蜱類不同發(fā)育期性信息素成分研究,昆蟲(chóng)學(xué)論文

PAGEPAGE7蜱類不同發(fā)育期性信息素成分研究,昆蟲(chóng)學(xué)論文Berger[1]初次發(fā)現(xiàn)2,6-二氯酚〔2,6-DCP〕為后溝類硬蜱中的吸引性信息素〔attractantsexpheromone,ASP〕成分，當(dāng)下確定該成分至少在7屬18種硬蜱中存在[2-5].劉敬澤等[6]在長(zhǎng)角血蜱〔Haemaphysalislongicornis〕雌蜱提取物中檢測(cè)到2,6-DCP,并研究了該成分在不同發(fā)育期的含量變化和生物學(xué)作用[6].2,6-DCP作為蜱類防治的藥物已有成功先例[7].多年來(lái)，人們一直在尋找蜱類性信息素中能否還存在2,6-DCP以外的其他物質(zhì)。Hanson等[8]在變異革蜱〔Dermacentorvariabilis〕雌蜱提取物中鑒定出2,4-DCP,同時(shí)確定2,4-DCP與2,6-DCP的含量比例為1∶9,該物質(zhì)對(duì)雄蜱也具有吸引作用，且2,4-DCP能夠作為2,6-DCP的替代物[9],2,4-DCP和2,6-DCP對(duì)變異革蜱吸血雄蜱、吸血若蜱具有一樣的作用[10-11].迄今，僅在革蜱屬〔Dermacentor〕中有2,4-DCP的報(bào)道。為說(shuō)明其他蜱種中能否存在2,4-DCP,分析該種性信息素成分在蜱類不同發(fā)育期的含量變化，本研究以長(zhǎng)角血蜱為對(duì)象，對(duì)其雌蜱揮發(fā)性ASP的主要成分、生物學(xué)作用等進(jìn)行了分析。1材料與方式方法1.1蜱的采集和喂養(yǎng)長(zhǎng)角血蜱采自河北省小五臺(tái)山國(guó)家自然保衛(wèi)區(qū)。饑餓的幼蜱、若蜱和成蜱均在兔耳上飽血，非寄生期在人工氣候箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度〔261〕℃，相對(duì)濕度75%,6L〔光照〕∶18D〔黑暗〕。不同發(fā)育期的雌蜱：饑餓期〔未吸血〕、剛吸血〔吸血1d〕、吸血期〔吸血2~3d〕、交配期〔吸血3~5d〕、交配后〔吸血5~7d〕、飽血當(dāng)天〔吸血5~7d〕，分別取材用于研究。1.2樣品制備將不同發(fā)育期的成蜱20頭分別放入磨口玻璃管中，參加5.0mL正己烷后，封緊玻璃管，置4℃下充分抽提2h,正己烷重提2次，每次30min.濃縮定容至20L,用于生物測(cè)定、色譜和質(zhì)譜分析。1.3色譜條件1.3.1氣相色譜條件色譜柱為OV-101毛細(xì)管柱〔30m0.25mm0.15m〕，氣化室溫度和Fid檢測(cè)器溫度為280℃，柱溫為60℃〔5min〕，以10℃/min升溫至280℃，信號(hào)采集時(shí)間25min,載氣為高純度氮?dú)狻?.3.2質(zhì)譜條件色譜柱為DBS-MS毛細(xì)管柱〔30m0.25mm0.15m〕，氣化室溫度和Fid檢測(cè)器溫度為280℃，柱溫為80℃〔5min〕，然后以10℃/min升溫至280℃，信號(hào)采集時(shí)間25min,載氣為氦氣。掃描質(zhì)量范圍為30~800m/z,電子能量為70eV.1.4生物測(cè)定①用蘸有正己烷的脫脂棉在剛開(kāi)場(chǎng)吸血雌蜱的體表進(jìn)行擦拭，上、下午各1次；②不做任何處理〔作為空白對(duì)照〕；③在①處理后連續(xù)3d在雌蜱體表點(diǎn)滴正己烷，天天1L〔作為正己烷對(duì)照〕；④在①處理后連續(xù)3d點(diǎn)滴不同發(fā)育期雌蜱體表抽提物，天天1⑤在〔1〕處理后連續(xù)3d點(diǎn)滴標(biāo)準(zhǔn)樣品，分別為2,4-DCP〔100ng〕、2,6-DCP〔30ng〕和2種成分的混合物〔100ng的2,4-DCP和30ng的2,6-DCP〕。各處理組重復(fù)5次。2結(jié)果與討論2.1雌蜱不同發(fā)育期體表抽提物的生物學(xué)測(cè)定長(zhǎng)角血蜱的生殖行為在吸血3~5d后進(jìn)行。剛開(kāi)場(chǎng)吸血的雌蜱經(jīng)正己烷擦拭后生殖行為基本中止，施加不同發(fā)育期雌蜱的體表抽提物后，長(zhǎng)角血蜱生殖行為的恢復(fù)程度如表1所示。由表1能夠看出，從饑餓期開(kāi)場(chǎng)，隨著雌蜱發(fā)育的成熟，體表抽提物作用于正己烷處理過(guò)的長(zhǎng)角血蜱后，其完成生殖行為的百分率增大，交配期雌蜱的體表抽提物效果最好。2.2氣相色譜/質(zhì)譜分析根據(jù)不同發(fā)育期的雌蜱體表抽提物的生物測(cè)定結(jié)果，選取典型時(shí)期〔交配期〕樣品進(jìn)行氣相色譜/質(zhì)譜分析，結(jié)合2,4-DC與2,6-DCP標(biāo)準(zhǔn)樣品的保存時(shí)間和質(zhì)譜特征。結(jié)果如此圖1所示，可知保存時(shí)間9.90min的成分為2,4-DCP,保存時(shí)間10.53min的成分為2,6-DCP.2.3標(biāo)準(zhǔn)樣品的生物測(cè)定2,4-DCP與2,6-DCP標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)交配成功率的效果如表2所示。由表2能夠看出，未處理的雌蜱〔空白對(duì)照〕均可飽血，擦拭正己烷后的對(duì)照組的雌蜱交配成功率缺乏10%.雌蜱體表經(jīng)正己烷擦拭后無(wú)法完成生殖行為，施加測(cè)試樣品后生殖行為得到不同程度的恢復(fù)。施加2,4-DCP的處理組飽血率接近70%;施加2,6-DCP的處理組飽血率略高于施加2,4-DCP的處理組，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔p0.05〕。2,4-DCP與2,6-DCP混合組分對(duì)飽血率的影響高于單獨(dú)施加華而不實(shí)的一種成分的影響，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔p0.01〕。2.4不同發(fā)育期雌蜱2,4-DCP與2,6-DCP分泌量的動(dòng)態(tài)變化通過(guò)外標(biāo)法測(cè)定不同發(fā)育期時(shí)雌蜱的2,4-DCP與2,6-DCP分泌量，結(jié)果如表3所示。由表3能夠看出，饑餓期的雌蜱體表已經(jīng)存在2,4-DCP和2,6-DCP;吸血開(kāi)場(chǎng)后，2種成分的分泌量都開(kāi)場(chǎng)增加；交配期到達(dá)峰值，此后下降。在所有發(fā)育期，2種成分分泌量的比例關(guān)系基本保持一致。3結(jié)論氣相色譜及氣質(zhì)聯(lián)用分析結(jié)果表示清楚，長(zhǎng)角血蜱雌蜱所有發(fā)育期均可分泌2,4-DCP和2,6-DCP,并隨雌蜱發(fā)育期而變化，交配期到達(dá)高峰，高峰后分泌量又逐步下降，這與劉敬澤等[12]用氣相色譜法在長(zhǎng)角血蜱盾窩腺丙酮提取物中檢測(cè)的2,6-DCP含量動(dòng)態(tài)變化基本吻合。不同發(fā)育期，雌蜱體表分泌2,4-DCP和2,6-DCP量的比例基本保持不變，約為3∶1,而Hanson等[8]報(bào)道的變異革蜱中該比例為1∶9,這講明不同蜱種間存在差異，能夠?qū)崿F(xiàn)種間辨別的隔離。根據(jù)硬蜱的交配行為，吸引性信息素由雌蜱在吸血后直至交配前不斷釋放，刺激并吸引性活動(dòng)的雄蜱對(duì)雌蜱準(zhǔn)確定位并完成交配行為。本研究證實(shí)長(zhǎng)角血蜱中這2種成分的分泌量動(dòng)態(tài)變化與交配行為相吻合，且均對(duì)交配行為的完成有顯著促進(jìn)作用，因而可確定2,4-DCP和2,6-DCP均為性信息素成分，有關(guān)兩種成分的作用機(jī)制及其在蜱類防治中的應(yīng)用尚需進(jìn)一步研究。以下為以下為以下為以下為參考文獻(xiàn)：[1]BERGERR.2,6-dichlorophenol,sexpheromoneofthelonestartick[J].Science,1972,177〔4050〕：704-705.[2]SONENSHINED,KHALILG,HOMSHERP.DermacentorvariablisandDermacentorandersoni:genitalsexpheromones[J].ExperimentalParasitology,1982,54〔3〕：317-330.[3]DEBRUYNEM,GUERINP.Isolationof2,6-dichlorophenolfromthecattletickBoophilusmicroplus:receptorcellresponsesbutnoevidenceforabehaviouralresponse[J].JournalofInsectPhysiology,1994,40〔2〕：143-154.[4]BORGESL,EIRASA,FERRIP.Theroleof2,6-dichlorophenolassexpheromoneofthetropicalhorsetickAnocentornitens〔Acari:Ixodidae〕[J].ExperimentalandAppliedAcarology,2002,27〔3〕：223-230.[5]SARAF,LIGIAM.ElectrophysiologicalresponsesoftheolfactoryreceptorsofthetickAmblyommacajennense〔Acari