食品中微生物快速檢驗技術

第六章食品中微生物快速檢驗技術學習目標現(xiàn)在是1頁\一共有45頁\編輯于星期三第六章食品中微生物快速檢驗技術概述1、食品中微生物檢測的優(yōu)點和發(fā)展趨勢檢測食源細菌的傳統(tǒng)方法通常依賴于其在培養(yǎng)基里的生長,即進行目標菌的分離和生化鑒定,有時進行血清學診斷繁瑣、耗時。隨著分子生物學和電子技術的飛速發(fā)展,快速、準確、特異檢微生物的新技術、新方法不斷涌現(xiàn),微生物檢驗技術由培養(yǎng)水平向分子水平邁進,并向儀器化、動化、標準化方向發(fā)展,可大大提高食品微生物檢驗工作的高效性、準確性和可靠性?，F(xiàn)在是2頁\一共有45頁\編輯于星期三第六章食品中微生物快速檢驗技術概述2、食品中微生物檢測的局限性大部分快速方法適用于檢測特定微生物，用于快速篩選大量食品中所存在的特殊病原體。然而，快速檢方法抗干擾能力弱，所得結果必須用標準參考方法予以證實。因此,隨著某些快速方法更加頻繁地被使用,其優(yōu)點和局限性同時變得更加明顯，使用在選擇和徹底評估這些快速檢測方法時，必須綜合考慮各方面因素，在工作效率和可靠性上找到一個平衡點?，F(xiàn)在是3頁\一共有45頁\編輯于星期三第五章食品中微生物標準檢驗與分析技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是4頁\一共有45頁\編輯于星期三一、什么是3M測試片？

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是5頁\一共有45頁\編輯于星期三二、3M測試片的優(yōu)點

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術1.工作效率的極大提高根據(jù)大量數(shù)據(jù)統(tǒng)計，使用3MPetrifilm，可以提高實驗室工作效率118%以上。勞動資源的最佳使用帶來生產(chǎn)能力的提高，最終的效果就是效益的增加。2.標準化的檢測方法品質(zhì)穩(wěn)定的快速測試片克服了傳統(tǒng)的測試方法存在的由于使用不同批次的培養(yǎng)基，不同的配制條件，不同配制人員而導致的差異性。3.國際化的認證方法3M快速測試的方法得到包括AOAC，AFNOR在內(nèi)的國際權威機構的認證，在全球許多國家也已獲得官方機構的正式批準，從而可以確保檢測結果的可靠性和在世界各地的廣泛認可?，F(xiàn)在是6頁\一共有45頁\編輯于星期三二、3M測試片的優(yōu)點

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術4.快速得到檢測結果對比傳統(tǒng)的測試方法，3M快速測試片縮短檢測時間，使您在更短的時間內(nèi)獲得樣品的測試結果，能更加迅速地采取有效的措施解決發(fā)現(xiàn)的問題。5.方便進行HACCP認證由于檢測速度快，檢測項目全，準確性高。3M為食品生產(chǎn)工藝過程中關鍵控制點的監(jiān)控提供了較為完整的系列產(chǎn)品，可以對包括生產(chǎn)線，生產(chǎn)設備和環(huán)境在內(nèi)的各個環(huán)節(jié)進行全面的測試。

現(xiàn)在是7頁\一共有45頁\編輯于星期三三、3M測試片的操作過程（腸桿菌科為例）

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是8頁\一共有45頁\編輯于星期三三、3M測試片的操作過程（腸桿菌科為例）

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是9頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測試片的結果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是10頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測試片的結果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是11頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測試片的結果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是12頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測試片的結果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是13頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測試片的結果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是14頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測試片的結果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是15頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測試片的結果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是16頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測試片的結果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是17頁\一共有45頁\編輯于星期三四、3M測試片的結果判讀圖例

第六章食品中微生物快速檢驗技術第一節(jié)3M測試片快速分析技術現(xiàn)在是18頁\一共有45頁\編輯于星期三第五章食品中微生物標準檢驗與分析技術第二節(jié)Mini-VIDAS快速分析測試技術現(xiàn)在是19頁\一共有45頁\編輯于星期三一、Mini-VIDAS快速分析技術簡介

第六章食品中微生物快速檢驗技術第二節(jié)Mini-VIDAS快速分析測試技術現(xiàn)在是20頁\一共有45頁\編輯于星期三二、Mini-VIDAS快速分析技術原理

第六章食品中微生物快速檢驗技術第二節(jié)Mini-VIDAS快速分析測試技術1、在固相包被抗體，捕獲目標菌。2、二抗酶結合物結合目標菌，催化底物產(chǎn)生熒光。1、在固相包被抗體，捕獲目標菌酶結合物。2、目標菌抑制抗體和酶結合物結合，抑制催化底物產(chǎn)生熒光?，F(xiàn)在是21頁\一共有45頁\編輯于星期三三、Mini-VIDAS快速分析技術優(yōu)勢

第六章食品中微生物快速檢驗技術第二節(jié)Mini-VIDAS快速分析測試技術現(xiàn)在是22頁\一共有45頁\編輯于星期三三、Mini-VIDAS快速分析技術優(yōu)勢

第六章食品中微生物快速檢驗技術第二節(jié)Mini-VIDAS快速分析測試技術現(xiàn)在是23頁\一共有45頁\編輯于星期三第五章食品中微生物標準檢驗與分析技術第三節(jié)利用電導率快速分析測試技術現(xiàn)在是24頁\一共有45頁\編輯于星期三一、電導率快速檢測微生物技術原理

第六章食品中微生物快速檢驗技術第三節(jié)利用電導率快速分析測試技術

微生物在生長過程中利用低電導率的大分子物質(zhì)(如蛋白質(zhì)，多肽及碳水化合物等)進行新陳代謝，生成低分子帶電荷的分解物，使電導率發(fā)生變化。電信號經(jīng)放大后顯示并記錄，檢測系統(tǒng)每10分鐘檢測一次電導率的變化，由計算機實時監(jiān)控并自動給出結果。因此只要先用標準方法對比做出標準曲線，就可以達到快速定量檢測菌數(shù)的目的。

現(xiàn)在是25頁\一共有45頁\編輯于星期三一、電導率快速檢測微生物技術原理

第六章食品中微生物快速檢驗技術第三節(jié)利用電導率快速分析測試技術樣品中微生物數(shù)量越多，越快進入對數(shù)生長期。培養(yǎng)基電導率發(fā)生躍遷的時間越短?，F(xiàn)在是26頁\一共有45頁\編輯于星期三二、電導率快速檢測微生物技術特點

第六章食品中微生物快速檢驗技術第三節(jié)利用電導率快速分析測試技術1.采用測量培養(yǎng)基電導(M值)和電極電導(E值)結合的方法，測量相對電導率變化，使靈敏度大大提高，E值測量法尤其適用于一些高鹽分(高電導率)的選擇性增菌培養(yǎng)基，使電導率法用于致病菌快速初篩成為可能。2.對難以測量電導變化的微生物，采用測間接電導率的方法，通過測量KOH吸收微生物代謝產(chǎn)生CO2后電導率的變化反映微生物的生長情況?，F(xiàn)在是27頁\一共有45頁\編輯于星期三三、電導率快速檢測微生物技術優(yōu)勢

第六章食品中微生物快速檢驗技術第三節(jié)利用電導率快速分析測試技術1.靈敏度高。最低可檢測出0.2-1個/mL(克)樣品。2.可檢測樣品種類廣，檢測的微生物項目多。3.檢測速度快。大部分項目24小時內(nèi)出結果，樣品含菌量越高，出結果越快，只需數(shù)小時即給出結果。4.檢測步驟簡單。廠家提供特殊配方的培養(yǎng)基，只需將樣品加入培養(yǎng)基中，放入儀器，然后啟動程序即可自動出結果。對于液體樣品無需復雜前處理，固體樣品只需進行必要的均質(zhì)和稀釋即可。現(xiàn)在是28頁\一共有45頁\編輯于星期三一、膜過濾熒光染色法原理

第六章食品中微生物快速檢驗技術第四節(jié)膜過濾熒光染色法2.標記3.激光掃描1.過濾現(xiàn)在是29頁\一共有45頁\編輯于星期三二、膜過濾熒光染色法步驟

第六章食品中微生物快速檢驗技術第四節(jié)膜過濾熒光染色法現(xiàn)在是30頁\一共有45頁\編輯于星期三三、膜過濾熒光染色法儀器

第六章食品中微生物快速檢驗技術第四節(jié)膜過濾熒光染色法現(xiàn)在是31頁\一共有45頁\編輯于星期三一、利用葡萄糖醛酸酶定量檢測E.Coli

大腸桿菌重要衛(wèi)生學指標，是環(huán)境監(jiān)測、食品安全、衛(wèi)生防疫監(jiān)測中必檢的一個項目。傳統(tǒng)的大腸菌群檢測法試驗過程繁雜、檢測工作量大、費用較高，而且不適合進行大腸桿菌定量檢測。絕大多數(shù)大腸桿菌具有葡萄糖醛酸酶，能分解葡萄醛酸苷。使無色原性-底物（4甲基傘花內(nèi)脂β-D葡萄糖苷酸）生成甲基傘形酮葡萄糖苷酸，在365nm紫外燈下觀察出現(xiàn)藍亮色熒光，可以實現(xiàn)定量檢測。

第六章食品中微生物快速檢驗技術第五節(jié)利用酶促反應定量檢測微生物現(xiàn)在是32頁\一共有45頁\編輯于星期三二、ATP熒光法檢測總菌落數(shù)

第六章食品中微生物快速檢驗技術第五節(jié)利用酶促反應定量檢測微生物

螢火蟲會發(fā)光是由于它能合成將化學物質(zhì)的化學能轉變?yōu)楣饽艿纳锎呋瘎獰晒馑孛?、蟲熒光素(D-luciferin)以及所有細胞生物都產(chǎn)生的生物能量物質(zhì)—三磷酸腺苷（ATP）。在有氧的條件下，蟲光素酶催化蟲熒光素和ATP之間發(fā)生氧化反應，形成氧化熒光素并發(fā)出熒光，其生化反應式如下：現(xiàn)在是33頁\一共有45頁\編輯于星期三二、ATP熒光法檢測總菌落數(shù)

第六章食品中微生物快速檢驗技術第五節(jié)利用酶促反應定量檢測微生物

上式表明，只要具備適當條件，不僅螢火蟲，即使在試管中也能發(fā)出熒光。當反應系統(tǒng)中，蟲光素酶和蟲熒光素處于過量的情況下，熒光的強弱取決于ATP的數(shù)量。

在食品樣品中，細菌細胞越多，ATP量越高，發(fā)出的熒光也就越強。所以，在排除樣品中非細菌ATP干擾的情況下，通過熒光值就能確定樣品中細菌ATP的含量，從而確定細胞數(shù)量?，F(xiàn)在是34頁\一共有45頁\編輯于星期三檢測原理熒光素熒光素酶腺苷一磷酸氧合熒光素熒光現(xiàn)在是35頁\一共有45頁\編輯于星期三三、MTT法檢測總菌落數(shù)

第六章食品中微生物快速檢驗技術第五節(jié)利用酶促反應定量檢測微生物檢測原理為活體微生物線粒體中含有琥珀酸脫氫酶，能使外源性MTT（噻唑藍）還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜(Formazan)并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。Formazan結晶形成的量與活菌數(shù)成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活菌細胞數(shù)量。該方法的特點是檢測靈敏度高、快速。在腫瘤細胞殺傷藥物篩選中應用廣泛，在食品衛(wèi)生監(jiān)測中也有應用的報道?，F(xiàn)在是36頁\一共有45頁\編輯于星期三三、MTT法檢測總菌落數(shù)

第六章食品中微生物快速檢驗技術第五節(jié)利用酶促反應定量檢測微生物應用實例1：巴氏消毒奶中活菌素快速檢測

取巴斯消毒奶10mL，至于無菌離心管中3000rpm離心5分鐘，棄去上清。加入10mL無菌生理鹽水洗滌離心管，再次3000rpm離心5分鐘，棄去上清取出奶液基質(zhì)。加入1mL生理鹽水重懸底部的微生物，取0.2mL到96孔酶標板中，同時加入標準菌液做標準曲線，統(tǒng)一加入底物反應30分鐘，讀數(shù)?，F(xiàn)在是37頁\一共有45頁\編輯于星期三一、血清學方法

第六章食品中微生物快速檢驗技術第六節(jié)利用免疫反應快速檢測微生物圖示幾種操作類型的原理現(xiàn)在是38頁\一共有45頁\編輯于星期三一、血清學方法(基本原理回顧第3章)

第六章食品中微生物快速檢驗技術第六節(jié)利用免疫反應快速檢測微生物實例1：化膿性鏈球菌的免疫聚集快速檢測菌體凝集試驗免疫散射比濁法現(xiàn)在是39頁\一共有45頁\編輯于星期三二、酶聯(lián)免疫吸附檢測方法

第六章食品中微生物快速檢驗技術第六節(jié)利用免疫反應快速檢測微生物ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合的一種敏感性很高的實驗技術。

分點理解:

1.

抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記；2.結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性；3.酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留其酶的活性。

在ELISA測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）②酶標記的抗原或抗體（標記物）③酶作用的底物（顯色劑）現(xiàn)在是40頁\一共有45頁\編輯于星期三固相載體抗體抗原酶抗