藥品檢驗中非標(biāo)方法應(yīng)用研討

藥品檢驗中非標(biāo)方法應(yīng)用淺談非標(biāo)方法，顧名思義即非標(biāo)準(zhǔn)方法，它可以是實驗室自行制定的方法，超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、經(jīng)過擴(kuò)大和更改的標(biāo)準(zhǔn)方法，也可以是知名的技術(shù)組織或有關(guān)科學(xué)書籍或期刊公布的或由設(shè)備制造商指定的方法中選擇的適宜的方法。藥品檢驗中由于檢驗?zāi)康牟煌瑢Σ捎脴?biāo)準(zhǔn)的規(guī)定也不同。通常情況下國家藥品監(jiān)管部門委托檢驗時采用的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)為國家標(biāo)準(zhǔn)，中藥飲片在沒有國家標(biāo)準(zhǔn)時可采用地方標(biāo)準(zhǔn)；對于非國家藥品監(jiān)管部門委托的檢驗采用的標(biāo)準(zhǔn)方法可以是國家標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)，也可以是經(jīng)過客戶同意并經(jīng)實驗確認(rèn)的非標(biāo)方法。標(biāo)準(zhǔn)方法和非標(biāo)準(zhǔn)方法是在藥品管理法和實驗室資質(zhì)認(rèn)定評審準(zhǔn)那么中規(guī)定的藥品檢驗可以選用的兩類方法。非標(biāo)方法有時不表達(dá)在檢驗報告書中，如在檢驗中由于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)簡單，不易得出準(zhǔn)確結(jié)論，或檢驗中出現(xiàn)主觀方面的不符合但為保證結(jié)果準(zhǔn)確、客觀，需要進(jìn)一步做實驗證實，我們把這樣的方法也可稱為驗證方法；此外我們常用的還有根底測試時建立的藥品初篩方法，藥品評價進(jìn)展探索性分析研究時建立的實驗方法等等，這些方法從廣義上講都是非標(biāo)方法。隨著科學(xué)技術(shù)的開展，新技術(shù)新方法在藥品檢驗中往往可以提供更準(zhǔn)確、更科學(xué)的結(jié)果，近年來，藥品監(jiān)管力度不斷加強(qiáng)，各地藥檢所在嚴(yán)格選用標(biāo)準(zhǔn)的根底上，為更好地開展打假，提高藥品檢驗的準(zhǔn)確度，先后開展非標(biāo)方法的探索研究，一些大案要案得以破獲，說明非標(biāo)方法的研究在藥品監(jiān)管中具有重要意義。非標(biāo)方法可以提高藥品檢驗的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證藥品的質(zhì)量非標(biāo)準(zhǔn)方法在藥品檢驗中的應(yīng)用越來越多，非標(biāo)方法的應(yīng)用擴(kuò)大了藥品檢驗的方法來源，提高檢測水平，可以保證出具的報告準(zhǔn)確、科學(xué)，可以提醒藥害事件的真實原因，為案件的處理、藥品的監(jiān)管提供科學(xué)的依據(jù)，保障人民群眾的用藥平安。近年來涉藥案件的成功偵破，顯示出非標(biāo)方法的研究應(yīng)用在藥品監(jiān)管工作中的重要作用，比方：齊二藥事件由于采購輔料時貪圖廉價，誤投乙二醇；欣弗事件為減少本錢，擅自縮短滅菌時間；甲氨喋呤事件是因為工作責(zé)任心不強(qiáng)誤投原料等等，這些涉案藥品如果只按國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)展檢驗，多數(shù)得出的是符合規(guī)定的結(jié)論。因此結(jié)合案情，在充分搜集資料信息的根底上，大膽推測，建立非標(biāo)方法〔這種非標(biāo)方法不同于正規(guī)工藝條件下使用的常規(guī)檢驗方法〕，進(jìn)展排查，才有可能查出藥品質(zhì)量問題的真實原因。制劑中摻假、制假牟取暴利，給檢驗結(jié)果的判定帶來困難。同樣在中藥材、中藥飲片的檢驗中，也存在著按照標(biāo)準(zhǔn)檢驗符合規(guī)定，但實際情況是存在質(zhì)量問題。這主要是因為下述原因：１人為摻入異物、染色或摻入局部假藥，以貴細(xì)和緊缺藥材為甚。如紅花、血竭染色，西洋參中摻人參，蟲草中加增重粉等。２名稱相近或外形類似，基原相近的品種之間產(chǎn)生混淆。如粉碎的小平貝母充川貝母、粉碎的水半夏充半夏等。３異地引種造成栽培變異，飲片性狀、組織或有效成分含量變化很大。如柴胡、薄荷、玫瑰、菊花、當(dāng)歸等。４在栽培、加工、炮制過程中，使用對人體有害的物質(zhì)，出現(xiàn)質(zhì)量問題。如葛根、菊花硫熏過度等。種種情況說明，在出現(xiàn)一些嚴(yán)重的質(zhì)量問題時僅僅按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗有時并不能得到準(zhǔn)確的判定結(jié)果，因為一方面質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在其制定時受當(dāng)時科技開展水平的制約需要不斷提高，同時隨著檢測技術(shù)的不斷進(jìn)步，檢測所用材料、儀器等在變化，檢測對象等因原料的純度、產(chǎn)地、栽培技術(shù)、加工技術(shù)的改變而發(fā)生變化，使得原有標(biāo)準(zhǔn)的檢驗方法不再是最精細(xì)準(zhǔn)確，甚至出現(xiàn)偏差；另一方面藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求藥品按標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定制備，是藥品應(yīng)符合的最低要求，一旦各個環(huán)節(jié)出現(xiàn)偏離，采用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗常常不能發(fā)現(xiàn)；而對于成心摻假、制假等犯罪、特別是高科技犯罪情況下生產(chǎn)的藥品，由于造假者采用的手段不是藥品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法，如果依照現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)檢驗，一般無法查出其非法添加的成分，必須依據(jù)實際情況采用新的有針對性的檢驗方法，因此，非標(biāo)方法在檢驗中得到越來越廣泛的應(yīng)用。非標(biāo)方法的建立可以提高藥品檢驗的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證藥品的質(zhì)量，有效地遏制假劣藥品對人民群眾造成的傷害。法律法規(guī)有關(guān)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及非標(biāo)方法的規(guī)定？中華人民共和國藥品管理法？第三十二條規(guī)定藥品必須符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)。中藥飲片依照本法第十條第二款的規(guī)定執(zhí)行。國務(wù)院藥品監(jiān)視管理部門公布的？中華人民共和國藥典？和藥品標(biāo)準(zhǔn)為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)。第十條第二款規(guī)定中藥飲片必須按照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)炮制；國家藥品標(biāo)準(zhǔn)沒有規(guī)定的，必須按照省、自治區(qū)、直轄市人民政府藥品監(jiān)視管理部門制定的炮制標(biāo)準(zhǔn)炮制。？中華人民共和國藥品管理法實施條例？第五十八條明確指出對有摻雜、摻假嫌疑的藥品，在國家藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的檢驗方法和檢驗工程不能檢驗時，藥品檢驗機(jī)構(gòu)可以補(bǔ)充檢驗方法和檢驗工程進(jìn)展藥品檢驗；經(jīng)國務(wù)院藥品監(jiān)視管理部門批準(zhǔn)后，使用補(bǔ)充檢驗方法和檢驗工程所得出的檢驗結(jié)果，可以作為藥品監(jiān)視管理部門認(rèn)定藥品質(zhì)量的依據(jù)。？實驗室資質(zhì)認(rèn)定評審準(zhǔn)那么？中５.３.５規(guī)定：實驗室自行制定的非標(biāo)方法，經(jīng)確認(rèn)后，可以作為資質(zhì)認(rèn)定工程，但僅限特定委托方的檢測。？藥品質(zhì)量抽查檢驗管理規(guī)定？第二十一條規(guī)定：藥品檢驗機(jī)構(gòu)在檢驗過程中，對有摻雜、摻假嫌疑的藥品，可根據(jù)監(jiān)視需要補(bǔ)充檢驗方法和檢驗工程進(jìn)展藥品檢驗；作為認(rèn)定藥品質(zhì)量依據(jù)的補(bǔ)充方法和工程，由省〔區(qū)、市〕藥品監(jiān)視管理部門報國務(wù)院藥品監(jiān)視管理部門批準(zhǔn)。

國務(wù)院藥品監(jiān)視管理部門應(yīng)當(dāng)在接到省〔區(qū)、市〕藥品監(jiān)視管理部門的報告后１０個工作日內(nèi)征求中國藥品生物制品檢定所的意見。中國藥品生物制品檢定所應(yīng)當(dāng)在２個月內(nèi)提出意見報國務(wù)院藥品監(jiān)視管理部門，由國務(wù)院藥品監(jiān)視管理部門于１０個工作日內(nèi)以藥品檢驗補(bǔ)充檢驗方法和檢驗工程批準(zhǔn)件批復(fù)省〔區(qū)、市〕藥品監(jiān)視管理部門。這里提到的補(bǔ)充檢驗方法和檢驗工程在批準(zhǔn)前就是非標(biāo)方法。從法律法規(guī)要求不難發(fā)現(xiàn)，？實驗室資質(zhì)認(rèn)定評審準(zhǔn)那么？規(guī)定非標(biāo)方法在確認(rèn)后經(jīng)客戶同意即可使用，但僅限特定委托方的檢測。藥品管理法及其實施條例也規(guī)定，非標(biāo)方法假設(shè)作為藥品監(jiān)管判定藥品質(zhì)量的依據(jù)，必須經(jīng)過國務(wù)院藥品監(jiān)視管理部門的批準(zhǔn)，成為正式的國家標(biāo)準(zhǔn)后才具有法律效力。非標(biāo)方法主要采用的分析技術(shù)及應(yīng)用領(lǐng)域近年來，非標(biāo)方法在各級藥品檢驗所得到廣泛研究和應(yīng)用，在查出假劣藥品中發(fā)揮著重要作用。非標(biāo)方法經(jīng)國家食品藥品監(jiān)視管理局批準(zhǔn)后成為國家標(biāo)準(zhǔn)，它是藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善和必要補(bǔ)充。從２００３年至２０２１年底，國家食品藥品監(jiān)視管理局批準(zhǔn)的藥品檢驗補(bǔ)充檢驗方法和檢驗工程即各藥檢所建立的非標(biāo)方法共計１１０種１。在這１１０種新建立的非標(biāo)方法中，主要采用的分析技術(shù)有薄層色譜法、顯微鑒別、紫外分光光度法、高效液相色譜法、原子吸收分光光度法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、毛細(xì)管電泳法、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、質(zhì)譜法、瓊脂凝膠水平電泳、酶聯(lián)免疫法等，其中液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、毛細(xì)管電泳法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、質(zhì)譜法、瓊脂凝膠水平電泳、酶聯(lián)免疫法等應(yīng)用的儀器設(shè)備和分析技術(shù)，大多數(shù)基層藥檢所尚不具備。１１０種補(bǔ)充檢驗方法和檢驗工程主要應(yīng)用在下述領(lǐng)域：血竭中松香酸的非法添加，抗風(fēng)濕藥中雙氯酚酸鈉的添加，降糖藥中格列苯脲、格列齊特、苯乙雙胍、二甲雙胍、羅格列酮、格列美脲、格列吡嗪、格列喹酮、瑞格列奈、吡格列酮的添加，抗心律失常藥中鹽酸普羅帕酮的添加，鎮(zhèn)靜安神藥中氯氮卓、地西泮、卡托普利、氯喹、艾司唑侖的添加，降壓藥中鹽酸異丙嗪、氫氯噻嗪的添加，壯陽類藥中他達(dá)拉非、他地那非、西地那非的添加，清熱感冒藥中對乙酰氨基酚的添加，止咳平喘藥中地塞米松、醋酸氟輕松、醋酸潑尼松、茶堿的添加，前列腺用藥中靛藍(lán)、靛玉紅的添加，天麻膠囊中對乙酰氨基酚、吲哚美辛、布洛芬的添加，減肥藥中西布曲明的添加，消腫止痛藥中雙氯芬酸、氨基比林的添加，健胃藥中法莫替丁、西莫替丁、鹽酸雷尼替丁的添加，蒲黃、黃芩、紅花、五味子、朱砂、血竭的染色檢查，膽南星、海金沙、細(xì)辛、穿山甲的摻雜檢查，人用狂太疫苗檢查等等，涉及的藥品包括中藥材、中藥飲片、化藥、中藥、生物制品等。在根底測試方面，各地藥檢所建立非標(biāo)方法進(jìn)展藥品的初篩，以加強(qiáng)藥品監(jiān)管的覆蓋面，拓展根底測試的技術(shù)手段。如在根底測試中應(yīng)用的各種近紅外模型的建立，各種非法添加簡單的理化實驗、顯微鑒別、薄層色譜鑒別方法的建立等。此外，為簡化實驗或為保證實驗結(jié)果準(zhǔn)確建立的新方法，用于驗證檢驗結(jié)果的非標(biāo)方法，可以作為輔助的技術(shù)手段幫助我們更好地得出判定結(jié)論。在藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)中，尤其是一些中藥材、中藥飲片的檢驗中，有些結(jié)果的判定依靠的是主觀感受，如味覺、嗅覺、顏色、質(zhì)地、外表等等，由于主觀感受因人而易，藥材、飲片假設(shè)產(chǎn)地、栽培年限、采收季節(jié)甚至加工方法不同就會有差異，或有些藥材種間差異很小，在標(biāo)準(zhǔn)檢驗工程少時，也需采用其它方法加以確證，從而保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。經(jīng)常需要進(jìn)展確認(rèn)證實的工程有：１味道：微酸、微澀等要考慮過度熏硫、非法添加礬等成分。適度硫熏可殺蟲害，有利保管。但硫為有毒物質(zhì)，市場常見過度硫熏增白如川貝母、枸杞子、山藥、天花粉、茯苓等。２顏色：為了使飲片顏色鮮艷，參加染料進(jìn)展染色。在檢驗過程中，對于顏色的變化要敏感，注意藥材、飲片在溶劑中溶解出的顏色，初步判定是否染色。如紅花、五味子、烏梅染色等。３嗅覺異常，常見于品種變異導(dǎo)致的氣味變化，可用薄層色譜、氣相色譜法等進(jìn)展驗證，如薄荷。４藥材或飲片的粉末經(jīng)常會非法添加其它成分甚至造假，可以采用薄層色譜、液相色譜、氣相色譜法及液質(zhì)聯(lián)用、氣質(zhì)聯(lián)用等方法進(jìn)展證實。５種間差異較小，如水半夏與半夏，川貝母與其它小貝母，土茯苓與白土苓，紫蘇子與蘇子類，白及與其同屬植物等也需采用兩者間有區(qū)別的顯微、薄層色譜、液相色譜、氣相色譜法等。非標(biāo)方法的建立及需要注意的問題藥品檢驗所是需要為藥品監(jiān)管出具具有公正作用的數(shù)據(jù)和結(jié)果的機(jī)構(gòu)，根據(jù)藥品管理法、計量法、實驗室資質(zhì)認(rèn)定等法律法規(guī)要求必須使用國家標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以外的方法即非標(biāo)方法均需經(jīng)過確認(rèn)后才能采用，成為判定依據(jù)時要經(jīng)過相關(guān)部門的批準(zhǔn)。為了保證檢驗的準(zhǔn)確，各級藥檢所進(jìn)展非標(biāo)研究，在？實驗室資質(zhì)認(rèn)定評審準(zhǔn)那么？中對非標(biāo)方法建立有明確的規(guī)定。在建立非標(biāo)方法時除需依照建立藥品分析方法的實驗要求外，還要遵照？實驗室資質(zhì)認(rèn)定評審準(zhǔn)那么？的規(guī)定，即當(dāng)必須使用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法中未包含的方法時，應(yīng)遵守與客戶達(dá)成的協(xié)議，且應(yīng)包括對客戶要求的清晰說明以及檢測的目的。所制定的方法在使用前應(yīng)經(jīng)適當(dāng)確實認(rèn)。這樣建立的非標(biāo)方法在經(jīng)過國家局批準(zhǔn)后可用于藥品監(jiān)管的委托檢驗。按照？實驗室資質(zhì)認(rèn)定評審準(zhǔn)那么？的要求，首先對新的檢測方法，在進(jìn)展檢測之前應(yīng)當(dāng)制定程序。程序中至少應(yīng)該包含以下信息：１、適當(dāng)?shù)臉?biāo)識；

２、范圍；

３、被檢測或校準(zhǔn)物品類型的描述；

４、被測定的參數(shù)或量和范圍；

５、儀器和設(shè)備，包括技術(shù)性能要求；

６、所需的參考質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)〔參考物質(zhì)〕；

７、要求的環(huán)境條件和所需的穩(wěn)定周期；

８、程序的描述，包括：

——物品的附加識別標(biāo)志、處置、運(yùn)輸、存儲和準(zhǔn)備；

——工作開場前所進(jìn)展的檢查；

——檢查設(shè)備工作是否正常，需要時，在每次使用之前對設(shè)備進(jìn)展校準(zhǔn)和調(diào)整；

——觀察和結(jié)果的記錄方法；

——需遵循的平安措施；

９、承受〔或拒絕〕的準(zhǔn)那么和/或要求；

１０、需記錄的數(shù)據(jù)以及分析和表達(dá)的方法；

１１、不確定度或評定不確定度的程序。藥品標(biāo)準(zhǔn)要求新建立的方法要進(jìn)展方法學(xué)驗證，從而保證方法的科學(xué)、準(zhǔn)確、可行。在采用非標(biāo)方法時？實驗室資質(zhì)認(rèn)定評審準(zhǔn)那么？規(guī)定要進(jìn)展評審，驗證方法的適宜性。驗證的方式可以是：使用參考質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)或有證質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)展校準(zhǔn)；與其它不同方法所得結(jié)果進(jìn)展比較；實驗室間比對；對影響結(jié)果的因素作系統(tǒng)性評價；根據(jù)對方法理論原理和實踐經(jīng)歷的科學(xué)理解，對所得結(jié)果不確定度進(jìn)展評估。在人員、儀器設(shè)備、環(huán)境條件、耗材、實驗方法均具備且評審驗證說明方法適宜時，可以確認(rèn)實驗室有能力開展此項檢驗，能夠確保所制定方法滿足規(guī)定的或預(yù)期使用的要求。確認(rèn)時應(yīng)盡可能全面，以滿足預(yù)定用途或應(yīng)用領(lǐng)域的需要。實驗室應(yīng)記錄所獲得的結(jié)果、使用確實認(rèn)程序以及該方法是否適合預(yù)期用途的聲明。確認(rèn)通常要確定以下局部或全部參數(shù)：精細(xì)度、偏差、線性、檢出限、穩(wěn)健性、選擇性/特定性等。非標(biāo)方法在作為藥品監(jiān)管的檢驗依據(jù)時還要經(jīng)國務(wù)院藥品監(jiān)管部門批準(zhǔn)。建立非標(biāo)方法，可以完善標(biāo)準(zhǔn)，提高檢驗準(zhǔn)確度，但在建立非標(biāo)方法時我們要注意下述問題：１要有全局觀念，合理使用人力、物力、財力。由于現(xiàn)今藥品標(biāo)準(zhǔn)數(shù)量大，中藥材同源品種、易混淆品種多，制藥企業(yè)多，所以在標(biāo)準(zhǔn)建立過程中，要防止重復(fù)用工。２檢驗非法添加其它成分的非標(biāo)方法在添加成分一樣或相似時，要盡量使標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一，防止標(biāo)準(zhǔn)重復(fù)繁多，不利于標(biāo)準(zhǔn)的檢索、更新和使用，容易造成標(biāo)準(zhǔn)的誤用。３要注意中藥材品種的多樣性，在非標(biāo)方法建立時樣本選取要科學(xué)全面，具有一定的超前性和對樣本的敏感性。４現(xiàn)階段作為基層藥品檢驗監(jiān)管的側(cè)重局部是檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，但我們既要注重準(zhǔn)確檢驗藥品的非標(biāo)方法的建立，更要從源頭的原輔料、生產(chǎn)過程等對方法的建立全面把握，通過技術(shù)手段全面分析藥品在各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量影響因素，確定監(jiān)管重點(diǎn)，使得藥品在各個環(huán)節(jié)均得到良好的監(jiān)控，而不是只是檢驗結(jié)果控制，只有這樣才能全面把握藥品的質(zhì)量構(gòu)成，充分發(fā)揮藥品檢驗在藥品監(jiān)管中的作用。我所近年來中藥檢驗經(jīng)常采用的驗證方法及相關(guān)課題研究近年來，為保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確，我們在中藥檢驗中經(jīng)常采用的驗證方法如下：１采用顯微法、薄層色譜法、溶血法、氣相色譜法、液相色譜法等對種間差異較小的品種予以確認(rèn)，如土茯苓、菟絲子、川貝母、五味子、薄荷、合歡皮、白及等。２采用理化鑒別對熏硫等進(jìn)展確認(rèn)，如葛根的硫酸鹽檢查等。３采用薄層色譜法對成藥中的成分進(jìn)展確認(rèn)，如人參、當(dāng)歸等。４采用與標(biāo)準(zhǔn)中不同的方法對檢驗結(jié)果尤其是邊緣數(shù)據(jù)進(jìn)展確認(rèn)，如復(fù)方感冒靈片等。５采用簡單的水試方法對飲片的質(zhì)地、顏色等進(jìn)展確認(rèn)，如茯苓、血竭等。６采用顯微法、理化鑒別法對摻雜進(jìn)展鑒別，如羚羊角粉、茯苓、金銀花等。為進(jìn)一步加強(qiáng)檢驗方法的科學(xué)性，我們選取近年來檢驗中存在問題較多的品種白及、白芍、丹參、貝母類、厚樸類、蘇子類等申報課題，