動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合

細(xì)胞工程植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)胚胎移植核移植植物細(xì)胞工程技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)所采用技術(shù)的理論基礎(chǔ)植物細(xì)胞工程通常采用的技術(shù)手段植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞的全能性植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對(duì)于大面積燒傷病人來(lái)講，健康皮膚很有限，請(qǐng)同學(xué)們想一想如何來(lái)治療該病人？

許多動(dòng)物的細(xì)胞能夠分泌蛋白質(zhì),如抗體等.但是,單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)量是很少的,怎樣才能獲得大量的分泌蛋白呢?一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件P461、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境

（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、微量元素、無(wú)機(jī)鹽、促生長(zhǎng)因子、動(dòng)物血清、血漿等。）3、溫度和PH

36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念P441、概念：2、目的：3、理論基礎(chǔ)：細(xì)胞增值獲得細(xì)胞和細(xì)胞產(chǎn)物

就是從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程P44-46動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液

原代培養(yǎng)細(xì)胞增殖去掉組織間蛋白

傳代培養(yǎng)胰蛋白酶10代細(xì)胞50代細(xì)胞50代以后核型不變核型改變遺傳物質(zhì)改變?nèi)?、?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：四、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用P47大規(guī)模生產(chǎn)有重要價(jià)值的生物制品，如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等為基因工程提供受體細(xì)胞用于檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性科學(xué)家培養(yǎng)正常或各種病變的細(xì)胞，用于生理、病理、藥理等方面的研究。獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物細(xì)胞的全能性植物體培養(yǎng)結(jié)果快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞群體1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的正確過(guò)程是A．原代培養(yǎng)—→傳代培養(yǎng)—→細(xì)胞株—→細(xì)胞系B．原代培養(yǎng)—→傳代培養(yǎng)—→細(xì)胞系—→細(xì)胞株C．傳代培養(yǎng)—→細(xì)胞系—→原代培養(yǎng)—→細(xì)胞株D．原代培養(yǎng)—→細(xì)胞系—→傳代培養(yǎng)—→細(xì)胞株2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于A．培養(yǎng)基不同B．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在與菌條件下進(jìn)行C．動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能D．動(dòng)物細(xì)胞能大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株3、下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是A．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的是獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白B．細(xì)胞遺傳物質(zhì)的改變發(fā)生于原代培養(yǎng)過(guò)程中C．在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液D．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)素和動(dòng)物血清等4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的用途有

①生產(chǎn)有價(jià)值的生物制品，如病毒疫苗、干擾素等②生產(chǎn)基因工程技術(shù)中所用的受體細(xì)胞③可以用于檢測(cè)有毒物質(zhì)④培養(yǎng)的各種細(xì)胞可直接用于生理、病理、藥理等方面的研究

A．①②B．①②③C．②③④D．①②③④

(1)容器A中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般取自＿＿＿＿＿＿＿＿＿

(2)容器A中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是＿＿，然后用＿＿＿＿＿酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)。這樣做的目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿

(3)培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行，這時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)稱為＿＿＿＿。

(4)為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用＿＿＿＿＿處理，然后配置成＿＿＿＿＿，再分裝。

(5)有少數(shù)的細(xì)胞能存活下來(lái)，繼續(xù)傳下去，一般能傳到40—50代，這種傳代細(xì)胞叫做＿＿＿＿＿。這種細(xì)胞的遺傳物質(zhì)與前面的細(xì)胞＿＿＿（相同，不同）。（6）這種細(xì)胞傳至50代后一般不能再傳，但有少數(shù)細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，帶有

細(xì)胞的特征，有可能在培養(yǎng)條件下無(wú)限制的傳下去。

胚胎或幼齡動(dòng)物組織器官剪碎胰蛋白使每個(gè)細(xì)胞都能與培養(yǎng)液接觸原代培養(yǎng)胰蛋白酶懸浮液細(xì)胞株相同癌動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物動(dòng)物體細(xì)胞核移植概念:將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高）受體細(xì)胞：MⅡ期的卵母細(xì)胞１、動(dòng)物的克隆與植物克隆一樣嗎？不２、用動(dòng)物體細(xì)胞進(jìn)行克隆的過(guò)程,其實(shí)際操作過(guò)程是什么？動(dòng)物克隆過(guò)程的實(shí)際是細(xì)胞核移植３、閱讀課本P48，簡(jiǎn)述高產(chǎn)牛體細(xì)胞核移植過(guò)程

思考題１、核在進(jìn)行體細(xì)胞核移植之前，為何要去掉受體卵母細(xì)胞的核？為使核移植動(dòng)物的遺傳物質(zhì)全部來(lái)自有利用價(jià)值的動(dòng)物提供的細(xì)胞。２、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，為什么？10代以內(nèi)的細(xì)胞保持一般保持正常二倍體的核型，未突變3、細(xì)胞核移植生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？不是，克隆動(dòng)物絕大部分DNA來(lái)自供體細(xì)胞核，但核外還有少部分DNA（如線粒體DNA）來(lái)自受體卵母細(xì)胞克隆動(dòng)物的研究意義1.克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2.改良動(dòng)物品種3.治療人類(lèi)疾病，作為供體4.保護(hù)瀕危動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題：許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過(guò)大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體如果將牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽(yáng)就可以擠出牛奶啦！動(dòng)物細(xì)胞也能融合嗎？動(dòng)物細(xì)胞融合1.定義：2.原理：3.融合方法：4.意義：5.應(yīng)用：細(xì)胞膜具有流動(dòng)性生產(chǎn)單克隆抗體1、動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動(dòng)、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無(wú)限增殖如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？雜種細(xì)胞二、單克隆抗體1.傳統(tǒng)獲取抗體方法：缺點(diǎn)：反復(fù)注射，血清中獲?、佗冖蹌?dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)B、BB、B瘤、瘤瘤、瘤只有雜交細(xì)胞才能活動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體制備過(guò)程獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞2.制備過(guò)程：①獲取效應(yīng)B細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞通過(guò)什么方法獲得效應(yīng)B細(xì)胞？怎樣能得到足夠多的骨髓瘤細(xì)胞？②人工誘導(dǎo)融合：關(guān)鍵：方法：結(jié)果：③用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞此細(xì)胞特點(diǎn)：體外進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)膜的融合BBBB瘤瘤瘤瘤①迅速大量增值②產(chǎn)生專(zhuān)一抗體④克隆雜交細(xì)胞，再篩選，目的：⑤體外或體內(nèi)克隆⑥提取單克隆抗體3.單克隆抗體優(yōu)點(diǎn)：篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞①特異性強(qiáng)②靈敏度高③可以大量制備4.單克隆抗體的應(yīng)用：

①在基礎(chǔ)理論研究中具有重要意義

②在疾病診斷、治療和預(yù)防方面，具有特異性高、靈敏度高等優(yōu)越性。③生物導(dǎo)彈附錄資料:不需要的可以自行刪除常見(jiàn)職業(yè)病簡(jiǎn)介

塵肺病一、塵肺病的概念和種類(lèi)：生產(chǎn)過(guò)程中長(zhǎng)期吸入生產(chǎn)性粉塵所引起的以肺組織纖維化為主的疾病稱塵肺病。1.矽肺2.煤工塵肺3.石墨塵肺4.碳黑塵肺5.石棉肺6.滑石塵肺7.水泥塵肺8.云母塵肺9.陶工塵肺10.鋁塵肺11.電焊工塵肺12.鑄工塵肺13.根據(jù)《塵肺病診斷標(biāo)準(zhǔn)》和《塵肺病理診斷標(biāo)準(zhǔn)》可以診斷的其他塵肺病二、影響粉塵致病的因素1、粉塵的理化性質(zhì)，無(wú)機(jī)粉塵中以游離二氧化硅致纖維化能力最強(qiáng)，游離二氧化硅含量超過(guò)10%的粉塵，稱為矽塵，是矽肺的致病因素。2、粉塵的濃度和暴露時(shí)間。3、粉塵的分散度：即粉塵粒徑的大小，粒徑越小，分散度越高。4、粉塵的硬度5、粉塵的溶解度、荷電性和爆炸性。三、粉塵的致病機(jī)理粉塵的致病機(jī)理有脂質(zhì)過(guò)氧化學(xué)說(shuō)，鈣離子通道學(xué)說(shuō)，免疫學(xué)說(shuō)等。但無(wú)論通過(guò)何種機(jī)理，都是以下過(guò)程空氣中的粉塵→經(jīng)呼吸道進(jìn)入肺泡→肺泡中的吞噬細(xì)胞吞噬矽塵顆?！鷫m粒通過(guò)不同機(jī)制對(duì)吞噬細(xì)胞發(fā)生毒作用→吞噬細(xì)胞分泌致纖維化因子→肺組織纖維化→吞噬細(xì)胞破裂→釋放出矽塵顆粒→矽塵顆粒被另一吞噬細(xì)胞吞噬→繼續(xù)發(fā)生毒作用四、塵肺病的臨床表現(xiàn)1、癥狀和體征：早期有咳嗽、咳痰、胸悶氣短、胸痛等表現(xiàn)，并進(jìn)行性加重。但塵肺病人的臨床表現(xiàn)與病變程度往往不一致。2、胸部X-線表現(xiàn)：肺間質(zhì)纖維化的表現(xiàn)3、并發(fā)癥：最常見(jiàn)的有肺結(jié)核、肺源性心臟病、氣胸、肺部感染等。:五、塵肺病的診斷:應(yīng)遵循職業(yè)病診斷原則1、有職業(yè)病診斷資質(zhì)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)中，3名以上有診斷資質(zhì)的醫(yī)生集體診斷。2、本人提出職業(yè)病診斷申請(qǐng)（可以在戶口所在地、工作單位所在地和常住地職業(yè)病診斷機(jī)構(gòu)）。3、用人單位提供職業(yè)史證明材料、及以往職業(yè)衛(wèi)生檢測(cè)、健康監(jiān)護(hù)等資料。4、依據(jù)國(guó)家職業(yè)病診斷標(biāo)準(zhǔn)和病人臨床表現(xiàn)進(jìn)行綜合分析。汞中毒一、汞的理化特性和接觸機(jī)會(huì)汞常溫下呈液體，表面張力大易形成很小的汞珠，易揮發(fā)，質(zhì)量大易沉積在車(chē)間空氣的底部。遇碘形成碘化汞沉淀。常用與燈具、儀表燈行業(yè)。二、汞中毒的機(jī)理和臨床表現(xiàn)1、中毒機(jī)理：空氣中的汞通過(guò)呼吸道極易吸收進(jìn)入體內(nèi)，在體內(nèi)主要分布于肝臟、中樞圣經(jīng)系統(tǒng)。汞與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)上的巰基結(jié)合，使含巰基的酶失去活性而發(fā)生中毒。2、汞中毒的臨床表現(xiàn)：1）口腔炎2）震顫：舌、指尖、眼瞼3）易興奮征三、汞中毒的防治1、改革生產(chǎn)工藝、汞作業(yè)車(chē)間地面應(yīng)光滑、并在車(chē)間內(nèi)四周設(shè)溝槽、排風(fēng)扇設(shè)在車(chē)間的下部、定期用碘對(duì)車(chē)間進(jìn)行熏蒸。2、嚴(yán)格的健康監(jiān)護(hù)措施3、治療：二巰基丙磺酸鈉或二巰基丁二酸鈉鉛中毒鉛可通過(guò)消化道、呼吸道吸收進(jìn)入體內(nèi)，職業(yè)接觸主要通過(guò)呼吸道，生活接觸主要通過(guò)消化道吸收。鉛對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、造血系統(tǒng)、肝臟有毒性作用，尤其是對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)和造血系統(tǒng)。

兒童高鉛血癥和鉛中毒要依據(jù)兒童靜脈血鉛水平進(jìn)行診斷。

高鉛血癥：連續(xù)兩次靜脈血鉛水平為100～199mg/L；

鉛中毒：連續(xù)兩次靜脈血鉛水平等于或高于200mg/L；并依據(jù)血鉛水平分為輕、中、重度鉛中毒。

輕度鉛中毒：血鉛水平為200～249mg/L；

中度鉛中毒：血鉛水平為250～449mg/L；

重度鉛中毒：血鉛水平等于或高于450mg/L；職業(yè)性鉛中毒的診斷：血鉛≥600mg/L刺激性氣體中毒一、刺激性氣體的種類(lèi)：常見(jiàn)的刺激性氣體有：氨氣、氯氣、氯化氫氣體、氮氧化物、二氧化硫、三氧化硫、光氣、硫酸二甲酯、氟化物、環(huán)氧乙烷、臭氧等。二、刺激性氣體的中毒機(jī)理刺激性氣體根據(jù)其水溶性不同，高水溶性的主要作用于上呼吸道等，對(duì)上呼吸道造成刺激癥狀，如氨氣、氯化氫等。低水溶性的上呼吸道刺激性小，可進(jìn)入深部呼吸道和肺泡，在肺泡內(nèi)水解，對(duì)肺泡上皮細(xì)胞造成損害，使通透性增強(qiáng)，肺間質(zhì)中的液體進(jìn)入肺泡，造成肺水腫。三、急性刺激性氣體中毒：輕度中毒：急性氣管炎或支氣管炎中毒中毒：化學(xué)性肺炎重度重度：化學(xué)性肺水腫四：刺激性化學(xué)物所致慢性阻塞性肺疾病病2013版職業(yè)病目錄新增“刺激性化學(xué)物所致慢性阻塞性肺疾病”窒息性氣體中毒一、窒息性氣體的概念：窒息性氣體是指被機(jī)體吸入后，可使氧的供應(yīng)、攝取、運(yùn)輸、和利用發(fā)生障礙，使全身組織細(xì)胞得不到或不能氧，而導(dǎo)致組織細(xì)胞缺氧窒息的有害氣體的總稱。二、窒息性氣體的分類(lèi)1、單純窒息性氣體如氮?dú)?，甲烷，乙烷等?、化學(xué)窒息性氣體常見(jiàn)有一氧化碳，硫化氫，氫氰酸等。三、窒息性氣體