuǎn)移發(fā)生的途徑和步驟可能為:1.原發(fā)灶的腫瘤細(xì)胞穿透漿膜，脫落到腹腔內(nèi)，形成高度生物活性的游離腫瘤細(xì)胞。2.在一些因子的介導(dǎo)下粘附在腹膜上。3.在基質(zhì)消化酶和相關(guān)因子的作用下，腫瘤細(xì)胞向腹膜組織浸潤。4.腫瘤細(xì)胞不斷增值，形成種植結(jié)節(jié)[3]。前3個階段為微轉(zhuǎn)移階段，肉眼不可見，亦無法用影像學(xué)方法或常規(guī)HE染色診斷，須通過免疫組織化學(xué)或PCR等方法檢測腫瘤特異性標(biāo)志物。第4階段已經(jīng)形成肉眼或影像學(xué)檢查可見的轉(zhuǎn)移。近年來，組織化學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展使得微轉(zhuǎn)移領(lǐng)域也有了較快的發(fā)展;隨著免疫組化和(RT-PCR)方法的應(yīng)用越來越趨向于成熟化和規(guī)范化，微轉(zhuǎn)移檢測領(lǐng)域日益受到重視，腫瘤微轉(zhuǎn)移的檢測可望成為腫瘤患者的常規(guī)檢查。目前對于胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移診斷的研究多集中在對腹腔內(nèi)脫落癌細(xì)胞(ECC)的研究，其中最簡便、常用的是腹腔灌洗液細(xì)胞學(xué)檢查印，但是PLC的陽性率低。隨著免疫細(xì)胞化學(xué)和逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR方法的發(fā)展和應(yīng)用，) ECC的檢出率大大提高。但腹腔內(nèi)脫落的癌細(xì)胞必須粘附于腹膜、著床并增殖方可形成微轉(zhuǎn)移灶和轉(zhuǎn)移灶。所以腹膜組織內(nèi)種植癌細(xì)胞的檢測，可以更直觀地證實胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移的存在。目前對于胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移的研究已經(jīng)越來越多，但大多數(shù)都是針對腹腔沖洗液、腹腔脫落細(xì)胞進(jìn)行研究;術(shù)中取腹膜組織進(jìn)行檢測的，較少報道，而像本試驗一樣，術(shù)中多處取材，取橫結(jié)腸系膜前葉、網(wǎng)膜囊后壁近胰腺上緣處、胰腺被膜、盆底腹膜組織，檢測胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移者，尚無報道。本試驗證實免疫組化法檢測細(xì)胞角蛋白CK20能夠檢測胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移，并為胃癌根治術(shù)術(shù)式的胃癌細(xì)胞比較容易通過脫落種植，淋巴轉(zhuǎn)移等途徑擴(kuò)散到胃周系膜組織內(nèi)。如果能在在胃癌根治術(shù)中對多處腹膜組織進(jìn)行活檢，行免疫組化染色，檢測CK20，并與常規(guī)HE染色及PLC檢查結(jié)果相比較。結(jié)果表明，雖然常規(guī)HE染色檢查并不能發(fā)現(xiàn)，實際上橫結(jié)腸系膜前葉、胰腺被膜和胰腺上方的網(wǎng)膜囊后壁等處組織內(nèi)確實已存在微轉(zhuǎn)移灶,以保障手術(shù)的徹底性.腹腔化療是一操作簡單而行之有效的治療方法，能改善經(jīng)靜脈化療無法完成的腹腔內(nèi)游離癌細(xì)胞陽性和鏡下腹膜轉(zhuǎn)移患者的抗腫瘤果，可治療進(jìn)展期胃癌術(shù)后腹腔殘存微小癌灶，并防止腹腔復(fù)發(fā)?？梢酝ㄟ^術(shù)中腹腔內(nèi)置化療藥物緩釋劑或術(shù)后通過留置導(dǎo)管腹腔內(nèi)給藥。腹腔化療目前尚無統(tǒng)一的用藥標(biāo)準(zhǔn)，正逐步由單一用藥向聯(lián)合用藥發(fā)展。腹腔化療一般很少發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥，與靜脈化療相比，其全身并發(fā)癥及副作用的發(fā)生率較低，但局部并發(fā)癥的發(fā)生率較高，應(yīng)注意預(yù)防(刑會軍)及早診斷胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移，對于胃癌復(fù)發(fā)和預(yù)后的判斷及指導(dǎo)臨床治療有著極其重要的意義。臨床所見的胃癌多為進(jìn)展期胃癌，約50%的患者術(shù)后可發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移[4]。發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移的患者對靜脈輔助化療、放療等治療手段均不敏感，生存率較低。故及早現(xiàn)腹膜微轉(zhuǎn)移，早期治療，預(yù)防和阻斷腹膜轉(zhuǎn)移的發(fā)生顯得尤為重要，而對于已發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移的患者，可通過減瘤手術(shù)配合腹腔化療，以期延長患者的生存時間。[1]WilkeH,PreusserP,FinkU,etal.Preoperativechemotherapyinlocallyadvancedandnonresectablegastriccancer:aphaseIIstudywithetoposide,doxorubicin,andcisplatin[J].JClinOncol,1989,7:1318-1326.[2]PlukkerJT,MulderNH,Sleijfe[2]PlukkerJT,MulderNH,SleijferDT,etal,Chemotherapyandsurgeryforlocallyadvancedcancerofthecardiaandfundus:phaseIIstudywithmethotrexateand5-fluorouracill[J].BrJSurg,1991,78:955-[3]吳晴，程海霞，李兆申.疾病分冊.2005,25(3):胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移的基因研究進(jìn)展「J}.國外醫(yī)學(xué).消化139-143.[4]TanakT,KumagaiK,ShimizuK,etal.Peritonealmetastasisingastriccancerwithparticularreferenlymphaticadvancement;extranodalinvasionisagnificantriskfactorforperitonealmetastasis.JSurgOnco1,2000,75:165-171.二、研究內(nèi)容研究目標(biāo)、研究內(nèi)容、創(chuàng)新之處和擬解決的關(guān)鍵問題本研究在胃癌根治術(shù)中對多處腹膜組織進(jìn)行活檢，行免疫組化染色，檢測CK20，并與常規(guī)HE染色及PLC檢查結(jié)果相比較。雖然常規(guī)HE染色檢查并不能發(fā)現(xiàn)，胰腺被膜、橫結(jié)腸系膜前葉、和胰腺上方的網(wǎng)膜囊后壁等處組織內(nèi)確實已存在微轉(zhuǎn)移灶，并且微轉(zhuǎn)移發(fā)生概率與腫瘤大小、侵透漿膜等因素相關(guān)。因此對于進(jìn)展期胃癌，尤其是腫瘤較大、侵透漿膜者，應(yīng)該剝離橫結(jié)腸系膜前葉、胰腺被膜的網(wǎng)膜囊后壁，爭取做到網(wǎng)膜囊完整切除，以保證手術(shù)的根治性。胃癌腹膜轉(zhuǎn)移發(fā)生的途徑和步驟可能為:1.原發(fā)灶的腫瘤細(xì)胞穿透漿膜，脫落到腹腔內(nèi)，形成高度生物活性的游離腫瘤細(xì)胞。2.在一些相關(guān)因子的介導(dǎo)下粘附在腹膜上。3.在基質(zhì)消化酶和相關(guān)因子的作用下，腫瘤細(xì)胞向腹膜組織浸潤。4.腫瘤細(xì)胞不斷增值，形成種植結(jié)節(jié)。第4階段已經(jīng)形成肉眼或影像學(xué)檢查可見的轉(zhuǎn)移，并可由常規(guī)病理檢查確定。前3個階段為微轉(zhuǎn)移階段，肉眼不可見，亦無法用影像學(xué)方法或常規(guī)HE染色診斷，必須通過免疫組織化學(xué)或PCR等方法檢測腫瘤特異性標(biāo)志物。近年來，組織化學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展使得微轉(zhuǎn)移領(lǐng)域也有了較快的發(fā)展;隨著免疫組化和逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)((RT-PCR)方法的應(yīng)用越來越趨向于成熟化和規(guī)范化，微轉(zhuǎn)移檢測領(lǐng)域日益受到重視，腫瘤微轉(zhuǎn)移的檢測可望成為腫瘤患者的常規(guī)檢查。雖然取腹腔沖洗液檢查具有操作簡便、花費(fèi)較少等優(yōu)點，但無論是細(xì)胞學(xué)檢查、化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫法或RT-PCR技術(shù)，僅僅只是確定游離癌細(xì)胞的存在，這些檢測方法通胃癌術(shù)中取腹膜組織檢測微轉(zhuǎn)移的研究國內(nèi)外較少報道，是近年來比較新的研究領(lǐng)域。術(shù)中取材部位有直腸膀膚陷凹(直腸子宮陷凹)、橫結(jié)腸系膜、大網(wǎng)膜等，檢測方法主要有免疫組織化學(xué)方法和RT-PCR。取腹膜組織檢測胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移，其陽性率一般低于取腹腔灌洗液用同種方法檢測的結(jié)果。這是因為腹膜取材具有一定的局限性，，但不能確診腹膜微轉(zhuǎn)移游離的腫瘤細(xì)胞必須經(jīng)過粘附、降解腹膜細(xì)胞外基質(zhì)、著床于腹膜間皮組織并增殖才能形成腹膜微轉(zhuǎn)移.另外脫落的腫瘤細(xì)胞必須經(jīng)過粘附、浸潤、增值等階段才能形成腹膜微轉(zhuǎn)移。因此，取腹膜組織檢測可以直觀地證實腹膜微轉(zhuǎn)移灶的存在。過確定游離癌細(xì)胞的存在，對腹膜轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)有一定的預(yù)測價值.本研究于胃癌根治術(shù)中自橫結(jié)腸系膜前葉、網(wǎng)膜囊后壁近胰腺上緣處、盆底腹膜處取活，用免疫組化方法檢測細(xì)胞角蛋白CK20，研究胃癌患者腹膜微轉(zhuǎn)移的情況，胃癌根治手術(shù)經(jīng)過一個多世紀(jì)的發(fā)三、擬采取的研究方法、技術(shù)路線四、考核指標(biāo)預(yù)期成果隨著免疫組織學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，胃癌微轉(zhuǎn)移的檢測手段也越來越可靠，這將為臨床工作中判斷預(yù)后、選擇術(shù)式、確定淋巴結(jié)清掃范圍、術(shù)后確立分期及建立個體化的化療方案提供更可靠的依據(jù)，在胃癌的診治中發(fā)揮更加重要的作用。由于大量文獻(xiàn)中所表現(xiàn)出來的CK20在胃癌微轉(zhuǎn)移檢測中較好的敏感性和特異性，選擇CK20作為免疫組化染色的指標(biāo)CK20的表達(dá)率高于PLC的檢出率，CK20是檢測胃癌腹膜微轉(zhuǎn)移的較好指標(biāo)，