第5章免疫血清學(xué)檢驗技術(shù)

第一節(jié)凝集與沉淀反應(yīng)第二節(jié)放射免疫測定技術(shù)第三節(jié)免疫熒光技術(shù)第四節(jié)酶免疫測定第五節(jié)固相膜免疫測定現(xiàn)在是1頁\一共有102頁\編輯于星期四凝集反應(yīng)：細(xì)菌、螺旋體、紅細(xì)胞或細(xì)胞性抗原等顆粒性抗原，或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后，它們與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生特異性反應(yīng)，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。一、凝集反應(yīng)及其特點第一節(jié)凝集與沉淀反應(yīng)現(xiàn)在是2頁\一共有102頁\編輯于星期四凝集反應(yīng)過程：抗原抗體的特異性結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象凝集反應(yīng)特點：IgM的作用比IgG大數(shù)百倍IgG與抗原結(jié)合后，常不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，稱不完全抗體臨床意義：進(jìn)行細(xì)菌的抗原分析、鑒定及分型，也可應(yīng)用已知細(xì)菌檢查未知血清的抗體?，F(xiàn)在是3頁\一共有102頁\編輯于星期四多克隆抗體單克隆抗體肌紅蛋白上清液現(xiàn)在是4頁\一共有102頁\編輯于星期四肉眼可見的凝集現(xiàn)象現(xiàn)在是5頁\一共有102頁\編輯于星期四直接凝集反應(yīng)(directagglutination)：

顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。二、直接凝集反應(yīng)現(xiàn)在是6頁\一共有102頁\編輯于星期四（一）玻片凝集試驗YYY+方法評價:定性試驗簡便和快速敏感度低臨床應(yīng)用:菌種鑒定血清學(xué)分型血型鑒定現(xiàn)在是7頁\一共有102頁\編輯于星期四（二）試管凝集試驗方法評價：半定量試驗簡便、快速敏感度低可有假陽性臨床應(yīng)用：肥達(dá)氏試驗：傷寒副傷寒外裴二氏試驗：斑疹傷寒Wrighttest:布魯菌病交叉配血試驗現(xiàn)在是8頁\一共有102頁\編輯于星期四間接凝集反應(yīng)(indirectagglutination)：

將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。載體種類：RBC（醛化）；聚苯乙烯膠乳顆粒（羧化）；金黃色葡萄球菌。三、間接凝集反應(yīng)現(xiàn)在是9頁\一共有102頁\編輯于星期四用抗原致敏載體--檢測抗體（一）間接凝集反應(yīng)的類型1、正向間接凝集試驗現(xiàn)在是10頁\一共有102頁\編輯于星期四用抗體致敏載體----檢測抗原2、反向間接凝集試驗現(xiàn)在是11頁\一共有102頁\編輯于星期四用抗原致敏載體--檢測抗原3、間接凝集抑制試驗現(xiàn)在是12頁\一共有102頁\編輯于星期四coagglutinationtest：以金黃色葡萄球菌菌體為反應(yīng)的載體。人及多種哺乳動物（豬、兔、豚鼠等）血清中IgG抗體的FC段與菌體表面的A蛋白（SPA）非特異性結(jié)合后，IgG的兩個Fab段仍然暴露在菌體表面，保持著結(jié)合抗原的活性和特異性。當(dāng)與特異性抗原相遇時，能出現(xiàn)特異的凝集現(xiàn)象。SPA--(Fc)IgG(Fab)--AbSPA：staphylococcalproteinA4、協(xié)同凝集試驗現(xiàn)在是13頁\一共有102頁\編輯于星期四（二）正向間接血凝試驗血凝試驗強(qiáng)度現(xiàn)在是14頁\一共有102頁\編輯于星期四1/21/41/81/161/321/641/1281/2561/5121/1024Pos.Neg.Titer648512<232128324Patient12345678正向間接血凝試驗現(xiàn)在是15頁\一共有102頁\編輯于星期四（三）反向膠乳凝集試驗現(xiàn)在是16頁\一共有102頁\編輯于星期四將病毒抗原或重組抗原吸附于粉紅色明膠顆粒上，當(dāng)致敏顆粒與樣品血清作用時，若血清含有抗病毒抗體則可形成肉眼可見的粉紅色凝集（四）明膠凝集試驗現(xiàn)在是17頁\一共有102頁\編輯于星期四抗原的檢測反向間接凝集試驗可用于檢測病原體的可溶性抗原，也可用于檢測各種蛋白質(zhì)成分。抗體的檢測檢測細(xì)菌、病毒、寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗體。（五）間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用現(xiàn)在是18頁\一共有102頁\編輯于星期四未經(jīng)致敏的受檢者新鮮紅細(xì)胞試劑：抗人O型紅細(xì)胞的單克隆抗體臨床應(yīng)用：HIV檢測、HBV檢測四、自身紅細(xì)胞凝集試驗現(xiàn)在是19頁\一共有102頁\編輯于星期四五、抗球蛋白試驗（Coombs試驗）現(xiàn)在是20頁\一共有102頁\編輯于星期四（一）直接Coombs試驗檢測紅細(xì)胞上的不完全抗體現(xiàn)在是21頁\一共有102頁\編輯于星期四（二）間接Coombs試驗檢測血清中的不完全抗體現(xiàn)在是22頁\一共有102頁\編輯于星期四可溶性抗原(如細(xì)菌、外毒素、血清蛋白等)與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合后，在一定條件(適量的電解質(zhì)、合適的酸堿度和溫度)下，經(jīng)一定時間，于比例合適處形成肉眼可見的沉淀現(xiàn)象。六、沉淀反應(yīng)precipitationreaction現(xiàn)在是23頁\一共有102頁\編輯于星期四沉淀反應(yīng)液體內(nèi)沉淀反應(yīng)凝膠沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)絮狀沉淀反應(yīng)免疫濁度測定瓊脂擴(kuò)散試驗免疫電泳雙向瓊脂擴(kuò)散試驗單向瓊脂擴(kuò)散試驗對流免疫電泳試驗現(xiàn)在是24頁\一共有102頁\編輯于星期四（一）單向瓊脂擴(kuò)散試驗制成含有適宜抗體濃度的瓊脂凝膠板。以適當(dāng)距離打孔，孔中加入可溶性抗原?？乖蛑車鷶U(kuò)散，當(dāng)抗原與抗體比例適宜時，在瓊脂中形成抗原－抗體復(fù)合物的晶格和沉淀。沉淀環(huán)的直徑與抗原濃度呈正相關(guān)。擴(kuò)散圈出現(xiàn)呈兩重沉淀環(huán)的雙環(huán)現(xiàn)象，表明存在但抗原性相同，而擴(kuò)散率不同的兩種組分。現(xiàn)在是25頁\一共有102頁\編輯于星期四大分子抗原和長時間擴(kuò)散（＞48h）：C=k×d2小分子抗原和較短時間（24h）：logC=k×d現(xiàn)在是26頁\一共有102頁\編輯于星期四（二）雙向瓊脂擴(kuò)散試驗可溶性抗原與相應(yīng)抗體在含適量電解質(zhì)的瓊脂凝膠板的對應(yīng)孔中，各自向四周擴(kuò)散，若兩者分子比例適當(dāng)，則在擴(kuò)散的一定時間后在兩孔之間相遇并生成白色沉淀線。現(xiàn)在是27頁\一共有102頁\編輯于星期四現(xiàn)在是28頁\一共有102頁\編輯于星期四加入定量的抗體在中間孔，按一定距離在四周打數(shù)個小孔，分別加入不同稀釋度的抗原可見粗細(xì)不等的沉淀線，從而可判定抗原的效價。現(xiàn)在是29頁\一共有102頁\編輯于星期四三孔型雙向免疫擴(kuò)散可能的結(jié)果現(xiàn)在是30頁\一共有102頁\編輯于星期四（三）對流免疫電泳試驗概念:

在電場中進(jìn)行的雙向免疫擴(kuò)散。原理:

將抗原加至近陰極孔內(nèi)，抗體加至近陽極孔內(nèi)。抗原與抗體在pH8.6的緩沖液中均帶負(fù)電荷，通電后，抗原因帶負(fù)電荷向陽極泳動，而抗體球蛋白等電點高，所帶負(fù)電荷少，加之分子量較大，向陽極的位移小于受電滲作用向陰極的位移，形成抗原抗體相向移動。二者結(jié)合，在比例適宜處形成白色沉淀線。優(yōu)點:

快速，只需1小時左右；靈敏度提高，約為10μg／ml。現(xiàn)在是31頁\一共有102頁\編輯于星期四現(xiàn)在是32頁\一共有102頁\編輯于星期四（四）火箭電泳RocketElectrophoresis

又稱免疫擴(kuò)散，是把單向免疫擴(kuò)散同電泳結(jié)合在一起的方法。抗原在含有定量抗體的瓊脂中泳動，兩者比例適宜時，在較短時間內(nèi)生成錐形的沉淀峰。在一定濃度范圍內(nèi)，沉淀峰的高度與抗原含量成正比。此法的特點是需時較短，故可用于快速沉淀標(biāo)本中抗原的含量。現(xiàn)在是33頁\一共有102頁\編輯于星期四火箭電泳示意圖現(xiàn)在是34頁\一共有102頁\編輯于星期四早期的放射免疫技術(shù)是基于競爭性結(jié)合反應(yīng)原理的放射免疫分析(RIA)，稍后又發(fā)展了非競爭性結(jié)合的免疫放射分析(IRMA)。該類技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、樣品及試劑用量少、操作簡便且易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷領(lǐng)域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、小分子藥物和腫瘤標(biāo)志物的定量分析。第二節(jié)放射免疫測定技術(shù)現(xiàn)在是35頁\一共有102頁\編輯于星期四常用標(biāo)記核素

125I3H射線類型γβ理化性活潑不活撥核素豐度>90%-半衰期60.2d12.3y標(biāo)記方法簡單復(fù)雜標(biāo)記設(shè)備低廉昂貴測量條件簡單復(fù)雜現(xiàn)在是36頁\一共有102頁\編輯于星期四一、放射免疫分析1、基本原理：Ab限量，Ag*定量，Ag*與Ag具有等同的與Ab結(jié)合能力，且兩者的總量大于Ab結(jié)合位點，二者通過競爭方式與Ab結(jié)合；隨著Ag增加，Ag*與Ab結(jié)合形成Ag*Ab復(fù)合物的放射量降低，二者變化成函數(shù)關(guān)系。現(xiàn)在是37頁\一共有102頁\編輯于星期四現(xiàn)在是38頁\一共有102頁\編輯于星期四以未結(jié)合的Ag*為F，Ag*-Ab復(fù)合物為B，則B/F或B/T(B＋F)與Ag的量變存在著劑量-反應(yīng)曲線?，F(xiàn)在是39頁\一共有102頁\編輯于星期四2、實驗方法及測定Ag*Ag平衡非平衡一步法二步法Ab＋體積溫度時間pHAg*--標(biāo)準(zhǔn)；Ag--樣品現(xiàn)在是40頁\一共有102頁\編輯于星期四二抗體沉淀法

PEG沉淀法PR試劑法活性炭吸附法分離徹底，迅速分離試劑和過程不影響反應(yīng)平衡效果不受反應(yīng)介質(zhì)影響操作應(yīng)簡單、重復(fù)性好經(jīng)濟(jì)結(jié)合與游離標(biāo)記物的分離現(xiàn)在是41頁\一共有102頁\編輯于星期四二、免疫放射分析1、基本原理：以過量125I標(biāo)記抗體與待測抗原進(jìn)行非競爭性免疫結(jié)合反應(yīng),用固相免疫吸附劑對B或F進(jìn)行分離，其靈敏度和可測范圍均優(yōu)于RIA操作也較RIA簡單?，F(xiàn)在是42頁\一共有102頁\編輯于星期四2、單位點IRMA先用過量標(biāo)記抗體與待測抗原進(jìn)行反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物；用固相抗原結(jié)合游離的標(biāo)記抗體并將其分離,測定上清液的放射量現(xiàn)在是43頁\一共有102頁\編輯于星期四3、雙位點IRMA先用固相抗體與抗原結(jié)合，再用過量的標(biāo)記抗體與抗原的另一決定簇結(jié)合，形成固相抗體-抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物，洗棄剩余標(biāo)記抗體，測固相上放射性。現(xiàn)在是44頁\一共有102頁\編輯于星期四RIAIRMA標(biāo)記物抗原抗體原理競爭性結(jié)合非競爭結(jié)合反應(yīng)體系A(chǔ)g*、Ag、Ab固相Ab、Ab*、Ag反應(yīng)動力學(xué)慢快靈敏度相對低高檢測范圍窄寬1-2數(shù)量級特異性差（PcAb）優(yōu)（McAb）標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)合率與測值成反比結(jié)合率與測值成正比待測抗原大小分子二抗原決定簇IRMA與RIA比較現(xiàn)在是45頁\一共有102頁\編輯于星期四

將抗原抗體反應(yīng)與熒光物質(zhì)發(fā)光分析相結(jié)合，用熒光檢測儀檢測抗原抗體復(fù)合物中特異性熒光強(qiáng)度，對液體標(biāo)本中微量或超微量物質(zhì)進(jìn)行定量測定。第三節(jié)熒光免疫技術(shù)（一）熒光免疫分析的基本原理現(xiàn)在是46頁\一共有102頁\編輯于星期四均相熒光免疫測定時間分辨熒光免疫測定熒光酶免疫測定非均相熒光免疫測定熒光偏振免疫測定熒光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)的類型熒光免疫測定液體樣品測定熒光抗體技術(shù)固體樣品測定直接法間接法雙標(biāo)記法現(xiàn)在是47頁\一共有102頁\編輯于星期四熒光物質(zhì)λex（nm）λem（nm）應(yīng)用異硫氰酸熒光素(FITC)490～495520～530（黃綠色）FAT、熒光偏振免疫測定四乙基羅丹明(RB200)570～575595～600（橙紅色）FITC的襯比染色或雙標(biāo)記FAT四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)550620（橙紅色）FITC的襯比染色或雙標(biāo)記FAT藻紅蛋白（PE）490-560595（紅色）雙標(biāo)記FAT、流式細(xì)胞術(shù)7-氨基-4-甲基香豆素354430（藍(lán)色）雙標(biāo)記或多標(biāo)記FATEu3+螯合物340613時間分辨熒光免疫測定熒光免疫測定中常用的熒光物質(zhì)現(xiàn)在是48頁\一共有102頁\編輯于星期四時間分辨檢測原理示意圖（二）時間分辨熒光免疫測定1、基本原理現(xiàn)在是49頁\一共有102頁\編輯于星期四鑭系元素銪(Eu3+)（最常用）；釤(Sm3+)；鋱(Tb3+)；釹(Nd3+)；鏑(Dy3+)熒光物質(zhì)熒光壽命(ns)熒光物質(zhì)熒光壽命(ns)非特異熒光背景1～10Sm3+-β-NTA65000人血清蛋白4.1Sm3+-PTA60000球蛋白3.0Eu3+-β-NTA714000細(xì)胞色素C3.5Eu3+-PTA925000FITC4.5Tb3+-PTA96000丹黃酰氯14Dy3+-PTA10002、標(biāo)記物常見熒光物質(zhì)的熒光壽命現(xiàn)在是50頁\一共有102頁\編輯于星期四3、信號增強(qiáng)作用結(jié)合β-二酮體Eu3+解離pH<4熒光增強(qiáng)Eu3+標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物固相雙抗體夾心法原理示意圖現(xiàn)在是51頁\一共有102頁\編輯于星期四固相抗體-待檢抗原-Eu3+標(biāo)記抗體復(fù)合物在酸性增強(qiáng)液下，Eu3+解離，340nm激發(fā)光下發(fā)射613nm熒光。4、雙抗體夾心法現(xiàn)在是52頁\一共有102頁\編輯于星期四待檢抗原和Eu3+標(biāo)記抗原與固相抗體競爭結(jié)合,溫育洗滌后在固相中加入熒光增強(qiáng)液,測定熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度與待檢抗原含量成反比。5、固相抗體競爭法現(xiàn)在是53頁\一共有102頁\編輯于星期四待檢抗原和固相抗原競爭結(jié)合定量的Eu3+標(biāo)記抗體，溫育洗滌后在固相中加入熒光增強(qiáng)液,測定熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度與待檢抗原含量成反比。6、固相抗原競爭法現(xiàn)在是54頁\一共有102頁\編輯于星期四熒光偏振免疫測定原理示意圖（三）熒光偏振免疫測定現(xiàn)在是55頁\一共有102頁\編輯于星期四熒光酶免疫測定熒光物質(zhì)產(chǎn)生示意圖

酶標(biāo)記抗體或抗原，與固相載體包被的抗原或抗體特異性結(jié)合。洗去游離的酶標(biāo)物。加入底物，經(jīng)酶分解后生成熒光產(chǎn)物。（四）熒光酶免疫測定現(xiàn)在是56頁\一共有102頁\編輯于星期四標(biāo)記酶底物熒光產(chǎn)物λex(nm)λem(nm)響應(yīng)信號堿性磷酸酶4-MUP4-MU36045010β-半乳糖苷酶4-MUG4-MU36045010辣根過氧化物酶HPA二聚體3174140.03熒光酶免疫測定標(biāo)記用酶及熒光底物現(xiàn)在是57頁\一共有102頁\編輯于星期四固相抗體和酶標(biāo)記抗體與待檢抗原反應(yīng)，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加入底物進(jìn)行酶促發(fā)光反應(yīng)，發(fā)光量與待檢抗原含量成正比。1、雙抗體夾心法現(xiàn)在是58頁\一共有102頁\編輯于星期四熒光酶免疫測定（雙抗體夾心法）示意圖現(xiàn)在是59頁\一共有102頁\編輯于星期四固相抗原和酶標(biāo)抗原與待檢抗體反應(yīng)，形成固相抗原-待檢抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，加入底物進(jìn)行酶促發(fā)光，發(fā)光量與待檢抗體含量成正比。2、雙抗原夾心法現(xiàn)在是60頁\一共有102頁\編輯于星期四待檢抗原和固相抗原競爭結(jié)合定量的酶標(biāo)抗體，洗滌除去未結(jié)合部分，固相抗原與酶標(biāo)抗體形成的復(fù)合物被留下來，加入底物進(jìn)行酶促發(fā)光反應(yīng)，熒光強(qiáng)度與待檢抗原含量成反比。3、固相抗原競爭法現(xiàn)在是61頁\一共有102頁\編輯于星期四抗核抗體(均質(zhì)型)抗核抗體(核膜型)抗核抗體(斑點型)（五）熒光酶免疫技術(shù)的應(yīng)用1、自身抗體檢測現(xiàn)在是62頁\一共有102頁\編輯于星期四寄生蟲（猴胚腎細(xì)胞內(nèi)弓形蟲）細(xì)菌（藤黃微球菌)2、病原體檢測現(xiàn)在是63頁\一共有102頁\編輯于星期四腫瘤（人肝癌細(xì)胞）3、免疫病理檢測現(xiàn)在是64頁\一共有102頁\編輯于星期四4、細(xì)胞表面抗原和受體檢測熒光免疫技術(shù)可用于淋巴細(xì)胞表面CD抗原、抗原受體、補體受體、Fc受體等的檢測以及淋巴細(xì)胞及其亞群的鑒定和計數(shù)?，F(xiàn)在是65頁\一共有102頁\編輯于星期四酶標(biāo)抗體（抗原）與抗原（抗體）的特異性反應(yīng)酶對底物的顯色反應(yīng)對抗原或抗體進(jìn)行定位、定性或定量的測定分析第四節(jié)酶免疫測定一、基本原理現(xiàn)在是66頁\一共有102頁\編輯于星期四（一）常用的酶及其底物1、辣根過氧化物酶（HRP）多用于ELISA方法。四甲基聯(lián)苯胺TMB。反應(yīng)后顯藍(lán)色，加酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色,測定波長450nm，穩(wěn)定，無致癌性。2、堿性磷酸酶（AP）對-硝基苯磷酸酯（pNPP）。經(jīng)酶作用后的產(chǎn)物為黃色對硝基酚，最大吸收峰波長為405nm。3、β-半乳糖苷酶（β-Gal）多用于均相酶免疫測定。4MUG。經(jīng)酶作用后生成高強(qiáng)度熒光物，用熒光計測量。現(xiàn)在是67頁\一共有102頁\編輯于星期四（二）固相載體及其處理1、常用的固相載體塑料制品、微顆粒、膜載體。通過固相載體可以方便的將非均相酶免技術(shù)中游離的和結(jié)合的抗體（或抗原）酶標(biāo)記物迅速分離?，F(xiàn)在是68頁\一共有102頁\編輯于星期四2、固相載體的處理⑴包被（coating）：將抗原或抗體結(jié)合于固相載體。⑵封閉（blocking）：用1%-5%的牛血清白蛋白或5%-20%小牛血清消除固相載體表面未結(jié)合的位點，消除非特異性吸附?，F(xiàn)在是69頁\一共有102頁\編輯于星期四酶免疫技術(shù)酶免疫組化酶免疫測定均相非均相固相酶免疫測定液相酶免疫測定組織切片或其它標(biāo)本中抗原的定位液體標(biāo)本中抗原或抗體的定性和定量（三）酶免疫技術(shù)分類現(xiàn)在是70頁\一共有102頁\編輯于星期四均相酶免疫測定主要用于藥物和小分子物質(zhì)的檢測。非均相免疫測定中的ELISA應(yīng)用更為廣泛。常用于傳染病的診斷：病毒性肝炎（甲肝抗體、“乙肝三對”、丙肝抗體、戊肝抗體）、風(fēng)疹病毒、皰疹病毒、輪狀病毒；結(jié)核桿菌、幽門螺桿菌。也用于一些蛋白質(zhì)的檢測：各種免疫球蛋白、補體、腫瘤標(biāo)志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特異性抗原）。（三）酶免疫測定的應(yīng)用現(xiàn)在是71頁\一共有102頁\編輯于星期四

酶標(biāo)記物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，標(biāo)記酶的活性會發(fā)生改變，不用分離結(jié)合和游離酶標(biāo)記物，通過測定標(biāo)記酶的活性的改變，而確定抗原或抗體的含量。常用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測定。二、均相酶免疫測定現(xiàn)在是72頁\一共有102頁\編輯于星期四1、酶放大免疫測定技術(shù)EMITenzyme-mutipliedimmunoassaytechnique

現(xiàn)在是73頁\一共有102頁\編輯于星期四2、克隆酶供體免疫分析CEDIAclonedenzymedonorimmunoassay

現(xiàn)在是74頁\一共有102頁\編輯于星期四三、酶聯(lián)免疫吸附試驗Enzyme-linkedimmunosorbentassay（一）基本過程及試劑1、包被：固相的抗原或抗體2、反應(yīng)：加入待測抗體或抗原和酶標(biāo)抗原或抗體。酶標(biāo)記物（酶結(jié)合物）3、洗滌：使結(jié)合在固相上的抗原抗體復(fù)合物與未結(jié)合的分離4、底物顯色：定性或定量的分析。酶反應(yīng)的底物現(xiàn)在是75頁\一共有102頁\編輯于星期四1、雙抗體夾心法方法：用已知抗體包被，加入待檢血清，再加酶標(biāo)抗體，加底物顯色

應(yīng)用：二價或二價以上的較大分子抗原測定乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等（二）ELISA檢測抗原的方法現(xiàn)在是76頁\一共有102頁\編輯于星期四現(xiàn)在是77頁\一共有102頁\編輯于星期四雙抗體夾心法測抗原YYYEYEYEYYEYEYEYYYYYYYYYYYYEYEYEYYYYYYYYYY現(xiàn)在是78頁\一共有102頁\編輯于星期四2、競爭法

方法：用已知抗體包被，加入待測血清，再加酶標(biāo)抗原，酶標(biāo)抗原與待檢物競爭與包被物結(jié)合。加底物顯色。

應(yīng)用：用于只有一個抗原決定簇的小分子半抗原（藥物、激素等）現(xiàn)在是79頁\一共有102頁\編輯于星期四現(xiàn)在是80頁\一共有102頁\編輯于星期四競爭法測抗原YYYYYYEYYEYYYYEYYEYEYEYEYE現(xiàn)在是81頁\一共有102頁\編輯于星期四1、間接法方法：用已知抗原包被，加入待測血清，再加酶標(biāo)的抗人IgG（抗抗體或二抗）加底物顯色。優(yōu)點：一種酶標(biāo)抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。應(yīng)用：常用于HCV抗體、HIV抗體和梅毒螺旋體抗體等的測定。（三）ELISA檢測抗體的方法現(xiàn)在是82頁\一共有102頁\編輯于星期四現(xiàn)在是83頁\一共有102頁\編輯于星期四間接法測抗體YEYYYEYYYEYYEYYEYYEYYEYEYEY現(xiàn)在是84頁\一共有102頁\編輯于星期四2、雙抗原夾心法原理：類似雙抗體夾心法操作步驟：類似應(yīng)用：乙型肝炎表面抗體現(xiàn)在是85頁\一共有102頁\編輯于星期四3、競爭法原理：類似檢測抗原的競爭法應(yīng)用：乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗體(HBeAb)的檢測現(xiàn)在是86頁\一共有102頁\編輯于星期四應(yīng)用于病原體急性感染診斷中的IgM型抗體、甲型肝炎HAV-IgM抗體、乙型肝炎病毒核心HBc-IgM抗體的檢測。原理：抗人IgMμ鏈抗體包被捕獲待測標(biāo)本中IgM類抗體加入特異性抗原和酶標(biāo)記特異性抗原的抗體底物顯色

4、捕獲法現(xiàn)在是87頁\一共有102頁\編輯于星期四現(xiàn)在是88頁\一共有102頁\編輯于星期四捕獲法原理EYEYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYEYEYEYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY現(xiàn)在是89頁\一共有102頁\編輯于星期四第五節(jié)固相膜免疫測定一、常用的固相膜及其特點玻璃纖維素(fiberglass)，尼龍(nylon)，聚偏氟乙稀(polyvinylidenefluoride，PVDF)，硝酸纖