海洋生物技術(shù)之生物活性物質(zhì)

海洋生物技術(shù)之生物活性物質(zhì)第1頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日海洋生物活性物質(zhì)一、概論二、海洋生物活性物質(zhì)結(jié)構(gòu)類型三、海洋生物活性物質(zhì)研究領(lǐng)域四、海洋藥物開(kāi)發(fā)的成功案例第2頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日海洋植物活性物質(zhì)研究一、紅樹(shù)林植物二、大型海藻第3頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日紅樹(shù)植物

紅樹(shù)植物（mangroveplant）是一類生長(zhǎng)在熱帶海洋潮間帶的木本植物。例如，紅樹(shù)、秋茄樹(shù)、紅茄冬、海蓮和木欖等。當(dāng)退潮以后，紅樹(shù)植物在海邊形成一片綠油油的“海上林地”。

第4頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日全世界紅樹(shù)植物種類有24科、30屬、83種（或變種），我國(guó)發(fā)現(xiàn)的真紅樹(shù)植物有12科、15屬、26種，半紅樹(shù)植物有9科、10屬、11種，分布在海南、廣東、廣西、福建和臺(tái)灣等省沿海，以及香港和澳門地區(qū)。紅樹(shù)植物種類和分布第5頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日在十五期間，對(duì)紅樹(shù)林植物化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)而又深入的研究。北京大學(xué)、中科院上海藥物所、中科院南海海洋研究所第6頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日20世紀(jì)60～70年代開(kāi)展了廣泛的中草藥資源調(diào)查，在此基礎(chǔ)上形成的《全國(guó)中草藥匯編》（1978年），收錄了3種紅樹(shù)林植物：老鼠簕、海芒果和黃槿，描述了其民間藥用價(jià)值。但紅樹(shù)林植物藥至今仍不屬于正統(tǒng)的中藥體系，無(wú)論是以前版的還是最新2000年版的《中華人民共和國(guó)藥典》，在其中藥部分，都沒(méi)有正式列入任何紅樹(shù)林植物藥，可見(jiàn)到目前為止，中國(guó)紅樹(shù)林藥物只限于民間利用，對(duì)它的研究開(kāi)發(fā)基本上仍屬于空白。紅樹(shù)植物藥用價(jià)值第7頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日紅樹(shù)植物與中藥植物研究異同點(diǎn)：一、生境不同，化學(xué)成分不同，但兩者在化學(xué)成分種類上類似。（萜類、甾醇、木脂素、黃酮、生物堿）二、提取和分離方法要區(qū)別對(duì)待。紅樹(shù)植物中含有大量單寧/鞣質(zhì)物質(zhì)(多酚類化合物)，易氧化，中藥提取方法中加熱回流提取和煎熬等方法慎用。切忌“照搬照抄，拿來(lái)主義”。三、科學(xué)研究與環(huán)境保護(hù)不可偏廢。第8頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日植物用多酚類化合物保護(hù)自己就是一個(gè)典型例子。植物受機(jī)械傷害或病原微生物侵害以后，植物的多酚類化合物則產(chǎn)生氧化還原反應(yīng)，形成有毒性的物質(zhì)，抵抗機(jī)械傷害或病原微生物侵害。第9頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日海藻褐藻：海帶、裙帶菜、鹿角菜、繩藻紅藻：紫菜、石花菜第10頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日海藻活性多糖海藻活性氨基酸和多肽海藻活性脂類海藻活性萜類海藻活性酚類海藻的其他活性物質(zhì)海藻活性物質(zhì)第11頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日

目錄一、微藻生物活性物質(zhì)種類二、微藻生物活性物質(zhì)分離純化技術(shù)三、微藻生物活性物質(zhì)應(yīng)用四、存在問(wèn)題分析五、展望第12頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日一、微藻活性物質(zhì)種類微藻活性多糖微藻活性脂類其它活性物質(zhì)微藻活性蛋白微藻毒素類微藻酶類微藻抗生素類微藻色素第13頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日利用微藻開(kāi)發(fā)生產(chǎn)生物活性物質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)：微藻種類繁多，活性物質(zhì)新穎、獨(dú)特；微藻生長(zhǎng)快、產(chǎn)量高、適應(yīng)能力強(qiáng)；可定向培養(yǎng)、易調(diào)控。第14頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日二、微藻活性物質(zhì)分離純化技術(shù)要獲得微藻的胞內(nèi)產(chǎn)物，細(xì)胞破碎是必須經(jīng)歷的一個(gè)步驟。破碎的方法包括高壓攪拌，球磨，反復(fù)凍融和超聲波等。萃?。豪糜袡C(jī)溶劑萃取胞內(nèi)活性物質(zhì)已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于微藻活性物質(zhì)的提取，如蝦青素，β-胡蘿卜素。從天然藻粉或藻泥中萃取出來(lái)的粗提物可以利用高速逆流層析、超臨界流體層析、高效液相色譜、反相層析，硅膠吸附層析，凝膠吸附層析等多種層析手段進(jìn)行純化。第15頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日（1）微藻活性多糖紫球藻多糖（抗菌）、繁枝蜈蚣藻多糖（抗氧化）、圓型臍葉藻多糖（抗凝血活性）、匍扇藻多糖（抗病毒）、扁藻多糖（抗腫瘤）、鹽藻多糖（抗菌、抗炎）、紫球藻多糖（抗氧化）等。由于在高溫、脫水、冷凍等情況下具有獨(dú)特的穩(wěn)定性，決定其不僅可用作食品、醫(yī)藥、化妝品、紡織、印染、冶金、石油等行業(yè)的黏合劑、乳化劑和增稠劑，還可用于醫(yī)用生物制品的干燥和保存，如血液制品、菌苗、疫苗、單克隆抗體、載藥脂質(zhì)體、抗血清等。第16頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日作者功能引用次數(shù)發(fā)表年份LobnerM,WalstedA,LarsenRGloaguenV,MorvanH,HoffmannLBalachandranP,PughND,MaGYGrzannaR,PolotskyA,PhanPVKajiT,FujiwaraY,HamadaC

KajiT,FujiwaraY,InomataY.HirahashiT,MatsumotoM,HazekiK

ZhangHQ,LinAP,SunYPughN,RossSA,ElSohlyHNLeeJB,SrisompornP,HayashiKMishimaT,MurataJ,ToyoshimaM加強(qiáng)免疫細(xì)胞毒性加強(qiáng)免疫加強(qiáng)免疫抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖加強(qiáng)免疫加強(qiáng)免疫加強(qiáng)免疫抗單純皰疹病毒抗腫瘤30311011276339452008.062007.102006.122006.062002.062002.032002.032001.122001.112001.011998.08PSP的國(guó)內(nèi)外研究情況螺旋藻多糖（PolysaccharidefromSpirulinaplatensis，PSP）

第17頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日微藻中多糖提取方法的比較

水提法稱取一定量濕藻體．加蒸餾水，沸水浴加熱1~3h．定容，濾紙過(guò)濾，濾液稀釋一定倍數(shù)，蒽酮法測(cè)糖。與提取時(shí)間有關(guān)，需要長(zhǎng)時(shí)間加熱提取。堿提法稱取一定量的濕藻體，加入不同濃度的堿液，其余步驟與水提法相同。優(yōu)缺點(diǎn)同水提法，不利于藻體綜合利用。凍融水提法稱取一定量的濕藻體，加蒸餾水，反復(fù)凍融三次，離心。藻體碎片加一定量的蒸餾水，沸水浴加熱3h．濾紙過(guò)濾，得濾液；收集凍融上清液，定容。濾液、上清液用蒽酮法測(cè)糖。微波法藻粉先進(jìn)行微波提取，提取液離心再加3倍無(wú)水乙醇沉淀，靜置12h后離心，沉淀加3%TCA溶解，離心獲得上清液，再通過(guò)無(wú)水乙醇沉淀，對(duì)沉淀進(jìn)行無(wú)水乙醇洗滌，真空干燥，得到粗多糖。輔助提取技術(shù)。TCA(三氯乙酸)法離心收集藻細(xì)胞，60℃恒溫，干燥，置4%氫氧化鈉溶液中，反復(fù)凍融3次，離心，分別收集上清液與藻體碎片，藻體碎片置沸水浴中加熱3h，濾紙過(guò)濾得濾液，合并濾液與上清液，水浴濃縮，往上述收集的濃縮液中分別加入3倍體積的無(wú)水乙醇沉淀上清液，離心，取沉淀物，用3%三氯乙酸溶解沉淀，離心，取上清液，用無(wú)水乙醇沉淀，重復(fù)上述操作二次除去蛋白，最后收集的沉淀物即為多糖提取物。酶法對(duì)微藻細(xì)胞，先進(jìn)行水提，然后用胰蛋白酶水解，再用木瓜蛋白酶水解。粗多糖經(jīng)脫蛋白、脫色和去除小分子雜質(zhì)，得到較純的多糖混合物，再經(jīng)柱層析純化分級(jí)，得到精制的單一多糖。多糖的得率提高。第18頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日選擇凍融法對(duì)微藻進(jìn)行提取，再運(yùn)用TCA法除去提取液中的蛋白質(zhì)，可以得到較高得率的多糖粗提物，該方法簡(jiǎn)便易行，具有良好的可操作性。粗多糖純化可用離子交換層析、凝膠過(guò)濾、透析等方法可取得較好純化效果。微藻多糖的提取及分離純化第19頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日（2）微藻活性脂類

微藻的脂肪酸組成成為研究熱點(diǎn)，主要原因有：微藻是許多長(zhǎng)鏈多元不飽和脂肪酸

（polyunsaturatedfattyacids，PUFAs）的重要來(lái)源；PUFAs具有營(yíng)養(yǎng)學(xué)和醫(yī)藥學(xué)價(jià)值；脂肪酸組成和海藻系統(tǒng)分類之間存在著很大的相關(guān)性。第20頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日PUFAs的生物活性不飽和脂肪酸(PUFA)對(duì)人體具有重要的平衡調(diào)節(jié)作用，其中EPA具有降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等方面的作用，DHA具有調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能。因此PUFA可以預(yù)防和治療心血管疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，提高人體的免疫機(jī)能調(diào)節(jié)、抗衰老、提高記憶功能。最引人注目的是硫代－6－脫氧葡萄糖甘基二酰甘油(SQDG)，可以抑制HIV的復(fù)制，是一種新型抗HIV藥物，美國(guó)國(guó)家癌癥研究所已經(jīng)選擇用該種酯作為進(jìn)一步治療艾滋病的主要藥物。EPA和DHA具有預(yù)防心血管病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)的作用，對(duì)嬰幼兒營(yíng)養(yǎng)亦是必需的。第21頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日目前，PUFA的提取主要有低溫冷凍結(jié)晶法、尿素包合法、吸附分離法、分子蒸餾法、脂肪酶提取法、膜分離法以及二氧化碳超臨界萃取法等。而微藻中PUFA的提取主要是利用溶劑法、超臨界萃取以及尿素包合等方法。微藻中PUFAs的提取方法第22頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日項(xiàng)目魚(yú)油微藻PUFAs含量魚(yú)腥味膽固醇PUFAs繁殖周期價(jià)格低有高復(fù)雜長(zhǎng)貴較高沒(méi)有，可做食品添加劑沒(méi)有，可做藥用單純，相對(duì)易提純短，受環(huán)境影響小相對(duì)便宜傳統(tǒng)工業(yè)魚(yú)油與微藻中PUFAs的比較第23頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日微藻AAEPADHA金藻（Olisthodiscussp）卡氏前溝藻（Amphidiniumcarterii）隱藻(Unknowncryptomonad)紫球藻(Porphyridiumcruentum)三角褐紫藻(Phaeoaocttricornatum)中肋骨條藻(Skeletonemacostatum)神秘小球藻(Cyclotellacryptica)淡水海鏈藻(Thslassiosirafluviatilis)圓形薄鈣板藻(Syracosphaeracaoterae)單鞭金藻(Monochrysislutheri)黃藻（Chromophyta）眼點(diǎn)擬微綠球藻（Nannochloropsisoculata）黃綠等鞭金藻(Isochrysisgalbana)1.224.30.20.50.11.36.14.821.87.413.820.38.613.87.583.916.353.224.4325.40.70.81.70.92.28.613.18.919.3某些微藻中的PUFAs分布（%）第24頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日各種油脂提取方法的比較方法藻類提取物中脂肪酸的含量%提取率%EPADHAEPADHA超臨界提取法小球藻20.9841.3592.189.4索氏提取法11.8320.5975.765.7乙醇－乙烷法13.7529.7069.675.0超聲法16.6727.6087.273.1氯仿－甲醇法三角褐指藻18.863.14乙醚－石油醚法12.552.35丙酮日本小球藻20.0%第25頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日各種油脂提取方法的比較

溶劑法提取微藻中油脂具有操作簡(jiǎn)單、便于實(shí)施的特點(diǎn)。不同的溶劑提取得到的油脂種類、得率也不相同。但用到的大多數(shù)有機(jī)溶劑具有毒性，難以回收。且該法自動(dòng)化程度低，操作重現(xiàn)性也不盡如人意。尿素包合法的影響因素較多，且尿素的濃度過(guò)高形成晶體析出時(shí)，會(huì)帶出一部分不飽和脂肪酸，導(dǎo)致其丟失。利用超聲波強(qiáng)化溶劑提取過(guò)程，可縮短提取時(shí)間、提高溶劑利用率而減少溶劑用量、提高提取率。設(shè)備簡(jiǎn)便易得。但操作過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生噪音污染。第26頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日各種油脂提取方法的比較脂肪酶提取方法具有條件溫和，對(duì)環(huán)境友好的特點(diǎn)。但提取所需時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。一般需要十幾個(gè)小時(shí)。超臨界提取法具有快速、高效的特點(diǎn)。普通溶劑法需數(shù)小時(shí)方能完成萃取過(guò)程，用SFE法只需約lh即可完成。溶劑法蒸干溶劑后所得的產(chǎn)物為棕色到綠色的油狀物，具腥臭味。SFE法產(chǎn)物則具海藻香味。殘?jiān)逍誀钊軇┓ㄌ崛≡孱惡髿堅(jiān)迳珴砂档?，失去原海藻的香味。直接酯化法提取藻類后殘?jiān)鍎t呈泥狀。超臨界萃取CO2藻類后藻粉仍呈干燥的粉狀，外觀與萃取前無(wú)異狀，藻香依舊，仍可用作其他目標(biāo)的提取原料（如提取螺旋藻的藻藍(lán)蛋白等）或用作飼料。此外，由于SFE法通過(guò)對(duì)工藝條件的控制，可調(diào)節(jié)超臨界CO2對(duì)微藻所含物質(zhì)的溶解能力，因而對(duì)被萃取物有一定的選擇性萃取能力，其產(chǎn)物中EPA和DHA的含量都高于其他溶劑法。第27頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日（3）微藻活性蛋白

藻膽蛋白(Phycobiliproteins，PBP)分成三類：藻紅蛋白(Phycoerythrins，PE)。主要存在紅藻中，藻紅素主要吸收綠光，其吸收峰約在565nm，故顯紅色。藻藍(lán)蛋白(Phycocyanins，PC)。主要存在藍(lán)藻中，藻藍(lán)素主要吸收橙黃光，其吸收峰約在620nm，故顯藍(lán)色。別藻藍(lán)蛋白(Allophycocyanins，APC)。其吸收峰約在650nm。第28頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日藻膽蛋白的國(guó)內(nèi)外研究情況第29頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日（4）微藻色素微藻細(xì)胞內(nèi)色素的種類和含量因藻種的不同和環(huán)境條件的不同而有所不同，但主要含有四種基本色素，即葉綠素、葉黃素、胡蘿卜素和藻膽素（藻藍(lán)素和藻紅素），其中以葉綠素含量最多，大約為細(xì)胞干重量的1%～6%；有的微藻還含有其他色素，如血球素（Haematocodduspluvialis）中蝦青素含量特別多。在微藻合成的色素中β-胡蘿卜素、蝦青素和葉黃素是最具有開(kāi)發(fā)價(jià)值的三種色素。第30頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日各種提取β-胡蘿卜素方法得率的比較

提取方法微藻種類得率（%）柱層析法杜氏藻11超聲法提取—溶劑萃取法螺旋藻0.675微波法0.0833第31頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日β-胡蘿卜素提取方法的比較柱層析和溶劑萃取法是傳統(tǒng)的提取方法，二者提取過(guò)程大體相同，區(qū)別在于純化過(guò)程。溶劑萃取法所用萃取溶劑多為有機(jī)溶劑，具有毒性并且難以回收。柱層析法用乙醚-石油醚作為洗脫劑，其毒性較小，易于操作和工業(yè)化且產(chǎn)品純度相對(duì)較高。微波提取和超聲提取為較新的提取方法。微波提取具有高效、得率高的特點(diǎn)。但目前無(wú)法進(jìn)行大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。而超聲提取在操作過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一定的噪音污染。第32頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日

各種提取蝦青素方法得率的比較（雨生紅球藻）

提取方法得率(%)直接研磨法1.50低溫研磨法3.20勻漿法0.76凍融溫差法0.93超聲法0.96微波法1.02化學(xué)破壁法0.63第33頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日微藻中葉黃素的提取用萬(wàn)壽菊花生產(chǎn)葉黃素已實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，其葉黃素的分離提取工藝已經(jīng)成熟。但從微藻中分離提取葉黃素目前還處于實(shí)驗(yàn)室階段，研究對(duì)象主要集中在從小球藻中提取葉黃素上，關(guān)于從其它微藻中分離提取葉黃素的研究尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。目前從微藻中提取葉黃素的方法還不成熟，中試規(guī)模的分離提取也未見(jiàn)報(bào)道。究其原因可能是由以下幾方面造成的：（1）微藻的高密度大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)缺乏。很多具有相關(guān)分離提取技術(shù)的研究單位，缺乏微藻大規(guī)模培養(yǎng)的經(jīng)驗(yàn)，因此無(wú)法獲得足夠的微藻原料；（2）微藻細(xì)胞中葉黃素含量和微藻培養(yǎng)合成葉黃素的產(chǎn)率較低，因此沒(méi)有提取價(jià)值；（3）微藻細(xì)胞壁厚，分離提取存在一定困難；（4）微藻培養(yǎng)及葉黃素分離提取成本太高。因此如何有效地解決上述問(wèn)題，是今后利用微藻培養(yǎng)法生產(chǎn)葉黃素的關(guān)鍵所在。第34頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日（5）微藻抗生素類許多微藻能產(chǎn)生對(duì)其它微藻、病毒、細(xì)菌、真菌和原生動(dòng)物有毒性作用的抗微生物化合物。這些化合物大多為有機(jī)酸、脂肪酸、溴酚及其它酚類抑制劑、丹寧、類萜，多糖及醇類等。

第35頁(yè)，共40頁(yè)，2023年，2月20日，星期日（6）微藻毒素類

海洋微藻尤其是雙鞭甲藻和藍(lán)藻，能產(chǎn)生各種毒素，這些毒素很有希望開(kāi)發(fā)成為有用的醫(yī)藥