第11章3其他類型hplc色譜法uplc

2023/4/91第十一章-3

其他類型高效液相色譜法超高效液相色譜法UltraPerformanceLiquidChromatography，UPLC22023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室特 點(diǎn)色譜柱填料一直向著更小顆粒，dp僅為1.7μm高壓，色譜儀輸液泵提供的輸出壓力可達(dá)140MPa快速，常規(guī)高效液相色譜需要30min完成的樣品分析在超高效液相色譜儀上縮短為僅需5min高效，柱效達(dá)20萬(wàn)塊/m理論塔板數(shù)32023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室基本原理

dpH42023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室結(jié)果

（一）比HPLC更高的分離度dpnR52023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室結(jié)果

（二）比HPLC更高的分析速度柱長(zhǎng)縮短會(huì)加快分離速度顆粒度越小，最佳流速也越大，進(jìn)而可以通過(guò)提高流速來(lái)進(jìn)一步加快分離速度62023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室結(jié)果

（三）比HPLC更高的靈敏度更高的柱效、更窄的色譜峰寬，因?yàn)樯V峰變得更窄，峰高也就更高了。因此，UPLC技術(shù)在改善分離度的同時(shí)亦可提高檢測(cè)靈敏度72023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室關(guān)鍵技術(shù)新型的色譜填料及裝填技術(shù)耐壓而且顆粒度分布范圍很窄的1.7μm顆粒填料超高效液相色譜儀泵：密封、高壓動(dòng)力，精度高高速檢測(cè)器：非常高的采樣速度和非常小的時(shí)間常數(shù)；死體積要盡可能小；光學(xué)靈敏度82023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室應(yīng) 用體內(nèi)藥物分析、中藥分析、代謝組學(xué)分析及其它一些生化領(lǐng)域先導(dǎo)化合物的篩選蛋白質(zhì)組學(xué)研究天然產(chǎn)物的分析2023/4/99第十一章-4

其他類型高效液相色譜法制備高效液相色譜法PreparativeHighPerformanceLiquidChromatography102023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室與分析型HPLC比較目的：制備一定量的純化合物分析型HPLC制備型HPLC目的獲得樣品的定性和定量信息分離、富集和純化樣品組分特點(diǎn)進(jìn)樣量夠檢測(cè)即可進(jìn)樣量盡可能大，以得到更多的純品柱內(nèi)徑1mm～5mm柱內(nèi)徑1cm～10cm或更大柱填料5μm或更小柱填料7μm或更大輸液泵一般流量為1ml/min輸液泵流量大于10ml/min樣品在流動(dòng)相中的溶解度通常不重要樣品在流動(dòng)相中的溶解度很重要流動(dòng)相的揮發(fā)性不重要流動(dòng)相應(yīng)具有揮發(fā)性理論基礎(chǔ)線性色譜非線性色譜112023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室制備高效液相色譜分離方法的建立122023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室（一）制備型HPLC分離條件的選擇1．柱效（n）色譜柱超載，但不能?chē)?yán)重超載，否則柱效會(huì)類似于呈指數(shù)下降，其分離能力急劇下降甚至基本上沒(méi)有什么分離能力2．容量因子（k）容量因子不宜過(guò)高，一般控制在1~5這個(gè)范圍內(nèi)就可以了，因?yàn)槿萘恳蜃拥脑龃笫且詴r(shí)間和大量溶劑消耗為代價(jià)的132023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室（一）制備型HPLC分離條件的選擇3．分離因子（α）固定相－分析型色譜柱中的填料最好與后面使用的制備型色譜柱的填料是同一型號(hào)的產(chǎn)品流動(dòng)相－目標(biāo)物與其最鄰近雜質(zhì)達(dá)到盡可能大的分離度142023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室（一）制備型HPLC分離條件的選擇4．樣品的溶解度

需要將大劑量的樣品溶解在有限量的流動(dòng)相中pH值或者離子強(qiáng)度替代溶劑加熱樣品并提高色譜柱的柱溫添加表面活性劑

152023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室（二）制備性分離設(shè)計(jì)1．峰接觸法增加待分離樣品的進(jìn)樣量，直至待分離組分的色譜峰與最鄰近組分的色譜峰剛好接觸為止2.峰重疊法增大待分離樣品的進(jìn)樣量，直至待分離組分的色譜峰與最鄰近組分的色譜峰發(fā)生重疊162023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室（三）制備規(guī)模的制備性分離d1是分析柱的直徑d2是制備柱的直徑L1是分析型柱的長(zhǎng)度L2是制備柱的長(zhǎng)度172023/4/9宋敏中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室制備高效液相