藥物分析第04章分析樣品前處理

采用一定的方法,使待測藥物或待測元素轉(zhuǎn)化為適宜的狀態(tài)后，再進行分析測定。前處理對象：1.含鹵素元素（F、Cl、Br、I）2.金屬元素（Ca、Fe、Hg、Zn、Sn、Bi)3.含As、P、S等元素4.生物樣本以上藥物在進行鑒別、檢查及含量測定前,需要經(jīng)過不同方法處理后,方可進行測定.1第一頁，共38頁。第一節(jié)體外樣品分析前處理

一、前處理樣品分類有機鹵素藥物1鹵素與脂肪鏈的碳原子相連結(jié)合不牢固2鹵素與芳環(huán)相連結(jié)合牢固1金屬離子不直接與碳原子相連，在溶液中可直接離解出金屬離子.2金屬離子直接與碳原子以共價鍵相連，結(jié)合狀態(tài)比較牢固，在溶液中不能直接離解出金屬離子.含金屬有機藥物2第二頁，共38頁。1.常見的含鹵素有機藥物三氯叔丁醇六氯對二甲苯泛影酸3第三頁，共38頁。膽影酸碘苯酯I4第四頁，共38頁。碘他拉酸碘番酸磺溴酞鈉5第五頁，共38頁。諾氟沙星醋酸氟輕松6第六頁，共38頁。硬脂酸鎂富馬酸亞鐵酒石酸銻鉀2.常見的含金屬元素的有機藥物7第七頁，共38頁。葡萄糖酸銻鈉8第八頁，共38頁。根據(jù)鹵素或金屬在分子中結(jié)合牢固程度不同處理方法而異.不經(jīng)有機破壞的分析方法經(jīng)有機破壞的分析方法直接測定法經(jīng)水解后測定法經(jīng)氧化還原后測定法濕法破壞法干法破壞法氧瓶燃燒法前處理方法9第九頁，共38頁。（1）金屬離子不直接與碳原子相連乳酸鈣1直接測定法

例1：乳酸鈣含量測定

0.3g+水100ml放冷+NaOH15mlEDTA滴定鈣紫紅素指示劑二、不經(jīng)有機破壞的分析方法210第十頁，共38頁。(2)金屬離子直接與碳原子以共價鍵相連富馬酸亞鐵

例2：富馬酸亞鐵含量測定富馬酸亞鐵溶于熱硫酸,同時分解釋放出亞鐵離子,可選用鈰量法進行測定.鄰二氮菲為指示劑.11第十一頁，共38頁。原理Fe2++Ce4+Ce3++Fe3+

Fe2++e-Fe3+紅色淺藍色OOCCHOHCCOˉˉ+Fe2+12第十二頁，共38頁。

將含鹵素的有機藥物溶于適當溶劑（如乙醇）中,加氫氧化鈉溶液或硝酸銀溶液后,加熱回流使其水解,將有機結(jié)合的鹵素,經(jīng)水解作用轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機的鹵素離子,然后選用間接銀量法進行測定.（1）直接回流后測定法2經(jīng)水解后測定法13第十三頁，共38頁。CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH

△回流(CH3)2-CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl

+AgNO3

AgCl↓

+NaNO3

AgNO3+

NH4SCNAgSCN↓+

NH4NO3①三氯叔丁醇14第十四頁，共38頁。②六氯對二甲苯（Hexachloro-p-xylene）+6AgNO3+6H2O

加入AgNO3加熱回流完全后,可用硫氰酸銨標準溶液直接滴定剩余的硝酸銀,以求得含量.6AgCl↓

+6NO3

-+6H+15第十五頁，共38頁。例：硬脂酸鎂與定量硫酸共沸、水解生成硬脂酸和硫酸鎂，剩余的酸以氫氧化鈉滴定.

也適用于金屬原子與脂肪鏈的碳原子相連,結(jié)合不牢固藥物.（2）用硫酸水解后測定法原理：Mg(C17H35COO)2+H2SO4

△MgSO4

+2C17H35COOH2NaOH+H2SO4

Na2SO4+2H2O16第十六頁，共38頁。（1）堿性還原后測定

鹵素結(jié)合于芳環(huán)上,由于分子碘的結(jié)合較牢固,需在堿性溶液中加還原劑（如鋅粉）,加熱回流,使碳-碘鍵斷裂,形成無機碘化物后測定.3經(jīng)氧化還原后測定法泛影酸（鹵素原子與芳環(huán)相連,化學(xué)鍵牢固）+3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2ONaI+AgNO3AgI

+NaNO3曙紅鈉為吸附指示劑黃色玫瑰紅色+11NaOH+3Zn17第十七頁，共38頁。在醋酸酸性條件下加還原劑鋅粉,加熱回流,使碳-碘鍵斷裂,形成無機碘化物后用銀量法測定.如：碘番酸含量測定（2）酸性還原后測定用四溴酚酞乙酯作指示劑，AgNO3滴定。黃色沉淀→綠色18第十八頁，共38頁。（3）利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測定含量含銻藥物Sb5+具有氧化性,在酸性下氧化KI定量析出I2，可用Na2S2O3滴定.例如：葡萄糖銻鈉

19第十九頁，共38頁。

有機鹵素及金屬的藥物結(jié)構(gòu)中的鹵素或金屬離子與碳原子結(jié)合牢固者,用上述方法難以成為無機的化合物,此時必須采用有機破壞的方法,使之轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機化合物,方可進行測定.三、經(jīng)有機破壞的分析方法1濕法破壞法2干法破壞法3氧瓶燃燒法20第二十頁，共38頁。

根據(jù)所用試劑的不同，濕法破壞可分為以下幾種：①硝酸-高氯酸法－破壞力強,不適于含氮雜環(huán)②硫酸-硫酸鹽法－常用于含砷、銻有機藥物③硝酸-硫酸法－適于大多數(shù)有機物質(zhì)破壞1濕法破壞法21第二十一頁，共38頁。1取樣量含金屬元素在10~100g范圍內(nèi),取樣10g生物樣品—血樣10

~15ml；尿樣50ml2所用儀器凱氏燒瓶3空白試驗4

通風(fēng)櫥中進行濕法破壞法注意事項：22第二十二頁，共38頁?！m用于含氮雜環(huán),以及某些不能用硫酸破壞的有機藥物，但不適于含汞、砷藥物的測定.2干法破壞將有機物灼燒灰化以達到分解目的.常加無水碳酸鈉或輕質(zhì)氧化鎂以助灰化.1應(yīng)控制溫度420℃以下2灰化必須完全3經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，不要輕易棄去。注意事項23第二十三頁，共38頁。3氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法是將有機藥物放入充滿氧氣的密閉燒瓶中進行燃燒,并將燃燒所產(chǎn)生的欲測物質(zhì)（氣態(tài)）吸收于適當吸收液中,然后根據(jù)欲測物質(zhì)的性質(zhì),采用適當分析方法進行鑒別、檢查或含量測定.特點①快速分解有機藥物的簡單方法.②不需復(fù)雜設(shè)備,能使有機結(jié)合中的待測元素定量地分解成無機離子狀態(tài).③適用于含鹵素及硫、磷、硒等藥物的鑒別、檢查和含量測定,特別適用于微量樣品的測定.24第二十四頁，共38頁。（1）儀器裝置25第二十五頁，共38頁。（2）操作②加吸收液﹑通氧③燃燒④吸收⑤測定①取樣10-20mg26第二十六頁，共38頁。（3）注意事項①.充氧氣要充分使樣品燃燒完全,一般急速通氧氣1~2分鐘,通氣管應(yīng)接近液面，使瓶內(nèi)空氣排盡，燃燒完全時沒有黑色炭化物.②.吸收完全應(yīng)充分振搖,燃燒瓶看不到煙霧.Cl－、F－白色煙霧Br－棕色I－紫色放置15min，用少量水沖洗瓶塞及鉑絲。27第二十七頁，共38頁。③.吸收液的選擇氟水

氯NaOH溶液溴H2O2-NaOHNaOH-硫酸肼飽和溶液碘NaOH－硫酸肼飽和溶液硫NaOH或H2O2

硒硝酸溶液④.防爆樣品燃燒時,溫度很高,燃燒瓶內(nèi)壓力很大,有爆炸的可能性,必須采取防護措施.防護措施戴防護眼鏡瓶外包濕毛巾28第二十八頁，共38頁。（4）鹵素化合物的燃燒產(chǎn)物①氟化物、氯化物氟或氯以離子狀態(tài)存在，吸收后可直接測定.②溴化物③碘化物溴化物或碘化物,燃燒后以多種價態(tài)存在,吸收后應(yīng)轉(zhuǎn)化為統(tǒng)一價態(tài)再測定.29第二十九頁，共38頁。（5）實例-碘苯酯的含量測定燃燒吸收加溴醋酸溶液加甲酸、加KI

滴定

30第三十頁，共38頁。將?

-、?

2氧化為?O3

2Na?+Br2=2NaBr+?

2

?

2+5Br2+6H2O=2H?O3+10HBr2溴-醋酸氧化劑：?

2+2Na2S203

2Na?

+Na2S4066H++5?-+?O3-

3?

2+3H2O1燃燒吸收R-?CO2+H2O+Na?+?2+Na?O3+NaClO3加甲酸：除去過量的溴4加KI滴定31第三十一頁，共38頁。1.氧瓶燃燒法中的裝置有()A.磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶B.磨口軟質(zhì)玻璃錐形瓶C.鉑絲D.鐵絲E.鋁絲2．選擇氧瓶燃燒法所必備的實驗物品()A.磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶B.鉑絲C.普通濾紙D.氫氣E.無灰濾紙3.氧瓶燃燒法可用于()A.含鹵素有機藥物的含量測定B.醚類藥物的含量測定C.檢查甾體激素類藥物中的氟D.檢查甾體激素類藥物中的硒E.芳酸類藥物的含量測定32第三十二頁，共38頁。第二節(jié)體內(nèi)樣品分析預(yù)處理方法生物樣本：生物體的任何臟器、組織、體液均可作為生物樣本.常用樣本:血液（血漿、血清或全血）、尿液、唾液、毛發(fā)（一）樣品采集

1血漿或血清樣品處理適用：有機藥物藥動學(xué)研究、生物利用度測定、治療藥物檢測等樣品處理方法：（１）去蛋白質(zhì)（２）分離純化濃集（３）儀器分析（4）綴合物水解33第三十三頁，共38頁。（1）去蛋白質(zhì)①加入與水混溶的有機溶劑——蛋白質(zhì)脫水沉淀②加入中性鹽——“鹽析”沉淀蛋白質(zhì)③加入強酸——與蛋白質(zhì)陽離子(銨基)形成不溶性鹽沉淀④加入重金屬鹽——與蛋白質(zhì)陰離子(羧基)形成不溶性鹽沉淀⑤超濾法—半透膜濾除可溶性生物大分子⑥酶水解法——蛋白分解酶分解蛋白質(zhì)⑦加熱法——蛋白質(zhì)變性凝固34第三十四頁，共38頁。

①液-液萃取法②固-相萃?、郾粶y組分濃集（3）分離純化與濃集（4）化學(xué)衍生①使藥物變成具有被分離的性質(zhì)②提高檢測靈敏度③增強藥物的穩(wěn)定性④提高對光學(xué)異構(gòu)體分離能力35第三十五頁，共38頁。2尿液處理適用：藥物劑量回收、腎清除率和生物利用度測定、藥物代謝研究

尿中藥物多數(shù)呈綴合狀態(tài),為測定尿液中藥物總量,需將綴合物中藥物釋出.①酸水解

②酶水解綴合物的水解3毛發(fā)（頭發(fā)）適用：微量元素測定方法：有機破壞法濕法破壞干法破壞氧瓶燃燒法36第三十六頁，共38頁。1.在藥物干燥失重和熾灼殘渣測定中，恒重是指連續(xù)兩次操作后所得的重量差A(yù).等于0B≤0.1mgC.≤0.3mgD.≤1mgE.≤3mg2.中國藥典中規(guī)定，稱取“2.0g”是指A.稱取重量為1.5~2.5gB.稱取重量為1.95~2.05gC.稱取重量為1.995~2.005gD.稱取重量為1.9995~2.0005g3.中國藥典凡例中規(guī)定的“極易溶解”系指溶解1g溶質(zhì)所需溶劑的體積為：A.不到1mLB.1mL~不到10mLC.10mL~不到30mLD.30mL~不到100mL37第三十七頁，共38頁。4.中國藥典凡例中規(guī)定的“水浴”系指水浴溫度為：A.10~30℃B.40~50℃C.70~80℃D.98~100℃5.