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第二章抗體檢測第一頁,共三十九頁,2022年,8月28日本章規(guī)定了HIV抗體的檢測方法、程序、結(jié)果報告、檢測策略及質(zhì)量控制。適用于各級各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、檢驗檢疫機(jī)構(gòu)、采供血機(jī)構(gòu)及衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu)??勺鳛閷IV感染者診斷和監(jiān)測的實驗室依據(jù)。1范圍第二頁,共三十九頁,2022年,8月28日2規(guī)范性引用文件《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》(中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),WS293-2008)GuidanceforHIVtestingintheWesternPacificRegion.WHODraft19July2008.Statement

fromtheSurveillanceandSurveyWorkingGroupandtheLaboratoryWorkingGrouptotheOfficeoftheGlobalAIDSCoordinator.26Nov.2006.GuidelinesfortheuseoftheBEDassayforincidenceestimationandsurveillanceinresource-limitedcountries.Atlanta,5June2006.RevisedGuidelinesforHIVCounseling,Testing,andReferral.U.S.CDC2001.CurrentHIV-2diagnosticstrategyoverestimatesHIV-2prevalenceinChina.JournalofMedicalVirology,2009,81:790-797.第三頁,共三十九頁,2022年,8月28日3HIV抗體檢測實驗室要求應(yīng)符合《全國艾滋病檢測工作管理辦法(2006)》中對實驗室人員、建筑設(shè)施和設(shè)備等條件的要求。實驗室的質(zhì)量保證和實驗室安全防護(hù)按本規(guī)范相關(guān)章節(jié)規(guī)定執(zhí)行。第四頁,共三十九頁,2022年,8月28日4.1HIV抗體檢測的目的4.1.1HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。4.1.2以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀況,包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。4.1.3以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV,包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。4.1.4以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢,包括各類高危人群、重點人群和一般人群。第五頁,共三十九頁,2022年,8月28日4.2HIV抗體檢測的要點4.2.1根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。4.2.2嚴(yán)格遵守實驗室SOP。4.2.3篩查試驗陽性,須作確證試驗。4.2.4篩查試驗陰性,不應(yīng)做確證試驗。4.2.5篩查及確證試驗陽性均應(yīng)做好咨詢工作。第六頁,共三十九頁,2022年,8月28日檢測策略5.以診斷為目的的檢測策略

6.以監(jiān)測為目的的檢測策略7.以血液篩查為目的的檢測策略第七頁,共三十九頁,2022年,8月28日5.以診斷為目的的檢測策略5.1常規(guī)HIV抗體檢測的方法和程序HIV抗體檢測分為篩查試驗(包括初篩和復(fù)檢)和確證試驗。5.1.1篩查試驗5.1.1.1篩查試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑,其中酶聯(lián)免疫試劑應(yīng)批批檢合格。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑。5.1.1.2篩查樣品HIV抗體篩查可采用血清、血漿、濾紙干血斑、唾液和尿液樣品。第八頁,共三十九頁,2022年,8月28日5.1.1.3篩查方法(1)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)可使用血液、唾液、尿液樣品包括單純檢測HIV抗體的第三代和可同時檢測血液中HIV-1p24抗原和HIV-1/2抗體的第四代試劑有效試驗的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。5.以診斷為目的的檢測策略第九頁,共三十九頁,2022年,8月28日(2)化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗采用發(fā)光或熒光底物既可檢測抗體,也可聯(lián)合檢測抗原抗體用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果有效試驗的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。5.以診斷為目的的檢測策略第十頁,共三十九頁,2022年,8月28日(3)快速檢測(RT)及其它檢測試驗這類試驗簡便快速,適用于應(yīng)急檢測、門診急診檢測。一般可在10~30分鐘內(nèi)得出結(jié)果明膠顆粒凝集試驗(PA)免疫滲濾試驗,免疫層析試驗有效試驗的質(zhì)控帶必須顯色5.以診斷為目的的檢測策略第十一頁,共三十九頁,2022年,8月28日5.1.1.4篩查程序(1)初篩試驗根據(jù)檢測目的選用符合要求的篩查試劑對樣品進(jìn)行初篩檢測,對呈陰性反應(yīng)的樣品,可出具HIV抗體陰性(-)報告;對呈陽性反應(yīng)的樣品,需要進(jìn)一步做復(fù)檢試驗5.以診斷為目的的檢測策略第十二頁,共三十九頁,2022年,8月28日(2)復(fù)檢試驗對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品,應(yīng)使用原有試劑和另外一種不同原理(或廠家)的試劑,或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進(jìn)行復(fù)檢試驗。如果初篩檢測使用抗原抗體聯(lián)合試劑,則復(fù)檢必須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑。如兩種試劑復(fù)檢均呈陰性反應(yīng),則報告HIV抗體陰性(-);如均呈陽性反應(yīng),或一陰一陽,需送艾滋病確證實驗室進(jìn)行確證試驗(圖1)。如果抗原抗體聯(lián)合試劑檢測呈陽性反應(yīng),而抗體試劑檢測為陰性反應(yīng),則應(yīng)考慮進(jìn)行HIV-1p24抗原或核酸檢測,必要時進(jìn)行隨訪。艾滋病檢測篩查實驗室復(fù)檢判定為陽性反應(yīng)的樣品,確證實驗室可以直接進(jìn)行確證試驗。5.以診斷為目的的檢測策略第十三頁,共三十九頁,2022年,8月28日HIV抗體篩查檢測流程樣本陽性反應(yīng)一陰一陽陰性反應(yīng)初篩試驗均陽性反應(yīng)復(fù)檢試驗均陰性反應(yīng)送確證實驗室進(jìn)行確認(rèn)檢測報告陰性篩查試劑原有試劑和另一種不同原理(或廠家)的試劑或另外兩種不同原理(或廠家)的試劑

第十四頁,共三十九頁,2022年,8月28日(4)篩查試驗結(jié)果的報告HIV抗體篩查試驗用附表1進(jìn)行報告,陰性反應(yīng)報告為“HIV抗體陰性(-)”;陽性反應(yīng)報告為“HIV抗體待復(fù)檢”。(5)篩查試驗呈陽性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送如需送上級實驗室進(jìn)行復(fù)檢或確證檢測,需要詳細(xì)填寫“HIV抗體復(fù)檢檢測單”和“高致病性病原微生物菌(毒)種或樣本準(zhǔn)運(yùn)證書5.以診斷為目的的檢測策略第十五頁,共三十九頁,2022年,8月28日5.1.2確證試驗5.1.2.1確證試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。5.1.2.2確證樣品可采用血清、血漿、濾紙干血斑樣品。5.1.2.3確證方法包括免疫印跡試驗(WB)、條帶免疫試驗、放射免疫沉淀試驗(RIPA)及免疫熒光試驗(IFA)等。5.以診斷為目的的檢測策略第十六頁,共三十九頁,2022年,8月28日5.1.2.4確證流程使用HIV-1/2混合型試劑進(jìn)行檢測如果呈陽性反應(yīng),則報告HIV-1抗體陽性(+)如果呈陰性反應(yīng),則報告HIV抗體陰性(-)如果不是陰性反應(yīng),但又不滿足陽性判斷標(biāo)準(zhǔn),則報告HIV抗體不確定(±)5.以診斷為目的的檢測策略第十七頁,共三十九頁,2022年,8月28日對HIV抗體不確定(±)結(jié)果的處理4周后隨訪檢測如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng),則報告陰性如出現(xiàn)陽性反應(yīng),則報告陽性如帶型有進(jìn)展,但不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn),應(yīng)繼續(xù)隨訪到8周8周后隨訪檢測如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)則報告陰性隨訪期間可根據(jù)需要,檢測病毒核酸或p24抗原作為輔助診斷如果出現(xiàn)HIV-2型的特異性指示條帶,根據(jù)實際情況需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確證試驗或HIV-2核酸檢測態(tài)疑難樣品送國家艾滋病參比實驗室進(jìn)一步分析5.以診斷為目的的檢測策略第十八頁,共三十九頁,2022年,8月28日5.1.2.6HIV抗體確證試驗結(jié)果報告HIV抗體確證試驗結(jié)果用附表3報告符合HIV-1抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn),報告“HIV-1抗體陽性(+)”,符合HIV-2抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn),報告“HIV-2抗體陽性(+)”。符合HIV抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn),報告“HIV抗體陰性(-)”。如懷疑“窗口期”感染,建議進(jìn)一步做HIV核酸檢測,盡早明確診斷。符合HIV抗體不確定判斷標(biāo)準(zhǔn),報告“HIV抗體不確定(±)”,在備注中應(yīng)注明“4周后復(fù)檢”。5.1.2.7發(fā)出確證報告的同時要做好檢測后咨詢5.以診斷為目的的檢測策略第十九頁,共三十九頁,2022年,8月28日5.1.2.8HIV抗體確證報告由檢測者,復(fù)核人員和簽發(fā)人員簽字后,按原送檢程序反饋一式三份(確證實驗室一份、送檢單位一份、患者一份)。如確證對象戶口不屬于本轄區(qū),確證報告應(yīng)同時抄送感染者戶口所在地的省艾滋病確證中心實驗室。其它系統(tǒng)確證的地方人員,也應(yīng)及時向當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門和省艾滋病確證中心實驗室報告。5.1.2.9省艾滋病確證中心實驗室難以確證的樣品,送國家艾滋病參比實驗室確證。同一受檢對象的樣品在不同實驗室得到不一致的確證結(jié)果時,由國家艾滋病參比實驗室予以仲裁。5.以診斷為目的的檢測策略第二十頁,共三十九頁,2022年,8月28日5.2其它HIV抗體檢測的方法和程序5.2.1VCT替代檢測策略除上述常規(guī)檢測程序以外,對HIV高流行地區(qū)高危人群的VCT檢測,可采用替代策略。5.2.1.1使用要求使用替代策略,應(yīng)在確證中心實驗室和確證實驗室或以上實驗室指定的篩查實驗室進(jìn)行,用臨床試劑質(zhì)量評估敏感性和特異性高的篩查試劑檢測。使用該策略判斷結(jié)果,陽性報告須由確證中心實驗室和確證實驗室或以上實驗室認(rèn)可的篩查實驗室出具。5.以診斷為目的的檢測策略第二十一頁,共三十九頁,2022年,8月28日5.2.2HIV感染產(chǎn)婦所生兒童HIV抗體檢測策略及流程5.2.2.1適用范圍HIV感染產(chǎn)婦所生嬰幼兒已滿18個月的嬰幼兒,其母親HIV感染狀態(tài)不詳,兒童出現(xiàn)HIV相關(guān)臨床表現(xiàn),臨床懷疑HIV感染的兒童。5.以診斷為目的的檢測策略第二十二頁,共三十九頁,2022年,8月28日5.2.3HIV-1新近感染檢測HIV常規(guī)抗體檢測方法可以判定感染和未感染狀態(tài),新近感染檢測方法則用于識別近期感染與既往感染5.以診斷為目的的檢測策略第二十三頁,共三十九頁,2022年,8月28日檢測策略5.以診斷為目的的檢測策略6.以監(jiān)測為目的的檢測策略

7.以血液篩查為目的的檢測策略

第二十四頁,共三十九頁,2022年,8月28日各級艾滋病檢測實驗室所在機(jī)構(gòu)每月應(yīng)填寫《HIV抗體檢測數(shù)及陽性人數(shù)統(tǒng)計報表》(附表6),并于每月10日前完成網(wǎng)絡(luò)直報。未開展網(wǎng)絡(luò)直報的單位,由縣級疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)收集信息后統(tǒng)一上報。8.艾滋病檢測實驗室檢測信息上報第二十五頁,共三十九頁,2022年,8月28日9.質(zhì)量控制

抗體檢測的統(tǒng)計學(xué)室內(nèi)質(zhì)量控制試劑盒內(nèi)部對照為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清,用于判斷每次實驗的有效性,但不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用每一次檢測臨床樣品時,必須有試劑盒內(nèi)部對照,而且只能在同批號的試劑盒中使用。內(nèi)部對照結(jié)果無效,必須重新試驗第二十六頁,共三十九頁,2022年,8月28日室內(nèi)質(zhì)控品(外部對照,外部質(zhì)控品)非試劑盒組份的外部質(zhì)控品,包括強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性質(zhì)控血清,可以監(jiān)控檢測的重復(fù)性日常檢測中可以只設(shè)置一個弱陽性質(zhì)控,以該試劑盒臨界值(Cut-off)的2~3倍為宜(S/Co值=2~3)外部質(zhì)控品的作用是,判斷該批臨床樣品檢測的有效性,因此,每次實驗必須包含室內(nèi)質(zhì)控品,其結(jié)果無效,必須重新試驗室內(nèi)質(zhì)控品可以是商品或?qū)嶒炇易孕兄苽滟|(zhì)量控制

第二十七頁,共三十九頁,2022年,8月28日室內(nèi)質(zhì)控品的使用和質(zhì)量要求每一次實驗必須使用室內(nèi)質(zhì)控品,以便監(jiān)控實驗的重復(fù)性同時可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異室內(nèi)質(zhì)控品的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異(cv<20%)質(zhì)控品應(yīng)穩(wěn)定、無菌,且不含有影響試劑反應(yīng)的防腐劑一般采用在不同批次檢測取得至少20個數(shù)據(jù)后進(jìn)行統(tǒng)計繪圖質(zhì)量控制

第二十八頁,共三十九頁,2022年,8月28日=1.74±1s=1.49-1.99±2s=1.24-2.24±3s質(zhì)控圖第二十九頁,共三十九頁,2022年,8月28日外部對照S/CO值超出±2s,系統(tǒng)處于告警狀態(tài),應(yīng)予注意,是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察質(zhì)控圖的判定和分析-①告警第三十頁,共三十九頁,2022年,8月28日質(zhì)控圖的判定和分析-

②失控外部對照S/CO值超出±3s,系統(tǒng)處于失控狀態(tài),本次實驗結(jié)果不能被接受,需查找原因,重新檢測第三十一頁,共三十九頁,2022年,8月28日質(zhì)控圖的判定和分析-

③位移,④趨勢連續(xù)幾個(3-5次)質(zhì)控對照值都落在均值的一側(cè)稱之為位移,提示試驗條件發(fā)生了較大的變化,如使用新批號的試劑盒、使用新的質(zhì)控品、實驗員的更換、孵育溫度的改變、儀器故障等當(dāng)連續(xù)幾個(5-7個)質(zhì)控對照值幾乎按一個方向分布時稱之為趨勢,通常由參數(shù)的緩慢改變引起,如試劑失效和移液器逐漸不準(zhǔn)確等第三十二頁,共三十九頁,2022年,8月28日第三十三頁,共三十九頁,2022年,8月28日9.1.3.4質(zhì)控圖的分析及失控處理實驗室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。當(dāng)質(zhì)控已有計劃并恰當(dāng)?shù)貓?zhí)行時,要求可靠的均值和標(biāo)準(zhǔn)差用于計算質(zhì)控限,將假失控概率降到最低。當(dāng)出現(xiàn)失控時,對原有外部質(zhì)控品重復(fù)測定或更換新的外部質(zhì)控品進(jìn)行測定不是最有效的方法,必須找出問題發(fā)生的原因,找出解除問題的方法,并消除原因,防止將來出現(xiàn)同樣的問題。第三十四頁,共三十九頁,2022年,8月28日出現(xiàn)一次2s范圍的變化時,系統(tǒng)處于告警狀態(tài),應(yīng)予注意,是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。出現(xiàn)下列情況時,應(yīng)暫停檢測查找原因: (1)出現(xiàn)一次超出3s范圍的變化; (2)連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向超出2s范圍的變化; (3)連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的超出1s范圍的變化; (4)連續(xù)10次結(jié)果都在1s范圍內(nèi),但落在均值線的同一側(cè)。9.1.3.4質(zhì)控圖的分析及失控處理第三十五頁,共三十九頁,2022年,8月28日繪制和分析質(zhì)控圖的要點(1)分析數(shù)據(jù)時,超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。(2)由專人負(fù)責(zé)建立質(zhì)控圖,每月定期召開質(zhì)控分析會,討論本月的質(zhì)量控制情況。(3)建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑,更換不同廠家的試劑后,須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑如外部質(zhì)控品測定出現(xiàn)較大變化也應(yīng)重新制作質(zhì)控圖。使用新批號或不同廠家的試劑,必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。(4)發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失控,應(yīng)填寫報告單,上交質(zhì)量負(fù)責(zé)人,分析原因并決定是否發(fā)出檢測報告。(

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