醫(yī)學(xué)科研入門科研設(shè)計(jì)和撰寫申報(bào)書

醫(yī)學(xué)科研入門科研設(shè)計(jì)和撰寫申報(bào)書第1頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四Background–minireviewUnclearControversialNotreportedFurtherinvestigationShortcomingsHypothesisExperimentsConclusionFutureInvestigationSignificanceMethodResultsDiscussion第2頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四科研設(shè)計(jì)第3頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四科研設(shè)計(jì)概論醫(yī)學(xué)科研的基本要素科研設(shè)計(jì)的基本原則科研設(shè)計(jì)的基本步驟統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)第4頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四定義

醫(yī)學(xué)科研設(shè)計(jì)是研究醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中如何科學(xué)、合理地安排實(shí)驗(yàn)因素，提高實(shí)驗(yàn)效應(yīng)，及如何排除影響實(shí)驗(yàn)的非處理因素?？紤]周全、設(shè)計(jì)合理的研究方案可收事半功倍之效，而設(shè)計(jì)不佳的研究方案常招致失敗及時(shí)間、經(jīng)費(fèi)的浪費(fèi)。

專業(yè)設(shè)計(jì)：指運(yùn)用專業(yè)理論知識和技術(shù)進(jìn)行設(shè)計(jì),主要是解決研究的有用性、獨(dú)創(chuàng)性和科學(xué)性,以回答、解決科學(xué)問題，驗(yàn)證專業(yè)假說。統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)：運(yùn)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)理論和方法進(jìn)行設(shè)計(jì),包括資料的收集、整理、分析全過程的統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)想和科學(xué)安排，以保證樣本的代表性和樣本間的可比性,以最少的調(diào)查、實(shí)驗(yàn)觀察例數(shù)進(jìn)行高效率的統(tǒng)計(jì)分析，得出準(zhǔn)確的結(jié)果和可靠的結(jié)論。

第5頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四專業(yè)設(shè)計(jì)錯(cuò)誤蘇聯(lián)一神經(jīng)論權(quán)威設(shè)計(jì)了免疫抗體形成的神經(jīng)反射機(jī)制的實(shí)驗(yàn)：他將動物后肢與軀體分離，僅保留由肢體傳入軀體的神經(jīng)干，然后在“離體”后肢注射抗原，不久將該神經(jīng)干切斷。過些時(shí)候動物血中出現(xiàn)特異性抗體。該權(quán)威認(rèn)為特異性抗體是由于抗原作用于神經(jīng)感受器經(jīng)反射而形成的。設(shè)計(jì)用動物急性感染實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯縏h1/Th2細(xì)胞在炎癥中的作用。第6頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四定義

醫(yī)學(xué)科研設(shè)計(jì)是研究醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中如何科學(xué)、合理地安排實(shí)驗(yàn)因素，提高實(shí)驗(yàn)效應(yīng)，及如何排除影響實(shí)驗(yàn)的非處理因素。考慮周全、設(shè)計(jì)合理的研究方案可收事半功倍之效，而設(shè)計(jì)不佳的研究方案常招致失敗及時(shí)間、經(jīng)費(fèi)的浪費(fèi)。

專業(yè)設(shè)計(jì)：指運(yùn)用專業(yè)理論知識和技術(shù)進(jìn)行設(shè)計(jì),主要是解決研究的有用性、獨(dú)創(chuàng)性和科學(xué)性,以回答、解決科學(xué)問題，驗(yàn)證專業(yè)假說。統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)：運(yùn)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)理論和方法進(jìn)行設(shè)計(jì),包括資料的收集、整理、分析全過程的統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)想和科學(xué)安排，以保證樣本的代表性和樣本間的可比性,以最少的調(diào)查、實(shí)驗(yàn)觀察例數(shù)進(jìn)行高效率的統(tǒng)計(jì)分析，得出準(zhǔn)確的結(jié)果和可靠的結(jié)論。

第7頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)主要為了保證科研結(jié)果符合四個(gè)性：－有用性：目的性和可行性－獨(dú)創(chuàng)性：先進(jìn)性－可重復(fù)性－經(jīng)濟(jì)性第8頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四科研設(shè)計(jì)概論醫(yī)學(xué)科研的基本要素科研設(shè)計(jì)的基本原則科研設(shè)計(jì)的基本步驟統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)第9頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四是否主動施加干預(yù)?1.實(shí)驗(yàn)研究(干預(yù)):

受試對象：人——臨床試驗(yàn)（clinicaltrial）動物——動物實(shí)驗(yàn)（animalexperiment

）臨床試驗(yàn)：治療——臨床療效實(shí)驗(yàn)預(yù)防——社區(qū)干預(yù)實(shí)驗(yàn)（communityinterventiontrial）2.調(diào)查研究(無干預(yù)):被動地觀察、如實(shí)記錄

聯(lián)系：調(diào)查研究可為實(shí)驗(yàn)研究提供線索，而實(shí)驗(yàn)研究還需要通過調(diào)查研究加以證實(shí)。第10頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四實(shí)驗(yàn)研究的基本要素降壓藥高血壓病人血壓值處理因素受試對象實(shí)驗(yàn)效應(yīng)三要素：1.處理因素；2.受試對象；3.實(shí)驗(yàn)效應(yīng)其他因素其他效應(yīng)第11頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四處理因素(studyfactor，treatment)

例：藥劑、手術(shù)方法、毒物抓住主要處理因素區(qū)分處理與非處理因素處理因素必須標(biāo)準(zhǔn)化

處理因素是指外界施加于受試對象的因素，是在實(shí)驗(yàn)中需觀察并闡明其效應(yīng)功能的因素。第12頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四單因素單水平表3-1細(xì)菌脂多糖對人外周血單個(gè)核細(xì)胞干擾素γ分泌的影響組別目的LPS觀察LPS（1μg/ml）刺激后人外周血單個(gè)核細(xì)胞干擾素γ分泌水平對照溶劑（PBS），其他條件與實(shí)驗(yàn)組一致，排除非處理因素引起的變化第13頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四單因素多水平孕激素對滋養(yǎng)細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)的影響

組別目的孕激素1×10-7mol/L觀察不同濃度的孕激素對滋養(yǎng)細(xì)孕激素1×10-6mol/L胞表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶-9的影響

孕激素1×10-5mol/L空白對照排除非處理因素的干擾第14頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四多因素單水平

美托康對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

組別腦缺血再灌注美托康目的

處理組

++觀察美托康對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

對照A

假手術(shù)+觀察美托康的影響對照B+-觀察腦缺血再灌注的影響對照C假手術(shù)-排除手術(shù)的影響對照D不手術(shù)-排除其他因素的影響第15頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四多因素多水平

地塞米松抗過敏效應(yīng)實(shí)驗(yàn)研究組別口服肌注目的處理組A0.1mg/kg口服小劑量地塞米松對過敏反應(yīng)的作用處理組B0.5mg/kg口服中劑量地塞米松對過敏反應(yīng)的作用處理組C1.0mg/kg口服大劑量地塞米松對過敏反應(yīng)的作用處理組D0.1mg/kg肌注小劑量地塞米松對過敏反應(yīng)的作用處理組E0.5mg/kg肌注中劑量地塞米松對過敏反應(yīng)的作用處理組F1.0mg/kg肌注大劑量地塞米松對過敏反應(yīng)的作用對照組G溶劑排除口服因素造成的影響對照組H

生理鹽水排除肌注因素造成的影響對照組I排除其他因素的影響

第16頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四受試對象(studysubjects)病例的選擇：納入標(biāo)準(zhǔn)、剔除標(biāo)準(zhǔn)動物的選擇：種類、品系、年齡、體重、窩別、營養(yǎng)……離體器官、組織

細(xì)胞分子

須對處理因素敏感反應(yīng)須穩(wěn)定體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)相結(jié)合invitro，invivo，exvivo第17頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四人體實(shí)驗(yàn)常見的設(shè)計(jì)類型病例報(bào)告為疾病的發(fā)病表現(xiàn)、機(jī)理及診治提供詳盡的感性資料。病例報(bào)告往往是識別新出現(xiàn)或不常見的疾病或疾病罕見表現(xiàn)的第一線索。橫斷面研究包括普查和抽樣調(diào)查。

病例對照研究回顧病例組暴露因素，通過與對照組進(jìn)行比較，研究這些暴露因素的發(fā)生頻率與某疾病之間的關(guān)系。(由果到因）隊(duì)列研究按照所研究人群是否暴露于某種因素將受試對象分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，隨訪觀察兩組人群某病的發(fā)病率，判斷暴露因素與疾病發(fā)病率的關(guān)系。分為前瞻性隊(duì)列研究(由因到果）和回顧性隊(duì)列研究。臨床試驗(yàn)臨床試驗(yàn)中的受試對象一般采用隨機(jī)化原則分為治療組和對照組，觀察治療手段的療效。

第18頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四動物分類按微生物學(xué)要求，實(shí)驗(yàn)動物可分為4個(gè)等級：I級：普通動物II級：清潔動物III級：無特殊病原體動物（SPF）IV級：無菌動物（GF）按照遺傳學(xué)特性要求，實(shí)驗(yàn)動物也可分為4類：I類：近交系或稱為純系動物II類：突變系動物，包括轉(zhuǎn)基因動物和基因敲除動物III類：遠(yuǎn)交系動物，又稱封閉群IV類：雜交群或稱異系雜交第19頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四第20頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四家兔對體溫變化十分敏感，宜選用做發(fā)熱、解熱及致熱源檢查實(shí)驗(yàn)。觀察避孕藥對排卵影響的實(shí)驗(yàn)宜選用兔、貓；對具有雌激素活性的藥物進(jìn)行避孕藥效研究，不能選用小鼠與大鼠。以高膽固醇膳食飼喂兔、雞、豬、狗、猴等動物，均可誘發(fā)高脂血癥或動脈粥樣硬化，而猴和豬的心臟冠狀動脈前降支還形成斑塊及大片心肌梗死，情況與人更為相似，故動脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)多選用豬、猴及兔。家犬的胰腺、胃較小，宜用于胰腺摘除術(shù)及胃腸道生理的研究。大鼠無膽囊，不會嘔吐，故不能用于膽功能觀察；狗、貓、猴等動物嘔吐反應(yīng)敏感，適宜用于嘔吐實(shí)驗(yàn)。BALB/c小鼠與其他近交系相比，肝、脾與體重的比值較大，對放射線甚為敏感，故常用于制備單克隆抗體。C57BL/6小鼠具有干擾素產(chǎn)量高、對放射物質(zhì)中等耐受、補(bǔ)體活性高、易誘發(fā)免疫耐受等特性，是腫瘤學(xué)及免疫學(xué)研究的常用品系。如遺傳性高血壓大鼠、糖尿病小鼠、自身免疫病小鼠等。還可利用某些特殊缺陷型小鼠，如胸腺缺陷的裸鼠，由于缺乏T細(xì)胞，故可接種人腫瘤，用以篩選抗腫瘤藥等。第21頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四細(xì)胞原代細(xì)胞：經(jīng)特殊分離方法從胚胎、組織器官及外周血等初分離的細(xì)胞在體外培養(yǎng)。傳代細(xì)胞：經(jīng)傳代方式進(jìn)行再次培養(yǎng)的細(xì)胞稱為傳代細(xì)胞。細(xì)胞株：單細(xì)胞大量擴(kuò)增后形成生物學(xué)特性穩(wěn)定的克隆化細(xì)胞群，稱為細(xì)胞株。包括正常細(xì)胞株和腫瘤細(xì)胞株。基因缺陷和轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株。懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。第22頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四用細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)不受機(jī)體內(nèi)環(huán)境因素影響，從而避免個(gè)體差異，有利于探討各種物理、化學(xué)和生物因素對腫瘤細(xì)胞生命活動的影響。便于同時(shí)從細(xì)胞、分子與基因三個(gè)水平研究腫瘤細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能及癌變發(fā)生機(jī)制。能長期傳代、保存，便于觀察腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性和遺傳行為的改變。能快速篩選抗癌藥物，適宜進(jìn)行耐藥機(jī)制、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究。研究周期較短，經(jīng)濟(jì)。

缺點(diǎn)：不能完全反映體內(nèi)狀況，常與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)互相驗(yàn)證。長期培養(yǎng)易改變原有的性狀。易發(fā)生支原體感染。優(yōu)點(diǎn)：第23頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四細(xì)胞庫資源ATCC(AmericanTypeCultureCollection)，即美國細(xì)胞、菌種保藏中心，目前能提供3000余種細(xì)胞系、15000余種細(xì)菌和噬菌體、2500余種動植物病毒、700余種人癌細(xì)胞系。CascadeBiologics,Inc.：該公司主要產(chǎn)品為人原代細(xì)胞，包括正常人皮膚細(xì)胞、心血管內(nèi)皮細(xì)胞、角膜上皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞等。網(wǎng)址：第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心：該中心保存多種腫瘤細(xì)胞株。網(wǎng)址：/web/anim武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心：是國內(nèi)較大且保存品種較多的細(xì)胞保藏中心。E-mail:cctcc@中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細(xì)胞庫：是國內(nèi)較大且保存品種較多的細(xì)胞保藏中心。網(wǎng)址：/cellbank/homepage.htm中山醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院。第24頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四分子研究DNA、RNA和蛋白質(zhì)常用的重要數(shù)據(jù)庫為：基因數(shù)據(jù)庫（http://www.ncbi.nlm./Genbank/）非編碼RNA數(shù)據(jù)庫（http://biobases.ibch.poznan.pl/ncRNA/）蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫（http://www.expasy.ch/spot/或http://www.ebi.ac.uk/swissprot/）蛋白質(zhì)組分析數(shù)據(jù)庫（http://www.ebi.ac.uk/proteome/）第25頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四分子研究基因與蛋白分子的檢測：單個(gè)、幾個(gè)與芯片的檢測；基因多態(tài)性研究、SNP、微衛(wèi)星等基因組、蛋白組和代謝酶組的變化基因和蛋白的調(diào)控、分子表觀遺傳學(xué)基因和蛋白的結(jié)構(gòu)基因和蛋白的關(guān)系、蛋白與蛋白的相互作用第26頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四實(shí)驗(yàn)效應(yīng)(experimentaleffect)

處理因素作用于受試對象的結(jié)果，通過觀察指標(biāo)表達(dá)。觀察指標(biāo)應(yīng)相關(guān)聯(lián)、客觀、精確、靈敏、特異。1.客觀性：主觀指標(biāo)和客觀指標(biāo)。2.精確性：

準(zhǔn)確度(accuracy)或真實(shí)性（validity）：觀察值與真值的接近程度，受系統(tǒng)誤差的影響(如靈敏度、特異度)。精密度(precision)或可靠性（reliabiliy）或重復(fù)性（repeatability）：重復(fù)觀察時(shí)觀察值與其均值的接近程度，受隨機(jī)誤差的影響（如一致百分率、Kappa值）。3.

靈敏性和特異性：指標(biāo)的互補(bǔ)性、可靠性和穩(wěn)定性（標(biāo)準(zhǔn)化）第27頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四科研設(shè)計(jì)概論醫(yī)學(xué)科研的基本要素科研設(shè)計(jì)的基本原則科研設(shè)計(jì)的基本步驟統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)第28頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則對照的原則：

-意義：消除系統(tǒng)誤差，鑒別處理和非處理因素的差異

-類型：空白對照、陽性對照、陰性對照、自身對照、相互對照隨機(jī)的原則：

-對照組和處理組除處理因素不同外，其余應(yīng)全部相同。

-動物實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組；觀察切片也應(yīng)隨機(jī)選擇視野重復(fù)的原則：

-隨機(jī)原則可排除大部分非處理因素的影響，但不能全部消除；因此，有必要重復(fù)，以反映客觀真實(shí)性。

-表現(xiàn)為一定的試驗(yàn)樣本數(shù)（人、動物、細(xì)胞株）第29頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四對照(control)的原則

對照的意義：①區(qū)分處理因素與非處理因素的效應(yīng)，是比較的必要基礎(chǔ)

藥物治療例:老年性慢性支氣管炎氣候轉(zhuǎn)暖,自然緩解②消除和減少實(shí)驗(yàn)誤差處理組：對照組：比較結(jié)果處理因素非處理因素+處理效應(yīng)+非處理效應(yīng)非處理因素非處理效應(yīng)處理因素處理效應(yīng)第30頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四直接凝集和間接凝集試驗(yàn)

診斷血吸蟲、RA、鉤端螺旋體陽性對照和陰性對照可監(jiān)控方法的正確性和特異性第31頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四對照的形式

㈠空白對照(blankcontrol)：對照組不加任何處理因素。

例如：試劑空白、血樣空白、無酶解空白、底物空白等。包括：空白對照、實(shí)驗(yàn)對照、標(biāo)準(zhǔn)對照、自身對照、相互對照、歷史對照第32頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四對照的形式

實(shí)驗(yàn)對照(experimentalcontrol)：施加每一因素均需設(shè)置對照+非處理因素對照（安慰劑對照）。含賴氨酸面包+非處理因素→賴氨酸效應(yīng)

+面包效應(yīng)+非處理因素效應(yīng)

面包+非處理因素→面包效應(yīng)+非處理因素效應(yīng)賴氨酸賴氨酸效應(yīng)

非處理因素→+非處理因素效應(yīng)第33頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四對照的形式

標(biāo)準(zhǔn)對照(standardcontrol)：以現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)或正常值作對照。

例①某種新的方法能否代替?zhèn)鹘y(tǒng)方法的研究；②某病患者與正常人的某生理、生化指標(biāo)是否相同。

——實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用較多第34頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四對照的形式

自身對照：實(shí)驗(yàn)在同一受試對象上進(jìn)行特點(diǎn)：簡單易行，使用廣泛。但若試驗(yàn)前后某些環(huán)境或自身因素發(fā)生改變，并且會影響試驗(yàn)結(jié)果，就難以說明問題。

第35頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四對照的形式

相互對照：幾個(gè)實(shí)驗(yàn)組互相對照例如：比較幾種藥物治療同一疾病的療效常用半數(shù)有效量、半數(shù)致死量比較幾種藥物之間的效應(yīng)和毒性。第36頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四對照的形式

歷史對照：以過去的研究結(jié)果作對照。與本人或他人過去的研究結(jié)果作比較——不好?。。。。。〉?7頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四對照設(shè)置方法配對對照法：節(jié)省樣本數(shù)，抽樣誤差最小，統(tǒng)計(jì)效率最高

自體配對：指在同一個(gè)體處理前后或不同部位作為對照組和處理組，比較兩組間差異。

異體配對：選擇同窩，性別、體重一致的動物，或相同疾病、性別、年齡、病情等相當(dāng)?shù)牟∪伺鋵?，在每個(gè)對子內(nèi)部隨機(jī)分至對照組和實(shí)驗(yàn)組，比較兩組間差異。組間對照法：組間對照是將條件基本一致的不同個(gè)體隨機(jī)分組，分別接受對照處理與實(shí)驗(yàn)處理，比較兩組或幾組間差異。交叉對照法：即先接受對照處理的個(gè)體隨后接受試驗(yàn)處理，先接受試驗(yàn)處理的個(gè)體隨后接受對照處理，通過交叉而減少個(gè)體差異。第38頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則對照的原則：

-意義：消除系統(tǒng)誤差，鑒別處理和非處理因素的差異

-類型：空白對照、陽性對照、陰性對照、自身對照、相互對照隨機(jī)的原則：

-對照組和處理組除處理因素不同外，其余應(yīng)全部相同。

-動物實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組；觀察切片也應(yīng)隨機(jī)選擇視野重復(fù)的原則：

-隨機(jī)原則可排除大部分非處理因素的影響，但不能全部消除；因此，有必要重復(fù)，以反映客觀真實(shí)性。

-表現(xiàn)為一定的試驗(yàn)樣本數(shù)（人、動物、細(xì)胞株）第39頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四隨機(jī)化(randomization)

分組的原則

隨機(jī)化原則：隨機(jī)≠“隨便”,指每個(gè)受試對象以機(jī)會均等的原則隨機(jī)地分配到試驗(yàn)組和對照組。目的是使各組非實(shí)驗(yàn)因素的條件均衡一致，以消除對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。第40頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四隨機(jī)化分組方法1.

抽簽等2.隨機(jī)數(shù)字表3.

計(jì)算器或計(jì)算機(jī)第41頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四隨機(jī)數(shù)字表分組例試將10頭動物應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表分配到甲、乙兩組。⑴按動物體重編號⑵從隨機(jī)表的第21行，第21列往上查10個(gè)隨機(jī)數(shù)⑶規(guī)定雙號為甲組，單號為乙組⑷調(diào)整：再接著查一個(gè)“6”以內(nèi)的隨機(jī)數(shù)，以決定甲組中哪一號撥到乙組。本例查得隨機(jī)數(shù)為4，將甲組第4個(gè)（5號）調(diào)到乙組。第42頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四計(jì)算(器)機(jī)隨機(jī)化分組第43頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則對照的原則：

-意義：消除系統(tǒng)誤差，鑒別處理和非處理因素的差異

-類型：空白對照、陽性對照、陰性對照、自身對照、相互對照隨機(jī)的原則：

-對照組和處理組除處理因素不同外，其余應(yīng)全部相同。

-動物實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組；觀察切片也應(yīng)隨機(jī)選擇視野重復(fù)的原則：

-隨機(jī)原則可排除大部分非處理因素的影響，但不能全部消除；因此，有必要重復(fù)，以排除偶然因素的影響。

-表現(xiàn)為一定的試驗(yàn)樣本數(shù)（人、動物、細(xì)胞株）第44頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四重復(fù)的原則

重復(fù)(replication)是指各處理組與對照組要有一定樣本含量(samplesizes)。

無限地增加樣本含量，將加大實(shí)驗(yàn)規(guī)模，延長實(shí)驗(yàn)時(shí)間，浪費(fèi)人力物力，反而增加系統(tǒng)誤差出現(xiàn)的可能性。樣本含量不足，檢驗(yàn)效能（Power，1－β）偏低，導(dǎo)致總體中本來具有的差異無法檢驗(yàn)出來。第45頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四科研設(shè)計(jì)概論醫(yī)學(xué)科研的基本要素科研設(shè)計(jì)的基本原則科研設(shè)計(jì)的基本步驟統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)第46頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四最有成就的實(shí)驗(yàn)家常常是這樣的人：他們事先對課題加以周密思考，并將課題分成若干關(guān)鍵的問題，然后，精心設(shè)計(jì)為這些問題提供答案的實(shí)驗(yàn)．第47頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)步驟研究目標(biāo)主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)路線的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)第48頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四確定研究目標(biāo)：即該課題解決的科學(xué)問題

-不要定的目標(biāo)太大：如解決腫瘤治療問題

-不要定的目標(biāo)太多：最多2-3個(gè)目標(biāo)。一個(gè)課題最好集中解決某個(gè)問題（總目標(biāo)），如TNF在內(nèi)毒素性休克中的作用

-不要定不可達(dá)到的目標(biāo)主要研究內(nèi)容：善于把要解決的問題分支成若干小的問題，從不同角度進(jìn)行研究。如研究某因素殺瘤作用：殺傷腫瘤譜、殺傷效率、誘導(dǎo)死亡方式，體內(nèi)外試驗(yàn)、殺傷機(jī)制等。

第49頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四研究路線的設(shè)計(jì)：根據(jù)研究內(nèi)容不同而不同：－對某基因表達(dá)的研究：mRNA、蛋白表達(dá)、定位及功能－基因調(diào)控：EMSA、報(bào)告基因等－新基因的研究：差顯表達(dá)、RACE、基因克隆、蛋白表達(dá)、功能研究－蛋白組研究：二維電泳、資料比對、消化、酶解、質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)方案：－試驗(yàn)對象（包括試驗(yàn)?zāi)Ｐ停喝?、動物、?xì)胞、分子等－處理因素：高糖、LPS、激素、細(xì)胞因子等；單因素多水平、多因素單水平、多因素多水平－檢測指標(biāo)：關(guān)聯(lián)性、客觀性、靈敏性、精確性、穩(wěn)定性

第50頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四尼科爾屬于那種在制定實(shí)驗(yàn)方案之前周密考慮，精心構(gòu)思，從而取得成功的人．他絕不象第二流人物，做那種心思來潮而常常是考慮不周的實(shí)驗(yàn)，自己急得如熱鍋螞蟻。…相對來說，尼科爾做的實(shí)驗(yàn)很少，很簡單。但是，他做的每一個(gè)實(shí)驗(yàn)都是長時(shí)間智力孕育的結(jié)果，要考慮到一切可能的因素，并要在最后的實(shí)驗(yàn)中加以檢驗(yàn)。然后，他單刀直入，不做虛功。這就是巴斯德的方法，也是我們這個(gè)職業(yè)中所有偉大人物的方法。他們簡單的、結(jié)論明確的實(shí)驗(yàn)，對于那些能夠欣賞的人來說，是一種莫大的精神享受。－津澤（美國細(xì)菌學(xué)家）第51頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案簡述Fas和FasL的作用。請?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案，說明腫瘤細(xì)胞表達(dá)FasL后，可逃避免疫系統(tǒng)的攻擊。

第52頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四第53頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四TumorcellsinduceapoptosisinTlymphocytesviaFASactivationCancercellsexpressFASligandBindtoFASreceptoronTlymphocytesleadingtoapoptosis腫瘤細(xì)胞表達(dá)FasL后，可逃避免疫系統(tǒng)的攻擊。第54頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四實(shí)驗(yàn)?zāi)康模罕磉_(dá)FasL的腫瘤細(xì)胞可逃避免疫攻擊實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：－腫瘤細(xì)胞是否表達(dá)FasL－腫瘤細(xì)胞對活化的淋巴細(xì)胞是否具有殺傷作用－體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察表達(dá)和不表達(dá)FasL的腫瘤細(xì)胞的致瘤率實(shí)驗(yàn)方案：－FACS:檢測腫瘤細(xì)胞是否表達(dá)FasL

－凋亡檢測：腫瘤細(xì)胞對活化的淋巴細(xì)胞是否具有殺傷作用（活化淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞＋活化淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞＋非活化淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞＋活化淋巴細(xì)胞＋抗FasL抗體）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

第55頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四課題申請書

（開題報(bào)告）的撰寫第56頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四課題設(shè)計(jì)書的撰寫對課題評價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)立論依據(jù)研究目的與研究內(nèi)容研究路線和研究方案項(xiàng)目的創(chuàng)新性和特色研究的前期工作研究團(tuán)隊(duì)和研究條件

第57頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四國家自然科學(xué)基金的資助方向基礎(chǔ)理論研究2.應(yīng)用基礎(chǔ)研究以實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)為基礎(chǔ)的第58頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四國家自然科學(xué)基金的主要種類常規(guī)基金：

面上項(xiàng)目（青年基金和地區(qū)基金） 重點(diǎn)項(xiàng)目 重大項(xiàng)目 杰出青年基金特殊基金：

主任基金 專項(xiàng)基金 創(chuàng)新群體基金 合作基金（海外，港澳）

第59頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四國家自然科學(xué)基金的評審程序初審（函審）評審專家1評審專家2評審專家5評審專家3評審專家4終審（會審）選擇超出擬批準(zhǔn)項(xiàng)目120-130%的預(yù)選項(xiàng)目進(jìn)行評審學(xué)部批準(zhǔn)第60頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四申請人是否具有科研能力？課題是否有科學(xué)意義、創(chuàng)新性和可行性？是否具備研究條件？課題評審者主要考慮的問題第61頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四課題設(shè)計(jì)書的撰寫對課題評價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)立論依據(jù)研究目的與研究內(nèi)容研究路線和研究方案項(xiàng)目的創(chuàng)新性和特色研究的前期工作研究團(tuán)隊(duì)和研究條件

第62頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四

所研究的是重要領(lǐng)域的重要問題具有重要的理論價(jià)值或應(yīng)用前景課題研究的意義第63頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四科學(xué)性

研究的背景：國內(nèi)外目前的研究現(xiàn)狀；包括自己前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)存在的問題：提出研究的切入點(diǎn)與假說研究設(shè)想：研究目標(biāo)及思路第64頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四對國內(nèi)外研究現(xiàn)狀的了解廣度和深度：近5年的主要研究進(jìn)展 研究中存在的主要問題參考文獻(xiàn)： 國外文獻(xiàn) 近5年 數(shù)量：20-30

雜志等級第65頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四學(xué)術(shù)思想及創(chuàng)新性

理論創(chuàng)新：新學(xué)說或理論方法創(chuàng)新：新方法技術(shù)創(chuàng)新：技術(shù)改進(jìn)或完善第66頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四立項(xiàng)依據(jù)（2-2.5張）

該研究項(xiàng)目的重要性：2-3行即可

常見問題：寫得太多！介紹在這個(gè)領(lǐng)域的國內(nèi)外進(jìn)展，包括自己的工作，并引用自己發(fā)表的SCI文獻(xiàn)（注意圍繞主題）常見問題：寫得太多/太少、重點(diǎn)不突出、介紹與主題無關(guān)的進(jìn)展凝練科學(xué)問題，提出假說（創(chuàng)新性、科學(xué)性及實(shí)用性）常見問題：不知道問題在哪兒？或提與主題無關(guān)的問題根據(jù)自己前期工作（最好已發(fā)表SCI文章）提出假說常見問題：沒有形成假說、無邏輯性簡介本項(xiàng)目擬開展的工作、思路及意義

常見問題：不寫第67頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四科學(xué)問題凝練過程問項(xiàng)：科學(xué)問題是在一定科學(xué)知識背景下,存在于科學(xué)知識體系內(nèi)和科學(xué)實(shí)踐中有待解決的疑難，需要深層思考及高度凝練。答域：是對求解范圍的限定。

-全域：對解答范圍不給予任何限制的科學(xué)問題。（瘧疾是什么引起的？）

-類域：若對某科學(xué)問題有了初步認(rèn)識,希望能進(jìn)一步深入,問題的解答范圍即相應(yīng)有了一定程度的限定。（清除污水為何減少瘧疾的發(fā)生？）-特域：一旦科學(xué)問題的答域限定為某個(gè)具體答案，此時(shí)的答域稱為特域。研究者根據(jù)科學(xué)推理給出嘗試性解答或假說。（瘧疾是由蚊子傳播的。）第68頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四課題設(shè)計(jì)書的撰寫對課題評價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)立論依據(jù)景研究目的與研究內(nèi)容研究路線和研究方案項(xiàng)目的創(chuàng)新性和特色研究的前期工作研究團(tuán)隊(duì)和研究條件

第69頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四研究目標(biāo)、研究內(nèi)容

和擬解決的關(guān)鍵問題研究目標(biāo)：明確、集中，用2-3句話描述。

常見問題：太大、分散或不明確研究內(nèi)容：根據(jù)假說，將研究問題分支，從不同側(cè)面或角度進(jìn)行研究；每一分支就組成一個(gè)研究內(nèi)容。注意研究內(nèi)容要集中，圍繞假說從不同角度（平行）及不同層次（縱深）開展研究。常見問題：太細(xì)、與研究方案混淆擬解決的關(guān)鍵問題：包括解決的關(guān)鍵科學(xué)問題、整個(gè)研究中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)及技術(shù)難點(diǎn)（如模型的制備、分子表達(dá)率和純化等）常見問題：找不準(zhǔn)第70頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題范圍合適：3-5個(gè)內(nèi)容重點(diǎn)突出：1-2個(gè)重點(diǎn)關(guān)鍵問題選擇準(zhǔn)確：1-3個(gè)關(guān)鍵問題第71頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四課題設(shè)計(jì)書的撰寫對課題評價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)立論依據(jù)景研究目的與研究內(nèi)容研究路線和研究方案項(xiàng)目的創(chuàng)新性和特色研究的前期工作研究團(tuán)隊(duì)和研究條件

第72頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四研究路線和研究方案

研究路線：整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程及線路，可以用線路圖表示，但要簡明易懂。常見問題：未寫，或線路圖畫得太復(fù)雜研究方案：研究對象、處理因素、分組、用某種技術(shù)檢測某種指標(biāo)等。可按照研究內(nèi)容在分標(biāo)題下描述。

常見問題：將方法寫得太細(xì)、檢測指標(biāo)太多，不突出重點(diǎn)；或不寫具體檢測哪種信號分子；未設(shè)計(jì)正確對照；臨床病例要排除和納入標(biāo)準(zhǔn)及樣本數(shù)；僅做平行檢測，無深度；

注意問題：設(shè)計(jì)巧妙、盡量使用先進(jìn)技術(shù)、盡量從不同角度去驗(yàn)證一個(gè)問題、注意合理應(yīng)用抑制性、促進(jìn)性和排除性實(shí)驗(yàn)手段第73頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四肝臟缺血－再灌注損傷及藥物的保護(hù)

（技術(shù)路線）培養(yǎng)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞缺氧－再氧化細(xì)胞凋亡缺血－再灌注損傷體外實(shí)驗(yàn)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)肝臟缺血－再灌注功能評價(jià)活性氧NOMMPs

藥物保護(hù)（PGE、API、764-3)TunelstainingDNAladderFACS細(xì)胞凋亡第74頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四技術(shù)路線

設(shè)計(jì)合理：基礎(chǔ)與臨床 體外與體內(nèi) 分子、細(xì)胞、整體第75頁，共89頁，2023年，2月20日，星期四研究路線和研究方案

研究路線：整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程及線路，可以用線路圖表示，但要簡明易懂。常見問題：未寫，或線路圖畫得太復(fù)雜研究方案：研究對象、處理因素、分組、用某種技術(shù)檢測某種指標(biāo)等?？砂凑昭芯績?nèi)容在分標(biāo)題下描述。

常見問題：將方法寫得太細(xì)；檢測指標(biāo)太多，不突出重點(diǎn)，不相關(guān)；或不寫具體檢測哪種信號分子；未設(shè)計(jì)正確對照；臨床病例要排除和納入標(biāo)準(zhǔn)及樣本數(shù)；僅做平行檢測，無深度；

注意問題：設(shè)計(jì)巧妙、盡量使用先進(jìn)技術(shù)、盡量從不同角度去驗(yàn)證一個(gè)問題、注意合理應(yīng)用抑制性、促進(jìn)性和排除性實(shí)驗(yàn)手段第76頁，共89頁，2023年，2月20