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文檔簡介
蛋白質的顯色反應用的鑒定蛋白質和氨基酸的方法.(1)原理:條件下能與Cu2+結合生成紫紅色化合物,此反應稱為雙縮脲反應。蛋白質分子中有肽鍵,其結構與雙縮脲相似,也能發(fā)生此反應(二肽和22個肽鍵和個N-—C+H180C—C-NN.H,N-CCHR-NH,-CH—NNH2NH2CNuNNH322..OH+22222NHOHHO-33H-CH-NCH-H2-OH或-CHOCHCHNNHN等C基團的物質以及乙二酰2C(2)試劑①尿素,②10%氫氧化鈉溶液,③1%硫酸銅溶液,④2%卵清蛋(3)操作取少量尿素結晶,放在干燥試管中。用微火加熱使尿素熔化.熔化氫氧化鈉溶液約1mL,振蕩混勻,再加1%硫酸銅溶液1滴,再振蕩。向另一試管加2%卵清蛋白溶液(改為蛋清溶液:水=1:9)約1m雖然蛋白質或氨基酸均有茚三酮反應,但能與茚三酮反應呈陽性反應OOHOH+HN2CH CCOOH R化脫氨形成酮酸,酮酸脫羧成醛,放出CO、NH,水合茚三酮被還原23成還原型茚三酮;第二步是所形成的還原型茚三酮同另一個水合茚三OOOOCOHHOCOHHOCCOC+OH3+O2+RCCHH3HCCHCHOCCC嚴防干擾物存在,另一方面要在適宜的PH條件下進行測定.該反應的適宜的PH為5~7,同一濃度的蛋白質或氨基酸在不同pH條件下的顏(2)試劑①取兩支試管分別加入蛋白質溶液和甘氨酸溶液1mL,再各加(1)原理NONO-Na+鄰硝醌酸鈉(橙黃色)(2)試劑現(xiàn)的現(xiàn)象,有的試加入10%氫氧化鈉溶液至堿性,觀察顏色變化(1~4管可能需要加酸127酸65酚123指甲少許4頭發(fā)少許(1)原理質通過疏水作用結合后變0。01~1.0mg蛋白質范圍(2)試劑GmgmLmL5%磷酸。臨用前取原液15mL,加蒸餾水至100mL,用粗(3)操作管管號蛋白質溶液蒸餾水(mL)
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