NK細(xì)胞在腫瘤疾病應(yīng)用

生物免疫療法簡介生物免疫治療是一種自身免疫抗癌的新型治療方法，臨床上主要用于抗腫瘤治療，并取得顯著的治療效果。繼手術(shù)、放療、化療之后的第四大腫瘤治療技術(shù)。它是運(yùn)用生物技術(shù)和生物制劑對從病人體內(nèi)采集的免疫細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)和擴(kuò)增后再回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)的方法來激發(fā)、增強(qiáng)機(jī)體自身免疫功能，從而達(dá)到治療腫瘤目的，也成為自體免疫細(xì)胞療法。2009年5月1日衛(wèi)生部印發(fā)《醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用管理方法》，明確將體細(xì)胞免治療列入第三批允許臨床應(yīng)用的第三類醫(yī)療技術(shù)。第一頁，共32頁。生物免疫療法的發(fā)展80年代末期開始，日本研制和開發(fā)出特制人體活化自身淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)液，成功地建立起嶄新的細(xì)胞免疫療法。采取病人少量的血液，將分離出的淋巴細(xì)胞在含有特殊細(xì)胞刺激因子及營養(yǎng)素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，使培養(yǎng)細(xì)胞定向分化和大量增殖為活性NK細(xì)胞。臨床應(yīng)用治療取得了良好療效，同時沒有副作用出現(xiàn)。細(xì)胞免疫療法最早從LAK的臨床應(yīng)用開始。1984年Rosenberg研究組經(jīng)美國食品和藥品檢驗局(USFoodandDrugAdministration,FDA)批準(zhǔn)下，首次應(yīng)用IL-2與LAK協(xié)同治療癌癥并獲得明顯療效。但由于IL-2在治療過程中出現(xiàn)毒副反應(yīng)（毛細(xì)血管滲漏綜合征，capillaryleaksyndrome,CLS)，主要表現(xiàn)為全身性水腫和多器官功能失調(diào)，可引起胸腹腔積液、肺間質(zhì)水腫和充血性心力衰竭。引起CLS的機(jī)理可能與內(nèi)皮細(xì)胞損傷和產(chǎn)生血管活性物質(zhì)有關(guān)。1992年美國的RosewellPark醫(yī)院中止了此療法。第二頁，共32頁。癌細(xì)胞每天都在發(fā)生體的細(xì)胞數(shù)大約有60兆至70兆個，其中包括有增殖能力及沒有增殖能力的細(xì)胞群。有增殖能力的細(xì)胞群每天都在新舊交替以維持正常組織結(jié)構(gòu)和機(jī)能。健康人的體內(nèi)每天會有3000-5000個細(xì)胞發(fā)生癌變，之所以沒有出現(xiàn)癌變，是因為體內(nèi)的免疫系統(tǒng)及早識別了癌細(xì)胞，并將其殺死，阻止癌細(xì)胞的過度增殖，防止癌變的發(fā)生。人體的免疫系統(tǒng)是抵御癌癥的“防火墻”。當(dāng)某種原因?qū)е旅庖呦到y(tǒng)失衡時，機(jī)體防御能力下降，免疫系統(tǒng)失去有效的殺傷癌細(xì)胞的能力，最終導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。第三頁，共32頁?？鼓[瘤免疫療法主動免疫療法Vaccine

療法癌抗原接種樹狀細(xì)胞(DC)疫苗Cytokine療法Interferon(IFN)Interleukin-2分子靶向療法Herceptin

曲妥珠單抗Mabthera

利妥普單抗其它（健康食品等）被動免疫療法樹突狀細(xì)胞療法（DC)活化NK細(xì)胞療法（NK)腫瘤組織浸潤淋巴細(xì)胞療法（TIL)殺傷性T細(xì)胞療法（CTL)活化自體淋巴細(xì)胞療法(LAK、CIK)第四頁，共32頁。掃描電鏡顯示殺傷細(xì)胞攻擊癌細(xì)胞第五頁，共32頁。血液構(gòu)成示意圖血液紅細(xì)胞白細(xì)胞血小板血漿淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞粒細(xì)胞NK細(xì)胞T細(xì)胞B細(xì)胞其他輔助性T細(xì)胞殺傷性T細(xì)胞抑制性T細(xì)胞巨噬細(xì)胞樹突狀細(xì)胞組織內(nèi)分化嗜中性粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞第六頁，共32頁。癌癥的治療1、手術(shù)療法2、放射線療法3、化學(xué)療法4、免疫療法第七頁，共32頁。ＮＫ細(xì)胞大約在１９７０年被發(fā)現(xiàn)，是來源于造血細(xì)胞的一種大粒狀淋巴細(xì)胞。NK是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，與抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有密切關(guān)系。什么是NK細(xì)胞？第八頁，共32頁。NK細(xì)胞排除癌細(xì)胞的三個途徑（1）GranuleExocytosisPathwayCaspase-dependentand–independentdeathpathwaysCelldeath+-NKactivatingreceptorNKinhibitoryreceptorNK：formsporesinthetargetcellmembrane,allowstheentryofgranzyme,fluidandsaltssothatthetargetcelleventuallybursts.TumorcellsPerforin：serineproteases,mediateapoptosisoftargetcellsthroughcaspase-dependentand–independentpathways.Granzymes第九頁，共32頁。NK細(xì)胞排除癌細(xì)胞的三個途徑（2）Death-receptorPathwayFASligand(FASL)andtumor-necrosis-factor-relatedapoptosis-inducingligand(TRAIL)canbindtoandactivatetheirreceptors,FASandTRAILR,whichareexpressedbytumorcells.FAS(CD95)TRAILR(DR4andDR5)Tumorcellsc-FLIPFASLTRAILapoptosisNKcellNKcellThisinteractioninducestumor-cellapoptosis.Theproteinc-FLIP(FLICEinhibitoryprotein)blocksapoptosisinductionthroughthispathway.第十頁，共32頁。NK細(xì)胞排除癌細(xì)胞的三個途徑（3）IFN-g,NitricOxideNKcellssecreteanumberofeffectorcytokines,suchasIFNg,TNF,granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor(GM-CSF),IL-5,IL-10andIL-13.NK-cellproductionofTH1(proinflammatorycytokine:IFNg)andTH2(IL-4,IL-5,IL-13)cytokinesoccursatdistinctstagesofNK-celldifferentiation.MatureNKcellslosetheabilitytoproducethetype2cytokinesandacquiretheabilitytoproduceINFg.NKcellIFN-gCytotoxicityTumorcellsInductionofMHCmoleculesanti-angiogeniceffectNitricoxideActivation第十一頁，共32頁。NK細(xì)胞在癌免疫反應(yīng)中的作用IFN-gActivationCD8+Tcell(CTL)CD4+Tcell(HelperTcell)NK1.1+Tcell(NKTcell)BcellDCDCActivationMaturationIFN-gHelpingCTLgenerationGlycolipidligand/CD1IL-12Anti-tumorAbsAg-specificCTLresponseAgpresentationTumorAguptakeandgenerationofAg-specificimmuneresponseCytokineStressligandDangersignal?Immunepressure(Activationandproliferation)(Activationandproliferation)NKcell第十二頁，共32頁。自體NK細(xì)胞療法自體NK細(xì)胞療法是抗腫瘤生物免疫治療之一。簡單說就是從患者的靜脈血管中抽取20-50ml血液，從中分離出少量的免疫細(xì)胞，利用最新科技手段，通過體外選擇性誘導(dǎo)、增殖、激活后，將高活性高數(shù)量NK細(xì)胞回輸患者體內(nèi)，以此來提高患者的免疫力和對癌細(xì)胞的殺傷能力，達(dá)到治療目的的一種先進(jìn)抗腫瘤治療方法。第十三頁，共32頁。NK細(xì)胞活性實驗癌細(xì)胞(T)和不同濃度的effector(E)細(xì)胞進(jìn)行處理,比較活性化自身NK細(xì)胞和PBMC的活性，其結(jié)果活性化自身NK細(xì)胞的殺傷力與細(xì)胞濃度相關(guān)。同時隨著細(xì)胞數(shù)量的增加其細(xì)胞殺傷力的活性顯著增強(qiáng)。此外，PBMC的活性則隨著細(xì)胞濃度的增加其細(xì)胞殺傷力幾乎沒有變化。第十四頁，共32頁。NK細(xì)胞免疫療法NK細(xì)胞選擇性誘導(dǎo)Thecellsarewashedandresuspendedinisotonicsodiumchloridesolution.Check:CellcountMorphologyViabilityCellmarkers:CD56,CD16,CD3,CD4,CD8etc.cellcytotoxic%MicroorganismtestCulturedwithhumanNKcellculturemediumat37℃inahumidified,5%CO2incubatorforabout10~14days.細(xì)胞刺激因子混合培養(yǎng)NK細(xì)胞MIXTUREabout2-6x109Cells20~30ml分離淋巴細(xì)胞采血第十五頁，共32頁。NK細(xì)胞療法腫瘤患者治療流程醫(yī)院細(xì)胞處理中心介紹生物免疫治療治療的充分商量NK細(xì)胞的分離與培養(yǎng)NK細(xì)胞的一部分凍結(jié)保管2～3周檢驗及血液的采取必要應(yīng)對的培養(yǎng)，再培養(yǎng)自體NK細(xì)胞制定治療方案

自體NK細(xì)胞第十六頁，共32頁。NK細(xì)胞療法適應(yīng)癥（臨床）1、手術(shù)后患者，可防止腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)。2、無法進(jìn)行手術(shù)、放療、化療的中晚期患者。3、放療、化療失敗的患者。4、放療或化療患者的綜合治療。5、骨髓移植后或化療換屆后的白血病患者。6、癌性胸、腔積液患者。除來源于T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的原發(fā)性腫瘤、白血病、敗血病、以及自身免疫病患者外，適用于所有其他腫瘤患者。第十七頁，共32頁。NK細(xì)胞療法優(yōu)勢4.NK細(xì)胞療法可調(diào)節(jié)和增強(qiáng)全身免疫機(jī)能，創(chuàng)造更多的治療機(jī)會。采血提取免疫細(xì)胞模擬骨髓微環(huán)境定向擴(kuò)增激活NK細(xì)胞-196℃液氮儲存NK細(xì)胞免疫保健1.

NK細(xì)胞是用患者本身的細(xì)胞，沒有副作用和排斥反應(yīng)。2.NK細(xì)胞可有效地殺傷殘余的腫瘤細(xì)胞，防止腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移。3.NK細(xì)胞療法可聯(lián)合手術(shù)、放療、化療治療，達(dá)到相乘效果。第十八頁，共32頁。NK細(xì)胞療法（日程安排）治療日程安排根據(jù)患者的病情或以往病史，大夫和患者（患者家屬）商量之后決定。標(biāo)準(zhǔn)的一個療程是6針，隔兩周抽血、回輸一次，約三個月一個療程。與三大治療（手術(shù)、放療、化療）聯(lián)合治療時候，可調(diào)節(jié)治療日程安排。采血2點滴1采血3點滴2采血4點滴3采血5點滴4采血6點滴5

采血2點滴1采血1培養(yǎng)期間2星期培養(yǎng)期間2星期培養(yǎng)期間2星期培養(yǎng)期間2星期培養(yǎng)期間2星期培養(yǎng)期間2星期第十九頁，共32頁。細(xì)胞制備中心與硬件展示低溫離心機(jī)流式細(xì)胞儀細(xì)菌檢測儀細(xì)胞培養(yǎng)室液氮凍存罐cGMP制備室第二十頁，共32頁。安全的凍存、運(yùn)輸與輸注采集檢測培養(yǎng)凍存采集檢測培養(yǎng)凍存第二十一頁，共32頁。安全管理體系免疫細(xì)胞及干細(xì)胞質(zhì)量受三大階段和主體的制約，即嚴(yán)格的血液采集質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、嚴(yán)格的制備檢驗和科學(xué)的培養(yǎng)進(jìn)程是獲得高質(zhì)量細(xì)胞制劑的關(guān)鍵要素！質(zhì)量污染第二十二頁，共32頁。NK細(xì)胞療法臨床病例1（胃癌67歲男性）2009年4月胃鏡中發(fā)現(xiàn)胃前壁有２型腫瘤，診斷為進(jìn)展期胃癌服用抗癌藥（ＴＳ－１）效果欠佳。2009年5月接受第１次活性ＮＫ細(xì)胞治療。2009年9月復(fù)查CT，與ＮＫ細(xì)胞治療前相比腫瘤明顯縮小。治療前治療后第二十三頁，共32頁。