無菌制劑成品密封系統(tǒng)完好性驗(yàn)證

無菌制劑成品密封系統(tǒng)完好性驗(yàn)證第1頁/共30頁主要內(nèi)容定義和目的適用范圍試驗(yàn)方法結(jié)果評(píng)價(jià)貯存穩(wěn)定性惡劣條件下的成品密封性驗(yàn)證生產(chǎn)中的在線檢漏第2頁/共30頁一、概述微生物侵入試驗(yàn)是對(duì)最終滅菌容器的密封件系統(tǒng)完好性的挑戰(zhàn)性試驗(yàn)。目的是考察并確認(rèn)容器密封系統(tǒng)的完好性。第3頁/共30頁二、適用范圍本驗(yàn)證適用于無菌制劑生產(chǎn)中使用的輸液瓶、西林瓶等需用多組件完成密封的容器完好性測試。第4頁/共30頁三、試驗(yàn)方法在驗(yàn)證試驗(yàn)中，取輸液瓶或西林瓶，灌入培養(yǎng)基，在正常生產(chǎn)線上壓塞、壓蓋滅菌。此后，將容器密封面浸入高濃度運(yùn)動(dòng)性菌液中，取出、培養(yǎng)并檢查是否有微生物侵入。第5頁/共30頁（一）試驗(yàn)樣品的制備1.在生產(chǎn)線上取足夠量的容器，灌裝SCDM/2（大豆胰蛋白胨肉湯）培養(yǎng)基，使用自動(dòng)壓塞和壓蓋設(shè)備將容器密封；2.將灌裝后的容器經(jīng)最長滅菌程序滅菌。121℃、30′；第6頁/共30頁3.取出、放冷，將每一試樣倒轉(zhuǎn)，使培養(yǎng)基與瓶口充分接觸，在30～35℃下倒置培養(yǎng)14天;4.選50個(gè)試樣小心去除鋁蓋,注意不要破壞其密封口。將去鋁蓋時(shí)不慎損壞窗口密封性的所有試樣剔除。按上述3中要求培養(yǎng)樣品。在培養(yǎng)期內(nèi)，當(dāng)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)任何帶蓋試樣長菌時(shí),則試驗(yàn)無效,須棄去全部試樣，重新從頭開始試驗(yàn)。

第7頁/共30頁（二）確認(rèn)培養(yǎng)基促菌生長能力—營養(yǎng)性試驗(yàn)1.接種所有試樣培養(yǎng)14天均不長菌時(shí)，隨機(jī)取20個(gè)帶蓋試樣每個(gè)試樣內(nèi)接種0.1ml的銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）ATCC9027,菌液濃度10～100CFU/0.1ml。試驗(yàn)菌選擇原則：（1）所選菌種的體積大小，越小越好。（2）運(yùn)動(dòng)能力強(qiáng)。（3）適宜的培養(yǎng)基。第8頁/共30頁2.培養(yǎng)在30～35℃下培養(yǎng)7天，或培養(yǎng)至所有試樣都呈陽性結(jié)果。第9頁/共30頁3.判定若7天內(nèi)，所有接種銅綠假單胞菌的試樣中，微生物生長良好，則容器內(nèi)培養(yǎng)基的促菌生長能力可判為合格。使用革蘭染色和紫外燈下肉湯呈藍(lán)綠色熒光的性質(zhì)，來鑒定并確認(rèn)試樣容器內(nèi)生長的菌為接入的銅綠假單胞菌。第10頁/共30頁（三）挑戰(zhàn)菌懸浮液的制備1.從銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)ATCC9027的新鮮斜面上取一整環(huán)培養(yǎng)物，分別接入含lOml無菌培養(yǎng)基的試管中，在30～35℃下培養(yǎng)16～18h。2.將每管的培養(yǎng)物分別轉(zhuǎn)入含1000ml相同培養(yǎng)基(SCDM／2)的容器內(nèi)，于30～35℃下培養(yǎng)22～24h。在培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，能明顯見容器內(nèi)培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁。3.培養(yǎng)結(jié)束后的菌懸液即可用來作容器／密封系統(tǒng)完好性試驗(yàn)。第11頁/共30頁（四）微生物侵入試驗(yàn)操作步驟本試驗(yàn)須在生物安全柜內(nèi)或其他不影響生產(chǎn)環(huán)境的地方進(jìn)行。1.將新鮮的銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)ATCC9027

的菌懸液倒入合適的盆中，用金屬絲架固定試樣容器，使試倒置在菌懸液中。2.將50個(gè)經(jīng)最長滅菌程序滅菌的試樣倒置，并浸入菌懸液中。該組試樣為A組。試樣容器內(nèi)的無菌培養(yǎng)基應(yīng)充分接觸封口內(nèi)表面，樣品的頸部及封口的外表面應(yīng)完全浸泡在菌懸液中，見圖4－54。第12頁/共30頁3.同時(shí)將25個(gè)去鋁蓋的試樣容器倒置入菌懸液中，

該組試樣為B組。第13頁/共30頁4.實(shí)驗(yàn)開始時(shí)取一份菌懸液，平板計(jì)數(shù)每毫升所含的活菌數(shù)。按2.3.1確認(rèn)試驗(yàn)用微生物是銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)。5.將A組和B組試樣容器在菌懸液中持續(xù)浸泡約4h。6.浸泡結(jié)束時(shí)，再用平板計(jì)數(shù)菌懸液的濃度。第14頁/共30頁7.從菌懸液中取出試樣，擦干試樣容器外殘余的菌懸液，然后用含0.5％過乙酸的70％異丙醇消毒容器外表面。8.取裝滿培養(yǎng)基有鋁蓋和去鋁蓋的樣品各兩個(gè)，作陽性對(duì)照。陽性對(duì)照用樣品制備方法同試樣，但不經(jīng)菌懸液浸泡，其外表用含0.5％過乙酸的70％異丙醇消毒。此后，接種入10～I(xiàn)00CFU銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)ATCC9027，按步驟2進(jìn)行培養(yǎng)基的營養(yǎng)試驗(yàn)。第15頁/共30頁9.將消毒后的容器放在塑料袋中，置30～35℃培養(yǎng)7天。操作中應(yīng)特別注意不要損壞B組無鋁蓋試樣膠塞的密封性。10.挑戰(zhàn)試驗(yàn)用菌懸液經(jīng)滅菌后丟棄。第16頁/共30頁11.將挑戰(zhàn)試驗(yàn)用的試樣培養(yǎng)7天，觀察檢查試樣容器內(nèi)培養(yǎng)基中微生物的生長情況。（1）對(duì)每一試樣進(jìn)行觀察檢查，有生長記作+，無生長計(jì)作－。（2）如果試樣容器長菌，按2.3.1方法確認(rèn)生長菌是挑戰(zhàn)微生物——銅綠假單胞菌。（3）如果所有容器都不長菌，則從浸過菌懸液的A組取10個(gè)試樣，B組5個(gè)試樣，分別按2．進(jìn)行培養(yǎng)基的營養(yǎng)檢查。第17頁/共30頁四、結(jié)果評(píng)價(jià)（一）步驟三.（二）.2、步驟三.（四）.8、步驟三.（四）.11.（3）中進(jìn)行的營養(yǎng)試驗(yàn)都合格，試樣的挑戰(zhàn)試驗(yàn)才有效。（二）在挑戰(zhàn)試驗(yàn)開始時(shí)，挑戰(zhàn)用菌懸液濃度(活菌數(shù))必須達(dá)到1×106CFU/ml。第18頁/共30頁（三）挑戰(zhàn)試驗(yàn)中A組和B組如有長菌，需記錄長菌的試樣數(shù)。在A組中如出現(xiàn)長菌試驗(yàn)，則需按下述要求作進(jìn)一步調(diào)查。1.仔細(xì)去除微生物生長的容器的蓋和塞，檢查容器封口是否有缺損，造成微生物侵入。2.將觀察到試樣容器封口的缺陷，采用拍照或及其他適當(dāng)詳細(xì)記錄。3.如果任何挑戰(zhàn)試驗(yàn)中長菌的容器不是由于容器封口明顯的物理性缺損所致，容器／密封系統(tǒng)挑戰(zhàn)試驗(yàn)作失敗論處。第19頁/共30頁五、貯存穩(wěn)定性1.將剩余未經(jīng)過挑戰(zhàn)試驗(yàn)的容器放入箱中，保存在室溫，黑暗處。2.在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔(如12個(gè)月、24個(gè)月、36個(gè)月等)取出一些容器，重復(fù)挑戰(zhàn)試驗(yàn)。第20頁/共30頁六、惡劣條件下的成品密封性驗(yàn)證（一）高溫高濕儲(chǔ)存將足夠量的試樣倒置放入恒溫恒濕儀，設(shè)定溫度33～35℃，相對(duì)濕度90%～95%，分別于7天、14天、21天、28天、42天、56天、90天各取20瓶/支，按前述三.（四）步驟進(jìn)行微生物侵入試驗(yàn)。第21頁/共30頁（二）長途運(yùn)輸為考察長途運(yùn)輸?shù)姆绞?、途?jīng)環(huán)境和運(yùn)輸時(shí)間對(duì)容器密封性的影響，可以考慮將培養(yǎng)基試樣隨成品一同運(yùn)輸，返回后，按照三.（一）.3和4的方法進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)期內(nèi)，當(dāng)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)任何試樣長菌時(shí)，可判定長途運(yùn)輸對(duì)密封性產(chǎn)生不良影響，應(yīng)查找具體原因，采取措施改進(jìn)密封系統(tǒng)、包裝方式或運(yùn)輸方式，對(duì)改進(jìn)后的措施反復(fù)驗(yàn)證，直至證明措施有效，從而保證產(chǎn)品質(zhì)量。在培養(yǎng)期內(nèi)，未發(fā)現(xiàn)試樣長菌，可進(jìn)行微生物侵入試驗(yàn)，以進(jìn)一步考察和評(píng)價(jià)運(yùn)輸對(duì)密封性的影響。第22頁/共30頁（三）加壓、減壓法在進(jìn)行微生物侵入試驗(yàn)時(shí)，可采用加壓或減壓裝置，通過加壓或減壓操作，增加菌液侵入容器的幾率，在最差條件下進(jìn)行驗(yàn)證，以證實(shí)密封件及其連接方式、索蓋等設(shè)備和操作能夠充分滿足最差條件下的容器密封要求。第23頁/共30頁1.加壓法當(dāng)容器倒置于菌懸液中，對(duì)菌懸液適當(dāng)加壓，如容器密封性較差，按前述步驟操作后，培養(yǎng)結(jié)果應(yīng)為陽性。第24頁/共30頁2．減壓法容器正立放置于減壓裝置內(nèi)，進(jìn)行減壓操作，達(dá)到規(guī)定壓力后保持適當(dāng)時(shí)間，在負(fù)壓狀態(tài)下抽入菌懸液，沒過容器后逐漸恢復(fù)常壓。如容器密封性較差，按前述步驟操作后，培養(yǎng)結(jié)果應(yīng)為陽性。第25頁/共30頁七、生產(chǎn)中的在線檢漏（一）適用范圍適用于采用滅菌柜進(jìn)行滅菌操作的安瓿、輸液瓶或袋的無菌制劑。第26頁/共30頁（二）檢漏方法1.色水法將滅菌柜腔體內(nèi)抽至一定的真空，形成負(fù)壓，通入色水，恢復(fù)常壓，藥品出箱后，逐支進(jìn)行人工和機(jī)器燈檢，如藥品顏色異常，則為泄露，予以剔除。中藥注射劑多為淺黃色至棕紅色，所以不宜選擇暖色的染料調(diào)制色水，多使用藍(lán)色等冷色調(diào)的染料調(diào)制色水。對(duì)于顏色較深的中藥注射劑也有不使用色水，而直接使用純化水充當(dāng)色水的做法，操作與前述一致，如果藥品顏色變淺，則說明泄露，予以剔除。第27頁/共30頁2．抽真空法

將藥品倒置裝入滅菌柜，滅菌后將腔體抽真空至一定程度，保持一定時(shí)間的負(fù)壓，取出藥品，逐支進(jìn)行人工和機(jī)器燈檢，如裝量減少，則說明泄露，予以剔除。第28頁/共30