食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)現(xiàn)在是1頁\一共有45頁\編輯于星期三第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)概述1、食品中微生物檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)和發(fā)展趨勢(shì)檢測(cè)食源細(xì)菌的傳統(tǒng)方法通常依賴于其在培養(yǎng)基里的生長,即進(jìn)行目標(biāo)菌的分離和生化鑒定,有時(shí)進(jìn)行血清學(xué)診斷繁瑣、耗時(shí)。隨著分子生物學(xué)和電子技術(shù)的飛速發(fā)展,快速、準(zhǔn)確、特異檢微生物的新技術(shù)、新方法不斷涌現(xiàn),微生物檢驗(yàn)技術(shù)由培養(yǎng)水平向分子水平邁進(jìn),并向儀器化、動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化方向發(fā)展,可大大提高食品微生物檢驗(yàn)工作的高效性、準(zhǔn)確性和可靠性?，F(xiàn)在是2頁\一共有45頁\編輯于星期三第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)概述2、食品中微生物檢測(cè)的局限性大部分快速方法適用于檢測(cè)特定微生物，用于快速篩選大量食品中所存在的特殊病原體。然而，快速檢方法抗干擾能力弱，所得結(jié)果必須用標(biāo)準(zhǔn)參考方法予以證實(shí)。因此,隨著某些快速方法更加頻繁地被使用,其優(yōu)點(diǎn)和局限性同時(shí)變得更加明顯，使用在選擇和徹底評(píng)估這些快速檢測(cè)方法時(shí)，必須綜合考慮各方面因素，在工作效率和可靠性上找到一個(gè)平衡點(diǎn)。現(xiàn)在是3頁\一共有45頁\編輯于星期三第五章食品中微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)與分析技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是4頁\一共有45頁\編輯于星期三一、什么是3M測(cè)試片？

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是5頁\一共有45頁\編輯于星期三二、3M測(cè)試片的優(yōu)點(diǎn)

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)1.工作效率的極大提高根據(jù)大量數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，使用3MPetrifilm，可以提高實(shí)驗(yàn)室工作效率118%以上。勞動(dòng)資源的最佳使用帶來生產(chǎn)能力的提高，最終的效果就是效益的增加。2.標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè)方法品質(zhì)穩(wěn)定的快速測(cè)試片克服了傳統(tǒng)的測(cè)試方法存在的由于使用不同批次的培養(yǎng)基，不同的配制條件，不同配制人員而導(dǎo)致的差異性。3.國際化的認(rèn)證方法3M快速測(cè)試的方法得到包括AOAC，AFNOR在內(nèi)的國際權(quán)威機(jī)構(gòu)的認(rèn)證，在全球許多國家也已獲得官方機(jī)構(gòu)的正式批準(zhǔn)，從而可以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性和在世界各地的廣泛認(rèn)可?，F(xiàn)在是6頁\一共有45頁\編輯于星期三二、3M測(cè)試片的優(yōu)點(diǎn)

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)4.快速得到檢測(cè)結(jié)果對(duì)比傳統(tǒng)的測(cè)試方法，3M快速測(cè)試片縮短檢測(cè)時(shí)間，使您在更短的時(shí)間內(nèi)獲得樣品的測(cè)試結(jié)果，能更加迅速地采取有效的措施解決發(fā)現(xiàn)的問題。5.方便進(jìn)行HACCP認(rèn)證由于檢測(cè)速度快，檢測(cè)項(xiàng)目全，準(zhǔn)確性高。3M為食品生產(chǎn)工藝過程中關(guān)鍵控制點(diǎn)的監(jiān)控提供了較為完整的系列產(chǎn)品，可以對(duì)包括生產(chǎn)線，生產(chǎn)設(shè)備和環(huán)境在內(nèi)的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行全面的測(cè)試。

現(xiàn)在是7頁\一共有45頁\編輯于星期三三、3M測(cè)試片的操作過程（腸桿菌科為例）

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是8頁\一共有45頁\編輯于星期三三、3M測(cè)試片的操作過程（腸桿菌科為例）

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是9頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測(cè)試片的結(jié)果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是10頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測(cè)試片的結(jié)果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是11頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測(cè)試片的結(jié)果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是12頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測(cè)試片的結(jié)果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是13頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測(cè)試片的結(jié)果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是14頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測(cè)試片的結(jié)果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是15頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測(cè)試片的結(jié)果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是16頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測(cè)試片的結(jié)果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是17頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測(cè)試片的結(jié)果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)3M測(cè)試片快速分析技術(shù)現(xiàn)在是18頁\一共有45頁\編輯于星期三第五章食品中微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)與分析技術(shù)第二節(jié)Mini-VIDAS快速分析測(cè)試技術(shù)現(xiàn)在是19頁\一共有45頁\編輯于星期三一、Mini-VIDAS快速分析技術(shù)簡(jiǎn)介

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第二節(jié)Mini-VIDAS快速分析測(cè)試技術(shù)現(xiàn)在是20頁\一共有45頁\編輯于星期三二、Mini-VIDAS快速分析技術(shù)原理

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第二節(jié)Mini-VIDAS快速分析測(cè)試技術(shù)1、在固相包被抗體，捕獲目標(biāo)菌。2、二抗酶結(jié)合物結(jié)合目標(biāo)菌，催化底物產(chǎn)生熒光。1、在固相包被抗體，捕獲目標(biāo)菌酶結(jié)合物。2、目標(biāo)菌抑制抗體和酶結(jié)合物結(jié)合，抑制催化底物產(chǎn)生熒光。現(xiàn)在是21頁\一共有45頁\編輯于星期三三、Mini-VIDAS快速分析技術(shù)優(yōu)勢(shì)

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第二節(jié)Mini-VIDAS快速分析測(cè)試技術(shù)現(xiàn)在是22頁\一共有45頁\編輯于星期三三、Mini-VIDAS快速分析技術(shù)優(yōu)勢(shì)

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第二節(jié)Mini-VIDAS快速分析測(cè)試技術(shù)現(xiàn)在是23頁\一共有45頁\編輯于星期三第五章食品中微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)與分析技術(shù)第三節(jié)利用電導(dǎo)率快速分析測(cè)試技術(shù)現(xiàn)在是24頁\一共有45頁\編輯于星期三一、電導(dǎo)率快速檢測(cè)微生物技術(shù)原理

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第三節(jié)利用電導(dǎo)率快速分析測(cè)試技術(shù)

微生物在生長過程中利用低電導(dǎo)率的大分子物質(zhì)(如蛋白質(zhì)，多肽及碳水化合物等)進(jìn)行新陳代謝，生成低分子帶電荷的分解物，使電導(dǎo)率發(fā)生變化。電信號(hào)經(jīng)放大后顯示并記錄，檢測(cè)系統(tǒng)每10分鐘檢測(cè)一次電導(dǎo)率的變化，由計(jì)算機(jī)實(shí)時(shí)監(jiān)控并自動(dòng)給出結(jié)果。因此只要先用標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)比做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可以達(dá)到快速定量檢測(cè)菌數(shù)的目的。

現(xiàn)在是25頁\一共有45頁\編輯于星期三一、電導(dǎo)率快速檢測(cè)微生物技術(shù)原理

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第三節(jié)利用電導(dǎo)率快速分析測(cè)試技術(shù)樣品中微生物數(shù)量越多，越快進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期。培養(yǎng)基電導(dǎo)率發(fā)生躍遷的時(shí)間越短?，F(xiàn)在是26頁\一共有45頁\編輯于星期三二、電導(dǎo)率快速檢測(cè)微生物技術(shù)特點(diǎn)

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第三節(jié)利用電導(dǎo)率快速分析測(cè)試技術(shù)1.采用測(cè)量培養(yǎng)基電導(dǎo)(M值)和電極電導(dǎo)(E值)結(jié)合的方法，測(cè)量相對(duì)電導(dǎo)率變化，使靈敏度大大提高，E值測(cè)量法尤其適用于一些高鹽分(高電導(dǎo)率)的選擇性增菌培養(yǎng)基，使電導(dǎo)率法用于致病菌快速初篩成為可能。2.對(duì)難以測(cè)量電導(dǎo)變化的微生物，采用測(cè)間接電導(dǎo)率的方法，通過測(cè)量KOH吸收微生物代謝產(chǎn)生CO2后電導(dǎo)率的變化反映微生物的生長情況?，F(xiàn)在是27頁\一共有45頁\編輯于星期三三、電導(dǎo)率快速檢測(cè)微生物技術(shù)優(yōu)勢(shì)

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第三節(jié)利用電導(dǎo)率快速分析測(cè)試技術(shù)1.靈敏度高。最低可檢測(cè)出0.2-1個(gè)/mL(克)樣品。2.可檢測(cè)樣品種類廣，檢測(cè)的微生物項(xiàng)目多。3.檢測(cè)速度快。大部分項(xiàng)目24小時(shí)內(nèi)出結(jié)果，樣品含菌量越高，出結(jié)果越快，只需數(shù)小時(shí)即給出結(jié)果。4.檢測(cè)步驟簡(jiǎn)單。廠家提供特殊配方的培養(yǎng)基，只需將樣品加入培養(yǎng)基中，放入儀器，然后啟動(dòng)程序即可自動(dòng)出結(jié)果。對(duì)于液體樣品無需復(fù)雜前處理，固體樣品只需進(jìn)行必要的均質(zhì)和稀釋即可。現(xiàn)在是28頁\一共有45頁\編輯于星期三一、膜過濾熒光染色法原理

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第四節(jié)膜過濾熒光染色法2.標(biāo)記3.激光掃描1.過濾現(xiàn)在是29頁\一共有45頁\編輯于星期三二、膜過濾熒光染色法步驟

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第四節(jié)膜過濾熒光染色法現(xiàn)在是30頁\一共有45頁\編輯于星期三三、膜過濾熒光染色法儀器

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第四節(jié)膜過濾熒光染色法現(xiàn)在是31頁\一共有45頁\編輯于星期三一、利用葡萄糖醛酸酶定量檢測(cè)E.Coli

大腸桿菌重要衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)，是環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全、衛(wèi)生防疫監(jiān)測(cè)中必檢的一個(gè)項(xiàng)目。傳統(tǒng)的大腸菌群檢測(cè)法試驗(yàn)過程繁雜、檢測(cè)工作量大、費(fèi)用較高，而且不適合進(jìn)行大腸桿菌定量檢測(cè)。絕大多數(shù)大腸桿菌具有葡萄糖醛酸酶，能分解葡萄醛酸苷。使無色原性-底物（4甲基傘花內(nèi)脂β-D葡萄糖苷酸）生成甲基傘形酮葡萄糖苷酸，在365nm紫外燈下觀察出現(xiàn)藍(lán)亮色熒光，可以實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第五節(jié)利用酶促反應(yīng)定量檢測(cè)微生物現(xiàn)在是32頁\一共有45頁\編輯于星期三二、ATP熒光法檢測(cè)總菌落數(shù)

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第五節(jié)利用酶促反應(yīng)定量檢測(cè)微生物

螢火蟲會(huì)發(fā)光是由于它能合成將化學(xué)物質(zhì)的化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)楣饽艿纳锎呋瘎獰晒馑孛浮⑾x熒光素(D-luciferin)以及所有細(xì)胞生物都產(chǎn)生的生物能量物質(zhì)—三磷酸腺苷（ATP）。在有氧的條件下，蟲光素酶催化蟲熒光素和ATP之間發(fā)生氧化反應(yīng)，形成氧化熒光素并發(fā)出熒光，其生化反應(yīng)式如下：現(xiàn)在是33頁\一共有45頁\編輯于星期三二、ATP熒光法檢測(cè)總菌落數(shù)

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第五節(jié)利用酶促反應(yīng)定量檢測(cè)微生物

上式表明，只要具備適當(dāng)條件，不僅螢火蟲，即使在試管中也能發(fā)出熒光。當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)中，蟲光素酶和蟲熒光素處于過量的情況下，熒光的強(qiáng)弱取決于ATP的數(shù)量。

在食品樣品中，細(xì)菌細(xì)胞越多，ATP量越高，發(fā)出的熒光也就越強(qiáng)。所以，在排除樣品中非細(xì)菌ATP干擾的情況下，通過熒光值就能確定樣品中細(xì)菌ATP的含量，從而確定細(xì)胞數(shù)量?，F(xiàn)在是34頁\一共有45頁\編輯于星期三檢測(cè)原理熒光素?zé)晒馑孛赶佘找涣姿嵫鹾蠠晒馑責(zé)晒猬F(xiàn)在是35頁\一共有45頁\編輯于星期三三、MTT法檢測(cè)總菌落數(shù)

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第五節(jié)利用酶促反應(yīng)定量檢測(cè)微生物檢測(cè)原理為活體微生物線粒體中含有琥珀酸脫氫酶，能使外源性MTT（噻唑藍(lán)）還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜(Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。Formazan結(jié)晶形成的量與活菌數(shù)成正比。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活菌細(xì)胞數(shù)量。該方法的特點(diǎn)是檢測(cè)靈敏度高、快速。在腫瘤細(xì)胞殺傷藥物篩選中應(yīng)用廣泛，在食品衛(wèi)生監(jiān)測(cè)中也有應(yīng)用的報(bào)道?，F(xiàn)在是36頁\一共有45頁\編輯于星期三三、MTT法檢測(cè)總菌落數(shù)

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第五節(jié)利用酶促反應(yīng)定量檢測(cè)微生物應(yīng)用實(shí)例1：巴氏消毒奶中活菌素快速檢測(cè)

取巴斯消毒奶10mL，至于無菌離心管中3000rpm離心5分鐘，棄去上清。加入10mL無菌生理鹽水洗滌離心管，再次3000rpm離心5分鐘，棄去上清取出奶液基質(zhì)。加入1mL生理鹽水重懸底部的微生物，取0.2mL到96孔酶標(biāo)板中，同時(shí)加入標(biāo)準(zhǔn)菌液做標(biāo)準(zhǔn)曲線，統(tǒng)一加入底物反應(yīng)30分鐘，讀數(shù)?，F(xiàn)在是37頁\一共有45頁\編輯于星期三一、血清學(xué)方法

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第六節(jié)利用免疫反應(yīng)快速檢測(cè)微生物圖示幾種操作類型的原理現(xiàn)在是38頁\一共有45頁\編輯于星期三一、血清學(xué)方法(基本原理回顧第3章)

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第六節(jié)利用免疫反應(yīng)快速檢測(cè)微生物實(shí)例1：化膿性鏈球菌的免疫聚集快速檢測(cè)菌體凝集試驗(yàn)免疫散射比濁法現(xiàn)在是39頁\一共有45頁\編輯于星期三二、酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)方法

第六章食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第六節(jié)利用免疫反應(yīng)快速檢測(cè)微生物ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。

分點(diǎn)理解:

1.

抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記；2.結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性；3.酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留其酶的活性。

在ELISA測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）②酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）③酶作用的底物（顯色劑）現(xiàn)在是40頁\一共有45頁\編輯于星期三固相載體抗體抗原酶抗