閻-實驗六-生理生化課件

（一）化學因素對微生物生長的影響（二）細菌的生理生化反應實驗六實驗目的：了解常用化學消毒劑對微生物的作用

實驗一化學因素對微生物生長的影響常用的化學消毒劑主要有重金屬及其鹽類、有機溶劑（酚、醇、醛等）、鹵族元素及其化合物、染色劑和表面活性劑等。實驗原理：1氧化劑：通過強烈的氧化作用殺死微生物。碘的殺菌力強，3－7％碘溶于70－83％的乙醇中成碘酒。2重金屬鹽類：使蛋白質變性、沉淀，使酶失活。0·02－0·2％HgCl2（升汞）溶液對大多數細菌有致死作用。

實驗材料1菌種：大腸桿菌2培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基3消毒劑：2.5%碘酒，0.5%石碳酸，75%乙醇，100%乙醇，1%來蘇爾，0.25%新潔爾滅，無菌生理鹽水實驗步驟1倒牛肉膏蛋白胨平板2取0.2ml大腸桿菌菌液加入平板中，涂布均勻。3將平板(皿底）劃分為6等份，分別將浸有各種消毒劑的小圓濾紙片貼在平板的每一等份中。4將貼好濾紙片的含菌平板，置37℃倒置培養(yǎng)24-48h。5測量并記錄抑菌圈的直徑，根據其直徑的大小，可初步確定測試藥品的抑菌效能。（自帶尺子）實驗二：細菌的生理生化反應（IMViC與硫化氫試驗）吲哚（I）、甲基紅（M）、V.P.試驗（Vi）、檸檬酸鹽利用（C）試驗。用以將大腸桿菌與其形狀十分相近的腸桿菌屬的細菌鑒別開來。實驗目的：1學習幾種主要微生物的生理代謝試驗及檢驗方法認識微生物代謝類型的多樣性。2了解IMViC反應在腸道菌鑒定中的意義和方法

實驗原理：1吲哚試驗：用來檢測吲哚的產生，有些細菌能產生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸產生吲哚和丙氨酸。吲哚+對二甲基氨基苯甲醛紅色的玫瑰吲哚色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚

吲哚試劑2甲基紅試驗（M.R）：大腸桿菌與產氣腸桿菌在利用葡萄糖進行發(fā)酵時，前者可產生大量的混合酸，使pH﹤4.5；后者則產生大量的中性化合物丁二醇，pH﹥4.5，因此在發(fā)酵液中加入甲基紅試劑時，前者呈紅色，后者呈黃色。葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→二乙?！t色化合物+胍基化合物葡萄糖→丙酮酸

大腸桿菌－產氣桿菌＋4檸檬酸鹽利用試驗：有些細菌如產氣腸桿菌能利用檸檬酸鹽作為碳源，產生堿性化合物，使培養(yǎng)基的pH升高，當加入溴麝香草酚藍指示劑時，培養(yǎng)基會由綠色變?yōu)樯钏{色。IMVi

C試驗VPtestCitrateutilizationtestIndoltestMethyltestIMViC大腸桿菌++——產氣腸桿菌——++常用于腸道桿菌的鑒定實驗材料菌種：大腸桿菌、產氣桿菌、變形桿菌培養(yǎng)基：蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗）

葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基（甲基紅試驗和伏－普試驗）檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基、醋酸鉛培養(yǎng)基（硫化氫試驗）實驗步驟一接種與培養(yǎng)1用接種針將大腸桿菌、變形桿菌分別穿刺接入2支醋酸鉛培養(yǎng)基2將大腸桿菌、產氣桿菌分別接種于2支蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗）、4支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基（甲基紅試驗和V.P.試驗）中，置37℃培養(yǎng)24-48h。3檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基4對照（所有同學共用）二結果觀察(時間)2、學生按實驗書所介紹的操作方法進行生化反應試驗，將實驗結果填入下表中（六人一組結果共享） 菌種吲哚試驗甲基紅試驗V.P.試驗H2S試驗檸檬酸鹽大腸桿菌產氣桿菌變形桿