常用檢測方法的分析

常用檢測方法的分析第1頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四HPV檢測的意義HPV感染與CIN和宮頸癌變有著密切的關(guān)系HPV的檢測可能對宮頸癌的預(yù)后有預(yù)測作用HPV檢測對科學(xué)研究的價值第2頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四常用檢測方法1．細(xì)胞學(xué)檢查；2.組織學(xué)檢查；3．感染組織中HPV蛋白的檢測；4.HPV感染的血清學(xué)檢查；5.HPV基因組檢測.第3頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四細(xì)胞學(xué)檢查傳統(tǒng)巴氏涂片（CV）液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)(TCT)自動細(xì)胞學(xué)檢測系統(tǒng)test，又稱LCT計算機輔助細(xì)胞檢測系統(tǒng)（CCT），第4頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四優(yōu)點與問題優(yōu)點：操作簡單，價格低廉，適宜作初步篩查；缺點：凹空細(xì)胞是HPV感染的主要形態(tài)學(xué)改變，但由于其他病毒感染及人為因素均有可能造成細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡或凹空樣變，而且細(xì)胞學(xué)檢查易受取材、染色及細(xì)胞病理醫(yī)生的主觀判斷等因素的影響，因此應(yīng)用細(xì)胞病理學(xué)檢測HPV存在靈敏度低、特異性差、假陰性率和假陽性率高、不能對HPV進(jìn)行分型.第5頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四組織學(xué)檢查；肉眼觀察；陰道鏡觀察；組織檢查；第6頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四優(yōu)點與問題優(yōu)點：操作簡單，價格低廉，適宜作初步篩查；缺點：準(zhǔn)確率低，人員素質(zhì)要求高，病人痛苦程度大。第7頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四感染組織中HPV蛋白的檢測

針對HPV抗原，主要是衣殼蛋白制備抗體，通過免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測。ELISA，免疫沉淀法等。第8頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四優(yōu)點與問題優(yōu)點：原理明確，操作相對簡單缺點：由于HPV

至今尚不能在體外培養(yǎng)，且其免疫原性較弱，故血清學(xué)方法檢測靈敏度較低。第9頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四

HPV感染的血清學(xué)檢查

檢測人體血清中是否存在有針對HPV產(chǎn)生的抗體，通過免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測。第10頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四優(yōu)點與問題優(yōu)點：原理明確，操作相對簡單缺點：血清學(xué)檢測的對象是抗原和抗體，由于人體對HPV產(chǎn)生免疫應(yīng)答有一定的遲滯性，所以血清學(xué)檢測對無免疫應(yīng)答者和HPV潛伏期感染者會產(chǎn)生漏檢。第11頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四HPV基因組檢測

PCR類檢測方法Southern雜交法原位雜交雜交捕獲法第12頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四PCR類檢測方法

優(yōu)點：該方法靈敏度高，缺點：是容易發(fā)生樣品間的交叉污染，從而導(dǎo)致假陽性率高。另外利用該方法進(jìn)行HPV分型操作比較煩瑣。第13頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四Southern雜交法優(yōu)點：該方法靈敏度及特異性均高，適用于HPV分型、HPV-DNA分子質(zhì)量鑒定、基因組酶切圖譜建立及物理狀態(tài)研究等。缺點：其操作麻煩、耗時、費用高，且必須應(yīng)用新鮮組織標(biāo)本，故不宜大規(guī)模臨床使用。第14頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四原位雜交

該法利用HPV探針與組織中的HPV-DNA雜交，首先將探針和組織中的雙鏈HPV-DNA變性為單鏈，然后使探針與組織雜交.優(yōu)點：利于病理學(xué)分析缺點：雜交鏈的穩(wěn)定性不高，在雜交過程中，部分探針單鏈復(fù)性，使雜交率降低，影響HPV-DNA的檢出率。第15頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四雜交捕獲法

雜交捕獲(hybridcapturesystem，HCS)實驗是美國Digene公司新發(fā)展的一種檢測HPVDNA的技術(shù)，其原理是利用對抗體捕獲信號的放大和化學(xué)發(fā)光信號的檢測?；緦嶒灢襟E如下：1.樣本DNA雙鏈被釋放并分解為核苷酸單鏈;2.DNA單鏈與RNA探針結(jié)合為RNA－DNA雜交體;3.特異性抗體將RNA－DNA雜交體固定在試管壁或微孔壁上;4.結(jié)合有堿性磷酸酶的多個第二抗體與RNA－DNA雜交體結(jié)合,使信號放大;5.堿性磷酸酶使酶底物發(fā)光,判讀光的強弱可確定堿性磷酸酶的含量,從而確定RNA－DNA雜交體的含量。第16頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四雜交捕獲一代（HC-Ⅰ)試驗可檢測9種高危型HPV,包括16、18、31、33、35、45、51、52和56。所用的反應(yīng)載體是試管；雜交捕獲二代試驗(HC－Ⅱ)原來的試管法改為96孔平板法，能同時檢測13種高危型HPV(16、18、31、33、35、39、

45、51、52、56、58、59和68)。第17頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四第18頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四

優(yōu)點：其靈敏度和特異性均較好，缺點：存在交叉污染、費用昂貴等問題利用該法進(jìn)行HPV分型需要將HPV常見基因型逐個篩選才能最后確定感染的HPV型別，成本高。第19頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四

HPV基因芯片檢測方法

敏感性高、特異性強、檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。有研究報道，HPV基因芯片的檢測靈敏度是PCR方法的100倍。操作簡單：通過1次雜交檢測不僅可以判斷待檢樣品中是否存在HPV感染，而且可以鑒定出是哪種型別的HPV感染。針對性強：對樣品中的HPV-DNA直接進(jìn)行檢測，可以檢出HPV的潛伏期感染，克服了血清學(xué)及免疫組化檢測法對潛伏感染會產(chǎn)生漏檢的缺點，從而實現(xiàn)對疾病的早期快速診斷。同時檢測多種HPV型別，對多重HPV.感染的判斷一目了然，克服了其他HPV.檢測方法難以判斷混合感染或操作煩瑣的缺點。第20頁，共21頁，2023年，2月20日，星期四問題成本高，芯片制作和使用需要較多昂貴的儀器，如用于原位合成寡核苷酸的光刻機器和合成儀，用于合成后點樣的全自動點樣儀，用于信號檢測的激光共聚焦掃描儀或熒光顯微鏡等設(shè)備，這些都成