抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述_第1頁
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文檔簡介

抗核抗體基本概念及對應(yīng)臨床疾病概述第1頁/共33頁傳統(tǒng)定義針對細(xì)胞核成分的自身抗體的總稱。廣義定義針對細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對ANA的理解不再局限于核成分,而是指核酸和核蛋白抗體的總稱靶抗原存在于包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂結(jié)構(gòu)等部位抗核抗體的定義第2頁/共33頁ANA可見于多種疾病,特別是結(jié)締組織疾病,常作為結(jié)締組織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標(biāo)在非結(jié)締組織病中也可出現(xiàn)陽性。正常人中(特別是老年人)也可出現(xiàn)陽性,但滴度低,并且常表現(xiàn)為IgM型高滴度ANA則高度提示自身免疫性疾病目前,ANA檢測已成為臨床上的一個極重要的自身免疫病的篩查實驗。ANA檢測的臨床意義第3頁/共33頁系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動期非活動期藥物誘導(dǎo)的紅斑狼瘡混合性結(jié)締組織?。∕CTD、Sharp綜合征)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥多發(fā)性肌炎及皮肌炎干燥綜合征慢性活動性肝炎潰瘍性結(jié)腸炎其它風(fēng)濕病正常人95-10080-10010010020-4020-5085-9530-5070-8030-40265-10ANA檢測的臨床意義第4頁/共33頁ANA實驗室檢測策略推薦第5頁/共33頁ANA間接免疫熒光法篩查實驗第6頁/共33頁間接免疫熒光法檢測ANA—基本原理間接免疫熒光法包被HEp-2細(xì)胞的基質(zhì)玻片樣本中ANA-IgGFITC標(biāo)記的抗人IgG抗體第7頁/共33頁抗原譜完整(細(xì)胞核、細(xì)胞漿中近百種自身抗原)人源細(xì)胞,無種屬非特異熒光干擾腫瘤細(xì)胞,易于培養(yǎng)及商品化生產(chǎn)核質(zhì)比大,可觀察到多種不同熒光核型ANA篩查的經(jīng)典和標(biāo)準(zhǔn)基質(zhì):HEp-2第8頁/共33頁均質(zhì)型核點型著絲點型核仁型Scl-70粗顆粒型細(xì)顆粒型核膜型.核糖體P蛋白線粒體型高爾基體溶酶體肌動蛋白波形蛋白基于Hep-2細(xì)胞為基質(zhì)的ANA初篩實驗第9頁/共33頁ANA間接免疫熒光法篩查試驗的實際價值初步甄別自身免疫性疾病患者(陰陽性結(jié)果)盡可能判斷熒光核型(縮小靶抗原確認(rèn)實驗范圍)獲取抗體滴度信息(判斷病情進(jìn)展、預(yù)后等)考慮到熒光法篩查試驗存在主觀性強的特點,因此應(yīng)以一種客觀和現(xiàn)實的態(tài)度去面對篩查試驗結(jié)果第10頁/共33頁幾個相對常見且重要的熒光核型均質(zhì)型核點型著絲點型核仁型粗顆粒型核膜型.核糖體P蛋白線粒體型肌動蛋白常見且重要核型的標(biāo)準(zhǔn)核型表現(xiàn)相對典型陽性率相對較高靶抗原相對明確第11頁/共33頁應(yīng)重視ANA滴度的檢測抗體滴度的臨床意義1、明確界定自身免疫性疾病患者;2、作為疾病進(jìn)程、臨床療效和病情預(yù)后及轉(zhuǎn)歸等的判斷指標(biāo)當(dāng)前國際主流ANA間接免疫熒光法檢測系統(tǒng)廣泛采用的起始稀釋度為1:40。即該檢測系統(tǒng)的正常參考范圍為1:40。梯度稀釋時的稀釋因子為1:2。HOB公司產(chǎn)品推薦按照1:80開展稀釋。第12頁/共33頁熒光強弱及血清稀釋度熒光強弱判讀觀察標(biāo)本的特異性熒光強度一般用“+”號表示。“—”為無或僅見極微弱熒光;“+”為熒光較弱但清楚可見;“++”為熒光明亮;“+++”為耀眼的強熒光。臨床上根據(jù)特異性熒光強度達(dá)“+”以上判定為陽性抗體梯度稀釋起始稀釋:1:80梯度稀釋(稀釋因子2)1:1601:3201:6401:12801:2560…直至抗體轉(zhuǎn)陰第13頁/共33頁各稀釋度的反應(yīng)性抗體滴度臨床意義1:801:640陽性+—1:80陽性,需結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合判斷陽性++—1:160陽性,提示可能存在相關(guān)疾病陽性++弱+1:320明確陽性,提示可能存在相關(guān)疾病陽性+++陽性+1:640中等陽性,提示可能存在相關(guān)疾病陽性+++陽性++1:1280強陽性,高度提示存在相關(guān)疾病陽性++++陽性+++1:2560極強的陽性,高度提示存在相關(guān)疾病。ANA熒光滴度判讀舉例第14頁/共33頁HOB公司間接免疫熒光法產(chǎn)品系列產(chǎn)品系列基質(zhì)檢測項目ANA篩查HEp-2細(xì)胞ANA各種不同核型dsDNA綠蠅短膜蟲抗dsDNA抗體AKA大鼠食管抗角蛋白抗體ANCA中性粒細(xì)胞乙醇和甲醛固定抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體組織器官大鼠肝/腎/胃ASMA\PCA\AMA\LKM-1\LC-1HEp-2細(xì)胞產(chǎn)品系列(舉例)16×6孔10×10孔8×12孔第15頁/共33頁ANA靶抗原確認(rèn)實驗第16頁/共33頁條帶酶免分析法檢測ANA—基本原理LIA檢測方法原理底物顏色反應(yīng)硝酸纖維膜IgG抗體堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgG抗體第17頁/共33頁ANA譜系列第18頁/共33頁U1-nRNP和Sm抗原SLE:5-30%SLE:15-40%MCTD:95-100%功能:參與mRNA前體的剪切第19頁/共33頁SS-A(Ro-60),Ro-52和SS-BAnti-SS-A(60kDa)干燥綜合征.: 40-95%SLE: 20-60%新生兒狼瘡: 96%Anti-SS-B干燥綜合征.: 40-95%SLE: 10-20%新生兒狼瘡: 78%Anti-Ro-52(52kDa)非特異功能:調(diào)控RNA翻譯功能:RNA聚合酶III輔助蛋白X第20頁/共33頁Scl-70

(DNA-拓?fù)洚悩?gòu)酶I)功能:在DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程中完成雙鏈解螺旋疾病: 硬化癥:50%-75%第21頁/共33頁Anti-Scl-70特點局限型和彌散型硬化癥病中的陽性率分別為10%和48%。抗Scl-70抗體陽性的患者通常病情發(fā)展快、預(yù)后差、多器官累及。第22頁/共33頁PM-Scl抗原:幾種多肽復(fù)合物(分子量間于20-100kDa),主要的靶抗原為100kDa

相關(guān)疾病: 硬化癥: 2%-5%

肌炎: 8%

重疊綜合征: 24%

第23頁/共33頁Jo-1抗原: 組氨酰tRNA合成酶(50kDa),

細(xì)胞漿中的磷蛋白

相關(guān)疾病: 多肌炎/皮肌炎的血清學(xué)標(biāo)志,陽性率為25-35%,當(dāng) 伴有肺間質(zhì)纖維化的多肌炎,陽性率可高達(dá)70%。

第24頁/共33頁著絲點抗原:動粒中的4種蛋白:A(17kDa),B(80kDa),C(140kDa),D蛋白(50kDa)。

著絲點蛋白B為主要的靶抗原

(與IIF:100%)

功能: 分裂期紡垂體的附著點

相關(guān)疾病: 硬化癥: 18%

局限型: 80%-95%

(CREST綜合征)

第25頁/共33頁PCNA:細(xì)胞增殖相關(guān)核抗原I型抗原: DNA聚合酶δ的輔助蛋白發(fā)揮控制細(xì)胞周期的作用

相關(guān)疾病: 系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體,但其發(fā)生率僅為3%。

第26頁/共33頁染色體結(jié)構(gòu)示意圖DNA核小體染色體染色質(zhì)組蛋白第27頁/共33頁dsDNA抗原: 雙鏈DNA,天然DNA(脫氧核糖核酸骨架)

相關(guān)疾?。?

dsDNA:

為SLE的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一,陽性率為60-90%,不同的檢測方法診斷特異性差別較大??贵w滴度與疾病的活動性、狼瘡腎炎的發(fā)病風(fēng)險具有相關(guān)性。第28頁/共33頁組蛋白抗原: H1,H2A,H2B,H3,H4,H2A-H2B,H3-H4

(主要的靶抗原為H1和H2B)

相關(guān)疾病: 藥物誘導(dǎo)性LE:100%(抗組蛋白抗體是該病唯一的標(biāo)志性抗體)

各種結(jié)締組織病: SLE: 30-80%

SSc: 30%

SS:10%

第29頁/共33頁核小體抗原: 組蛋白和DNA形成的復(fù)合物

相關(guān)疾病:

SLE:高特異性指標(biāo),陽性率為50-95%,特異性幾乎100%,抗核小體抗體可獨立于抗dsDNA抗體單獨出現(xiàn),因而抗核小體抗體與抗dsDNA抗體聯(lián)合檢測,可提高SLE的血清學(xué)檢出率。第30頁/共33頁40S亞基60S亞基P0P1P1P2P2

抗原: 核糖體60S亞基中的3種蛋白質(zhì):

P0,P1,P2.具備相同的碳端抗原位點核糖體P蛋白相關(guān)疾病: SLE: 為SLE的高特異性指標(biāo),陽性率為5-15%,常見于神經(jīng)狼瘡。第31頁/共33頁AMA與AMA-M2靶抗原: 線粒體亞結(jié)構(gòu)上幾種生化性質(zhì)明確的物質(zhì),可分為九種類型

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