動物細(xì)胞工程上課用

動物細(xì)胞工程上課用植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞A

植物細(xì)胞B

去細(xì)胞壁原生質(zhì)體融合雜種細(xì)胞愈傷組織雜種植株植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞融合1、植物體細(xì)胞雜交的結(jié)果是產(chǎn)生了？2、這個過程中涉及的原理是？雜種植株細(xì)胞膜的流動性植物細(xì)胞的全能性2020/11/32動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞或組織培養(yǎng)體細(xì)胞克隆單克隆抗體制備技術(shù)細(xì)胞核融合技術(shù)細(xì)胞核移植技術(shù)2020/11/34事實：燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植，但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，想一想如何來治療該病人？取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),獲得足量的細(xì)胞后再移植動物細(xì)胞培養(yǎng)2020/11/35動物細(xì)胞培養(yǎng)幼齡動物取動物器官和組織剪碎組織細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶處理單個細(xì)胞2020/11/36概念：動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)液中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。動物細(xì)胞培養(yǎng)2020/11/37動物細(xì)胞培養(yǎng)討論1：用于培養(yǎng)的動物細(xì)胞或組織大多取自動物胚胎或出生后不就的幼齡動物的器官或組織，為什么？分化程度低，細(xì)胞增殖旺盛2020/11/38動物細(xì)胞培養(yǎng)討論2：在無菌條件下獲得動物某組織塊后，要用胰蛋白酶進(jìn)行處理時為了使細(xì)胞分散開來，說明存在于細(xì)胞間主要是什么物質(zhì)？為什么要使細(xì)胞分散開？蛋白質(zhì)有利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝廢物的排出2020/11/39討論3：體外培養(yǎng)細(xì)胞時需要什么樣的環(huán)境條件

？用胃蛋白酶代替胰蛋白酶是否可行？動物細(xì)胞培養(yǎng)1、無菌、無毒

2、適宜的溫度和pH

3、必要的氣體條件添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液36.5+（-）0.5℃O2和CO2（95%空氣和5%CO2）2020/11/310討論4：培養(yǎng)液的成分？動物細(xì)胞培養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）2020/11/311動物細(xì)胞培養(yǎng)討論5：隨著培養(yǎng)時間的延長，體外培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量會不斷增加，當(dāng)增加到一定程度后，細(xì)胞的生長和增殖逐漸放緩至停止，可能的原因是什么？2020/11/312動物細(xì)胞培養(yǎng)2020/11/313動物細(xì)胞培養(yǎng)討論5：隨著培養(yǎng)時間的延長，體外培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量會不斷增加，當(dāng)增加到一定程度后，細(xì)胞的生長和增殖逐漸放緩至停止，可能的原因是什么？資源的限制2020/11/314動物細(xì)胞培養(yǎng)討論6：出現(xiàn)接觸抑制后，若此時細(xì)胞數(shù)量并未達(dá)到人們的需求，應(yīng)該怎樣辦？原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)2020/11/315動物細(xì)胞培養(yǎng)原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。2020/11/316動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面生長和分裂。隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會停止分裂增殖2020/11/317動物細(xì)胞培養(yǎng)海拉細(xì)胞2020/11/318動物細(xì)胞培養(yǎng)幼齡動物取動物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)胞培養(yǎng)單個細(xì)胞2020/11/319獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較2020/11/320（三）、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1）生產(chǎn)生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（3）用于檢測有毒物質(zhì)（2）基因工程中常用的受體細(xì)胞（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)2020/11/321動物細(xì)胞工程1、下列關(guān)于動物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述中，錯誤的是

（）

A用于培養(yǎng)的細(xì)胞多取自動物胚胎或幼齡動物B培養(yǎng)過程中需要使用胰蛋白酶等，獲得離散的細(xì)胞C動物細(xì)胞培養(yǎng)液與植物組織培養(yǎng)液的成分相同D動物細(xì)胞培養(yǎng)師動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)C2020/11/322動物細(xì)胞工程2、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程的順序是（）①原代培養(yǎng)②傳代培養(yǎng)③胰蛋白酶處理組織，形成分散的懸浮細(xì)胞

A①②③B①③②C②①③D③①②D2020/11/3233、右圖是動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此圖回答。

(1)容器A中的是動物器官或組織。它一般取自___________。(2)容器A中的動物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是__________，然后用

酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開來。

(3)培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行。瓶中的培養(yǎng)基成分有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和_________等。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，一般傳到第___

代，有許多細(xì)胞衰老死亡，到這時的培養(yǎng)稱為___________.(4)在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)少部分細(xì)胞未死亡，說明此時這些細(xì)胞可能發(fā)生了______。幼齡動物的器官或組織、動物胚胎剪碎胰蛋白

動物血清

10原代培養(yǎng)癌變動物細(xì)胞工程2020/11/3242.動物細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物2020/11/325

將動物的一個細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成為一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體（克隆動物）分類胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易

細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性不容易2.1動物細(xì)胞核移植概念：2020/11/326克?。褐笍囊粋€共同的祖先，通過無性繁殖的方式產(chǎn)生出來的一群遺傳特性相同的DNA分子，細(xì)胞或個體?？寺“ㄈ齻€層次：

分子水平：如PCR擴(kuò)增DNA

細(xì)胞水平：如動物細(xì)胞培養(yǎng)

個體水平：如克隆動物2020/11/3272.2體細(xì)胞核移植的過程：思考：1.核移植的受體細(xì)胞是什么？處在什么時期？2.通過什么手段激活受體細(xì)胞，構(gòu)建重組胚胎？MⅡ中期卵母細(xì)胞誘導(dǎo)方法：物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞，完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。2020/11/3282020/11/329討論：1.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？

為使核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物提供的體細(xì)胞，在供體細(xì)胞的細(xì)胞核移至受體細(xì)胞之前，必須將受體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐摹?020/11/330

培養(yǎng)的動物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至10～50代左右時，部分細(xì)胞核型可能會發(fā)生變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變，而10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。因此，在體細(xì)胞核移植中，為了保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)，通常采用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞。2.用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？2020/11/3313.你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？絕大部分DNA來自于供體細(xì)胞核，但其核外還有少量的DNA，即線粒體中的DNA是來自于受體卵母細(xì)胞。此外，即便動物的遺傳基礎(chǔ)完全相同，但動物的一些行為、習(xí)性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系，核供體動物生活的環(huán)境與克隆動物所生活的環(huán)境不會完全相同，其形成的行為、習(xí)性也不可能和核供體動物完全相同，從這一角度看，克隆動物不會是核供體動物100%的復(fù)制。2020/11/3322.3體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景：1、在畜牧業(yè)中可以加速家畜遺傳改良的進(jìn)程2、保護(hù)瀕危物種3、醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官的移植4、了解胚胎發(fā)育和衰老過程；追蹤研究疾病的發(fā)展過程和治療疾病2020/11/3333、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題胚胎移植－動物幼體產(chǎn)出概率＜10％克隆動物存在著健康問題克隆動物的食品安全性問題存在爭議2020/11/334細(xì)胞核移植技術(shù)2020/11/3351、下列關(guān)于克隆技術(shù)的敘述中，錯誤的是（）A.20世紀(jì)末克隆技術(shù)已經(jīng)成熟B.具有廣闊的應(yīng)用前景C.可能會帶給人類許多負(fù)面的影響D.實際上是一種無性繁殖方式體細(xì)胞克隆技術(shù)A2020/11/3362、下列關(guān)于體細(xì)胞克隆的敘述中，錯誤的是（）A.供體為體細(xì)胞的細(xì)胞核B.受體為去核卵細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)C.細(xì)胞核移植時體細(xì)胞克隆的關(guān)鍵步驟D.克隆出的后代與供體的遺傳物質(zhì)和表現(xiàn)型完全一致D體細(xì)胞克隆技術(shù)2020/11/337在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是（）

A．細(xì)胞系B．細(xì)胞株C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞練習(xí)1A細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系2020/11/338練習(xí)2下列過程中不能體現(xiàn)細(xì)胞全能性的是（）A.將植物的形成層經(jīng)組織培養(yǎng)獲得完整植株B.通過體細(xì)胞雜交獲得新品種植物C.克隆羊的生產(chǎn)過程D.通過花藥離體培養(yǎng)形成單倍體植株C克隆羊：動物細(xì)胞核的全能性。2020/11/339練習(xí)3下列過程中與有性生殖有關(guān)的是（）A.獲得單倍體植株B.通過體細(xì)胞雜交獲得新品種植物C.克隆羊的生產(chǎn)過程D.通過動物細(xì)胞培養(yǎng)獲得人造皮膚E.植物組織培養(yǎng)過程中容易出現(xiàn)突變體A有性生殖=兩性生殖+單性生殖2020/11/340應(yīng)用2020/11/341免疫與抗體抗體產(chǎn)生的過程刺激當(dāng)抗原再次入侵2020/11/3422020/11/343傳統(tǒng)的抗體制備技術(shù)刺激漿細(xì)胞抗體缺點：特異性差、純度低?？乖瑽淋巴細(xì)胞細(xì)胞懸浮液原代培養(yǎng)10代細(xì)胞傳代培養(yǎng)50代細(xì)胞死亡不能無限增殖。2020/11/344融合1、注射抗原的目的是？2、促進(jìn)細(xì)胞融合的方法？3、細(xì)胞融合的細(xì)胞一定是雜交瘤細(xì)胞？4、雜交瘤細(xì)胞一定能產(chǎn)生人們需要的特異性抗體？獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞物理法、化學(xué)法、病毒法3種類型篩選2020/11/345單克隆抗體技術(shù)AAABBBAB1AB2AB3ABn……抗體1抗體2抗體3抗體n……選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基2020/11/346融合1、注射抗原的目的是？2、促進(jìn)細(xì)胞融合的方法？3、細(xì)胞融合的細(xì)胞一定是雜交瘤細(xì)胞？4、雜交瘤細(xì)胞一定能產(chǎn)生人們需要的特異性抗體？獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞物理法、化學(xué)法、病毒法3種類型5、單克隆抗體的特點？性質(zhì)單一、特異性強、靈敏度高2020/11/347單克隆抗體技術(shù)2020/11/348單克隆抗體技術(shù)下列不是細(xì)胞融合常用的方法的是（）A.細(xì)胞培養(yǎng)B.滅活的仙臺病毒誘導(dǎo)C.電刺激D.聚乙二醇作為誘導(dǎo)劑A2020/11/349單克隆抗體技術(shù)單克隆抗體的優(yōu)越性在于（）A.不能在體外制備B.其制備較復(fù)雜、產(chǎn)量低C.可以從T淋巴細(xì)胞中獲得D.特異性強、靈敏度高D2020/11/350動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞或組織培養(yǎng)體細(xì)胞克隆技術(shù)單克隆抗體制備技術(shù)細(xì)胞融合技術(shù)2020/11/351植物細(xì)胞培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)植物動物