實驗六細(xì)胞染色體的制備課件

2008級生工何佳霖小組2011級生工1班羅甜甜小組華俊豪小組2011級生工1班一、目的與要求

1、初步掌握小白鼠染色體標(biāo)本制作方法，了解其原理2、了解小白鼠染色體的特點3、掌握常規(guī)壓片法制備植物染色體標(biāo)本。4、了解染色體的生物學(xué)意義。二、材料、試劑與器材

1、材料：小白鼠18-20克、玉米根尖2、藥品：

0．9％生理鹽水;2%檸檬酸鈉溶液；秋水仙素溶液；

Giemsa液；磷酸緩沖液（PH6.8);吉姆薩染液或0.1%亞甲基藍(lán)液固定液（甲醛：冰醋酸3：1）0.4%KCl液、Carnoy固定液、苯酚品紅染液、10%HCl45%醋酸等3、器材：

顯微鏡，載玻片，蓋玻片，鑷子，滴管，擦鏡紙，刀片，恒溫水浴鍋，離心機,離心管,小培養(yǎng)皿4套，剪刀和電腦等問題1、什么叫染色體？

由脫氧核糖核酸、蛋白質(zhì)和少量核糖核酸組成的線狀或棒狀物，是生物主要遺傳物質(zhì)的載體。是細(xì)胞中可被堿性染料著色的物質(zhì)。染色體模式圖2、依據(jù)著絲粒在染色體上所處的位置劃分哪四類？1）中間著絲粒染色體（M）

2）近中間著絲粒染色體（SM）

3）近端著絲粒染色體（ST）4）端著絲粒染色體（T）只有一條臂。

三、實驗操作1、小白鼠骨髓細(xì)胞染色體的制作與觀察1）、實驗原理

凡細(xì)胞處于活躍增殖狀態(tài)，或經(jīng)過處理后細(xì)胞可進入分裂的任何動物組織，均可用于染色體分析。給小白鼠體內(nèi)注射一定劑量的秋水仙素使分裂中的細(xì)胞多滯留于中期階段，染色體具有典型形態(tài)。骨髓中具有高度分裂活性的細(xì)胞，經(jīng)過秋水仙素處理，可使分裂的細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期，再經(jīng)低滲處理，固定，滴片，染色等步驟，可獲的染色體標(biāo)本。2）、實驗步驟（1）、在實驗前4-8小時，取20g左右的小白鼠，以4μg/g體重的劑量從腹腔注射秋水仙素；（3)、取1.5ml2%檸檬酸鈉用注射器注入骨髓腔中將骨髓細(xì)胞沖洗出來，然后吹打散。轉(zhuǎn)入10ml離心管中。（4)、在離心管中加8ml0.4%KCl液，吹打散.將離心管置于37℃水浴鍋內(nèi)處理20min（5)、離心：1500轉(zhuǎn)/min，離心10min（6)、棄去上清液，沿著管壁緩慢加入固定液5ml。（7)、用吸管輕輕吹打細(xì)胞，靜止固定20min，離心，棄去上清液。重復(fù)上述再固定1次。（8)、離心完畢，棄去固定液，依據(jù)管中細(xì)胞的量加入少量的固定液將細(xì)胞塊吹打均勻，制備成細(xì)胞懸液。（9)、在干凈、濕、冷的載玻片上滴一滴細(xì)胞懸液，在酒精燈上文火烘干或晾干。（10)、染色：在載玻片的細(xì)胞懸液上滴一滴1：10Giemsa磷酸鹽緩沖液，染色5min。（11)、沖洗與觀察2、植物細(xì)胞染色體標(biāo)本制備1）實驗原理

染色體是細(xì)胞分裂時期遺傳物質(zhì)存在的特定形式，是染色質(zhì)緊密包裝的結(jié)果，對染色體的觀察在研究生物進化、發(fā)育、遺傳和異變中有十分重要的作用。植物染色體標(biāo)本的制備。常規(guī)壓片法仍是當(dāng)今觀察植物染色體常見的方法，其程序包括取材、預(yù)處理、固定、解離、染色和壓片等步驟，簡單易操作，但是染色體易變形、難分散開。(3)固定：用水洗凈處理過的根尖，經(jīng)Carnoy固定液中固定2-4h，轉(zhuǎn)入70％乙醇中，4℃保存?zhèn)溆谩?4)解離：取出根尖，用蒸餾水洗凈，放入10%HCl中60℃解離

15min，再用蒸餾水洗凈。(5)染色：苯酚品紅或亞甲基藍(lán)染色5min。(6)壓片：把根尖放在載玻片上，加一滴45%醋酸，蓋上蓋玻片，垂直輕壓，使細(xì)胞和染色體分散。

（7）鏡檢3、實驗報告要求：1、觀察小白鼠骨髓細(xì)胞染色體的