精選生化試劑注意事項講義

（優(yōu)選）生化試劑注意事項現(xiàn)在是1頁\一共有38頁\編輯于星期四Contents1.試劑的保存2.實驗室有關(guān)試劑使用的SOP的建立3.試劑類型和機器的匹配4.校準和質(zhì)控與試劑的匹配性7.對外觀異常的標本的處理8.對特殊項目進行特殊的處理6.合理的試劑上機順序9.對異常結(jié)果的標本的處理5.機器性能和水機狀態(tài)對檢測的影響

現(xiàn)在是2頁\一共有38頁\編輯于星期四1.試劑的保存1.1.合適的溫度和避光保存：大部分為2-8℃少部分為2-26℃。1.2.試劑擺放時注意不要貼近冰箱后背的內(nèi)膽，防止試劑結(jié)冰。試劑放置的偏后，貼近后背的內(nèi)膽，現(xiàn)在的冷凝器在兩側(cè)，后背有制冷管路就會造成結(jié)冰。

現(xiàn)在是3頁\一共有38頁\編輯于星期四2.實驗室有關(guān)試劑使用的SOP的建立2.1.不同項目在同一型號機器上SOP的建立。2.2.同一個項目在不同型號上SOP的建立。HBA1C的溶血劑D-D標本類型三試劑HCYHBA1C在AU5400和AU5800的應用區(qū)別現(xiàn)在是4頁\一共有38頁\編輯于星期四3.試劑類型和機器的匹配貨號規(guī)格適用儀器020GR1:4×100mlR2:

2×50mlHitachi7060/7150及島津CL7200/8000專用包裝021GR1:6×60mlR2:

2×45mlHitachi7170/7080及OlympusAU640/400/600專用包裝GH021GR1:2×50mlR2:1×25mlHitachi7020專用包裝GT021GR1:5×48mlR2:2×30mlTOSHIBA專用包裝GX021GR1:2×80mlR2:2×20ml貝克曼儀器CX5/7/9/LX20專用包裝GD021GR1:24×4.3mlR2:6×4.3ml杜邦專用包裝現(xiàn)在是5頁\一共有38頁\編輯于星期四4.校準和質(zhì)控與試劑的匹配性首先必須明確生化分析儀不論如何先進，它還是一個比較器，它測試出來的標本結(jié)果是隨著標準限的設(shè)置不同而變化的。所以，在衛(wèi)生部臨床檢驗中心擬定的“臨床實驗室（定量測定）室內(nèi)質(zhì)控工作指南”中明確指出“對測定標本的儀器一定要求進行校準，校準時要選擇合適的（配套的）標準品/校準品；如有可能，校準品應能溯源到參考方法或/和參考物質(zhì)；對不同的分析項目要根據(jù)其特性確立各自的校準頻率?！爆F(xiàn)在是6頁\一共有38頁\編輯于星期四校準品（Calibration

materials）含有已知量的欲測物，用以校準該測定方法的數(shù)值，它與該方法及試劑、儀器是相關(guān)聯(lián)的。校準品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)誤差。因此最好為人血清基質(zhì)，以減少基質(zhì)效應造成的誤差。

質(zhì)控品（Control

materials）只用于和待測標本同時測定的，為了控制標本的測定誤差，因此要求保存時間十分穩(wěn)定。現(xiàn)在是7頁\一共有38頁\編輯于星期四現(xiàn)在是8頁\一共有38頁\編輯于星期四現(xiàn)在是9頁\一共有38頁\編輯于星期四現(xiàn)在是10頁\一共有38頁\編輯于星期四現(xiàn)在是11頁\一共有38頁\編輯于星期四5.機器性能和水機狀態(tài)對檢測的影響5.1.優(yōu)良的機器狀態(tài)是實驗結(jié)果準確的前提。5.2.合格且穩(wěn)定的水質(zhì)是保障結(jié)果準確性和穩(wěn)定性的重要因素?，F(xiàn)在是12頁\一共有38頁\編輯于星期四5.1.有關(guān)機器狀態(tài)對測量結(jié)果影響讀點主波長副波長A121873171170213187417117031418741681706151874170170416187217017021717031691534181709165154419170916615432017081681540攪拌系統(tǒng)出現(xiàn)問題現(xiàn)在是13頁\一共有38頁\編輯于星期四某醫(yī)院反饋CL比色法最近結(jié)果特別異常，結(jié)果在-1000和2000之間波動。而且僅僅CL結(jié)果異常，其它項目結(jié)果沒問題。燈泡在450的波長下不穩(wěn)定。所有項目僅僅CL在450的波長下反應。某醫(yī)院反饋最近所有項目忽高忽低，特別是酶類，懷疑試劑出現(xiàn)問題沖洗站最外面的打水針出現(xiàn)問題，打水量時多時少。當打水偏多的時候，水會溢到隔壁反應杯?，F(xiàn)在是14頁\一共有38頁\編輯于星期四5.2.有關(guān)水機狀態(tài)對測量結(jié)果影響現(xiàn)在是15頁\一共有38頁\編輯于星期四ABS空白：33

ABS27.4：47510:1949.8:1919.69.29.19.0合格且穩(wěn)定的水質(zhì)是保障結(jié)果準確性和穩(wěn)定性的重要因素?，F(xiàn)在是16頁\一共有38頁\編輯于星期四6.合理的試劑上機順序合理的試劑測試順序是防止試劑針交叉污染的重要方法之一。TG試劑內(nèi)含有高活性的脂肪酶，濃度為6000U/L。TG和LPS的檢測之間盡量隔開?，F(xiàn)在是17頁\一共有38頁\編輯于星期四現(xiàn)在是18頁\一共有38頁\編輯于星期四現(xiàn)在是19頁\一共有38頁\編輯于星期四7.對外觀異常的標本的處理隨著科學技術(shù)的發(fā)展，生化檢驗測定的精密度和準確度都大大的提高了，但是這卻時一些實驗人員忽視了對血清標本外觀的觀測。事實上，血清標本的外觀對其生化結(jié)果有著很直接的影響。溶血黃疸乳糜血現(xiàn)在是20頁\一共有38頁\編輯于星期四溶血：血紅蛋白的吸收峰在500nm，500-560nm都有影響。又因為血紅蛋白本身是氧化還原劑，可以與試劑中的過氧化物發(fā)生反應，致使檢測結(jié)果受到影響。黃疸：嚴重的黃疸對比色有影響，例如ALT，Crea，GGT等項目受影響更為明顯。脂血：造成散射，波長越短越明顯，對任何測定都有影響。建議：對于外觀異常的標本采取其它的檢測手段進行分析?，F(xiàn)在是21頁\一共有38頁\編輯于星期四8.對特殊項目進行特殊的處理HbA1C：溶血劑處理半個小時以上。CO2：試劑盒不能長期敞開蓋子，標本盡快處理防止揮發(fā)。NH3：含氨的抗凝劑、未去氨材質(zhì)做的試管、分析過程中受到氨的污染。標本放置會導致氨的逸出。CU：不能使用肝素抗凝的采血管?，F(xiàn)在是22頁\一共有38頁\編輯于星期四9.對異常結(jié)果標本的處理對于異常結(jié)果的標本不僅要結(jié)合臨床情況進行分析，而且也要結(jié)合反應曲線進行全面分析。前白蛋白結(jié)果為“0”TBA大批量做偶爾出現(xiàn)負值，單獨沒有問題肝臟的損傷程度機器交叉污染的情況現(xiàn)在是23頁\一共有38頁\編輯于星期四Hotspot:有關(guān)雙試劑R1剩余的問題

在生化分析儀器的長期使用過程中，出現(xiàn)雙試劑的R1剩余很多，R2已經(jīng)用完。其原因是儀器在設(shè)計過程中，為了避免試劑污染，試劑探針在加入設(shè)定量的同時多加一些試劑（模擬量），設(shè)定量加入反應杯，模擬量被棄去，其模擬量隨設(shè)定量不同而不同，由于R2設(shè)定試劑量小,其相對模擬量大，造成R2短缺。R1體積：80mlR2體積：40mlR1：R2=200:100R1：R2=100：50實際測試數(shù)：347，R1剩余量2.6ml實際測試數(shù)：634，R1剩余量7.1ml現(xiàn)在是24頁\一共有38頁\編輯于星期四Hotspot:有關(guān)交叉污染的分析1.部件間化學污染的來源2.試劑間化學污染的類型3.試劑間化學污染的判別4.消除試劑間化學污染的方法現(xiàn)在是25頁\一共有38頁\編輯于星期四1.部件間化學污染的來源全自動生化分析儀發(fā)展迅速，具有多項目、多樣本的處理能力，檢測速度不斷的提高，但由于共用吸樣針、試劑針、攪拌棒以及比色杯，當生化儀長期使用致其清洗能力下降、比色杯老化后引起吸附力增加、生化儀內(nèi)污垢的積聚、測試順序安排不當，且常規(guī)清洗不能有效消除交叉污染時，就會增加試劑間化學污染的可能性，引起測定結(jié)果不準確?，F(xiàn)在是26頁\一共有38頁\編輯于星期四1.1.試劑針污染：當試劑針在清洗不完全，或黏附力增加時，殘留試劑可能會對下一相臨檢測結(jié)果造成影響。1.2.攪拌棒污染：攪拌綁若清洗不完全，或黏附力增加時，殘留試劑可能會對下一相臨檢測結(jié)果造成影響。1.3.比色杯污染：當某個比色杯清洗不完全時，吸附在比色杯上的上一個項目的殘留試劑，可能會對在這個比色杯中進行的下一個項目的檢測結(jié)果造成影響?，F(xiàn)在是27頁\一共有38頁\編輯于星期四2.試劑間化學污染的類型2.1.試劑成分的直接污染2.2.試劑成分參與反映2.3.反應進程相同2.4.影響反映條件現(xiàn)在是28頁\一共有38頁\編輯于星期四2.1.試劑成分的直接污染：上一測定試劑中含有下一測定所需要測定的物質(zhì)，直接干擾下一檢測的測定結(jié)果。如：AMY試劑中含有較高濃度的Ca2+；ALP（IFCC法）、CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）、CO2（PEPC法）、AMY（EPS法）、TG等試劑中含有Mg2+。現(xiàn)在是29頁\一共有38頁\編輯于星期四2.2.試劑成分參與反映：上一個試劑中含有的某種試劑成分與下一反應所要測定的底物有作用，因而干擾下一反應的測定結(jié)果。如：（1）鎂測定試劑的絡(luò)合劑亦能與鐵結(jié)合，影響鐵有鐵絡(luò)合劑的結(jié)合（2）CHOL試劑中含有膽固醇酯酶，可水解膽固醇酯形成游離膽固醇，而引起對游離膽固醇測定的干擾?，F(xiàn)在是30頁\一共有38頁\編輯于星期四2.3.反應進程相同：上一試劑所引導的反應對下一個項目的反應進程帶來間接的干擾，下一項目所測定的是前后兩個項目反應的綜合作用結(jié)果。如：當上一個反應產(chǎn)物為H2O2時則對以Trinders反應產(chǎn)生顏色的測定結(jié)果引起干擾。如UA對CHOL結(jié)果的影響；CHOL對CREA（酶法）測定結(jié)果的影響；GLU（氧化酶法）對CREA測定結(jié)果的影響。現(xiàn)在是31頁\一共有38頁\編輯于星期四2.4影響反映條件：影響下一項目的反應條件如pH等，從而改變反應速率。如：（1）直接膽紅素（釩酸鹽氧化法）試劑中含有表面活性劑的酒石酸鹽緩沖液會影響ALT活性，對測定結(jié)果有負干擾。（2）CREA（苦味酸速率法）反應條件為堿性，果糖胺（動力學法）反應條件為酸性，受到污染后反應速率會減慢?，F(xiàn)在是32頁\一共有38頁\編輯于星期四3.試劑間化學污染的判別3.1.一份樣本分成兩份，一份加生理鹽水或其他適當?shù)南♂屢海硪环菁拥攘康哪吃噭?，同時測定，觀察結(jié)果的變化，進而確定發(fā)生試劑交叉污染時造成直接干擾的項目?，F(xiàn)在是33頁\一共有38頁\編輯于星期四3.2.1.假設(shè)有3個項目A，B，C，以一混合血清作為標本，按以下順序測試：A，A，A，A，A，B，A，C，A，B，B，B，B，B，C，B，C，C，C，C，C。得到的結(jié)果分別為：A1，A2，A3，A4，A5，BA-B，AB-A，CA-C，AC-A，B1，B2，B3，B4，B5，CB-C，BC-B，C1，C2，C3，C4，C5。（AB-A：表示B項目對A項目污染時A項目的測定值，其余表示類同）。以A2~A5、B2~B5、C2~C5的4次測定平均值分別作為A、B、C項目無污染時的測定值。若（AB-A/A×100%）<95%或>105%則強烈支持B試劑對A有交叉污染?，F(xiàn)在是34頁\一共有38頁\編輯于星期四3.1.2.若上述初試驗結(jié)果B對A有污染，則可進行以下試驗進行確認，測定順序為：B,A,A,A,結(jié)果為：B，A1，A2，A3。若（A1/A3×100%）<95%或>105%，則強烈支持B對A有交叉污染。A1→A3的結(jié)果可觀察受B污染的程度是否逐漸減輕?，F(xiàn)在是35頁\一共有38頁\編輯于星期四4.消除試劑間化學污染的方法4.1.要求檢驗人員對儀器工作流程、試劑組成、測定原理要了如指掌，對試劑交叉污染的各種可能性加以考慮，合理設(shè)計程序。更換試劑時應仔細研究說明書，發(fā)現(xiàn)和避免可能存在的試劑交叉污染。4.2.合理安排檢測項目的順序，在有交叉污染的檢測項目中間插入一個或兩個非污染項目。最徹底的做法則是將被干擾項目置于干擾項目之前，以消除干擾發(fā)生的可能?，F(xiàn)在是36頁\一共有38頁\編輯于星期四4.3.當合理設(shè)置測試順序無法消除交叉污染時，可使用生化儀的試劑針、比色杯清晰程序，對試劑針、比色杯進行2次或多次清洗。用堿性清洗掖及酸性清洗掖沖洗試劑針可以有效地避免攜帶污染。4.4.選用具有抗交叉污染的試劑盒：如在游離膽固醇試劑中添加膽固醇酯酶抑制劑，以減少膽固醇酯酶水解膽固醇酯而引起