生殖細(xì)胞培養(yǎng)

生殖細(xì)胞培養(yǎng)第1頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第2頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第八章生殖細(xì)胞培養(yǎng)第一節(jié)花藥和花粉的培養(yǎng)第二節(jié)子房胚珠的培養(yǎng)第三節(jié)離體受精第四節(jié)胚培養(yǎng)第五節(jié)胚乳培養(yǎng)第3頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第一節(jié)花藥與花粉培養(yǎng)第4頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第一節(jié)花藥和花粉的培養(yǎng)1.花藥培養(yǎng)和單倍體育種2花藥培養(yǎng)技術(shù)3單倍體植株的二倍化第5頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一1.花藥培養(yǎng)和單倍體育種

單倍體細(xì)胞(haploidcell)：植物的花粉是花粉母細(xì)胞經(jīng)減數(shù)分裂形成的，其染色體數(shù)目只有體細(xì)胞的一半。花粉和花藥的培養(yǎng)(pollenandantherculture)是指花粉在培養(yǎng)基上改變其正常發(fā)育和機(jī)能，不經(jīng)受精而發(fā)生細(xì)胞分裂，由單個(gè)花粉粒發(fā)育成完整植株的技術(shù)。單倍體植物(haplobiont)：用離體培養(yǎng)花藥的方法使花粉發(fā)育成一個(gè)完整的植株。第6頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第一節(jié)花藥和花粉的培養(yǎng)1.花藥培養(yǎng)和單倍體育種2花藥培養(yǎng)技術(shù)3單倍體植株的二倍化第7頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一花藥培養(yǎng)是將花粉發(fā)育至一定階段的花藥接種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進(jìn)而分化成植株的技術(shù)。第8頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一花粉培養(yǎng)：是將花粉從花藥中分離出來進(jìn)行離體培養(yǎng)的過程。油菜成熟花藥的結(jié)構(gòu)花粉囊花粉囊壁成熟花粉粒第9頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.1花粉和花藥培養(yǎng)的基本程序2.2影響花藥誘導(dǎo)頻率的因素2.3產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑

2花藥培養(yǎng)技術(shù)第10頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.1花粉和花藥培養(yǎng)的基本程序外植體花蕾預(yù)處理外植體消毒剝?nèi)』ㄋ幗臃N誘導(dǎo)培養(yǎng)分化培養(yǎng)2花藥培養(yǎng)技術(shù)第11頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一1）預(yù)處理:低溫冷藏是最常用的方法2）表面消毒3）接種4）培養(yǎng)形成花粉植株。

花粉---愈傷組織---苗花粉---胚狀體---苗

2.1.1花藥培養(yǎng)過程：第12頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一

花藥培養(yǎng)方法---水稻旗葉鞘用70％酒精擦洗一遍剝?nèi)テ烊~鞘取出稻穗10％漂白粉10min無菌水洗一次。70％酒精手洗兩遍培養(yǎng)5天后，花藥變黑褐色，20天花藥裂開，長出淡黃色的花粉愈傷組織，先形成芽，后長出根，形成幼苗。用接種環(huán)接種到培養(yǎng)基上左手持穗，右手用鑷子取出花藥至無菌培養(yǎng)皿中第13頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一花藥培養(yǎng)脫毒1974年日本：花藥培養(yǎng)可以脫除草莓病毒；花藥采取時(shí)期單核期：花蕾4-6mm，花藥1mm花藥誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+蔗糖30g+瓊脂7g/L增殖分化培養(yǎng)基MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+蔗糖30g+瓊脂7g/L生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.2mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g+瓊脂7g/L第14頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一草莓花藥愈傷組織,再生植株,花藥植株第15頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.1.2花粉培養(yǎng)花粉培養(yǎng)成苗途徑與花藥培養(yǎng)比較:相同點(diǎn)：胚狀體成苗途徑、愈傷組織再分化成苗途徑不同點(diǎn)：花粉培養(yǎng)：

需進(jìn)行花粉的分離特殊的花粉誘導(dǎo)培養(yǎng)第16頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一花粉培養(yǎng)過程取花蕾（鏡檢）預(yù)培養(yǎng)數(shù)天取花藥消毒分離花粉接種培養(yǎng)愈傷組織發(fā)生第17頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一注意：操作過程中注意不要損傷花藥，不要直接夾花藥，若受損傷，則應(yīng)淘汰，因?yàn)閾p傷常常會(huì)刺激花粉壁形成二倍體的愈傷組織。第18頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.1花粉和花藥培養(yǎng)的基本程序2.2影響花藥誘導(dǎo)頻率的因素2.2.1材料的來源2.2.2花粉發(fā)育階段的選擇2.2.3花藥供體植株的生長條件2.2.4培養(yǎng)基2.2.5低溫預(yù)處理2.3產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑2花藥培養(yǎng)技術(shù)第19頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.2.1材料的來源大田材料比溫室的好，因?yàn)榇筇锷L的材料一般生長比較健壯，發(fā)育好。光強(qiáng)和日照時(shí)數(shù)也會(huì)影響花藥培養(yǎng)效率。2.2影響花藥誘導(dǎo)頻率的因素第20頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.2.2花粉發(fā)育階段的選擇選取花粉處于合適發(fā)育期的花藥，以便離體培養(yǎng)后能啟動(dòng)花粉發(fā)育。第21頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第22頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第23頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一花粉發(fā)育時(shí)期：適宜時(shí)期：單核期,尤其是單核中、晚期(單核靠邊期)營養(yǎng)細(xì)胞生殖細(xì)胞精子第24頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一花粉發(fā)育時(shí)期的檢測：外部形態(tài)觀察：在水稻中，一般葉枕距為5-15cm，穎片淡黃綠色、雄蕊長度接近穎片長度的1/2時(shí)，可能為單核靠邊期的花粉。壓片染色法：是檢測花粉發(fā)育時(shí)期的簡便有效方法，常用染色劑為醋酸洋紅。第25頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一花粉發(fā)育時(shí)期培養(yǎng)花藥數(shù)胚狀體（%）單核早期單核靠邊（中）單核靠邊（晚）雙核早雙核晚157721633007.819.41.590煙草花粉發(fā)育時(shí)期對胚狀體誘導(dǎo)率的影響第26頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一煙草花藥培養(yǎng)的最適取樣期：花粉為單核期的花蕾，此時(shí)花蕾的花冠與萼片等長。蘆筍花藥培養(yǎng)的最適取樣期也是單核期的花粉，花蕾長為2-2.5mm。鏡檢確定花粉的發(fā)育時(shí)期：用醋酸洋紅或碘化鉀染色，壓片鏡檢，找出花粉發(fā)育時(shí)期與花蕾或幼穗大小、顏色等特征之間的相應(yīng)關(guān)系?；ǚ郯l(fā)育的適宜階段因植物不同而不同。第27頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.1花粉和花藥培養(yǎng)的基本程序2.2影響花藥誘導(dǎo)頻率的因素2.2.1材料的來源2.2.2花粉發(fā)育階段的選擇2.2.3花藥供體植株的生長條件2.2.4培養(yǎng)基2.2.5低溫預(yù)處理2.3產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑2花藥培養(yǎng)技術(shù)第28頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一

2.2.3花藥供體植株的生長條件選取主穗（一級(jí)側(cè)枝）的花蕾，發(fā)育良好，數(shù)量大，發(fā)育同步。水稻、小麥、大麥等禾本科植物，主莖穗比分蘗穗花藥愈傷組織的誘導(dǎo)率明顯地提高，同步化程度高。第29頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.2.4培養(yǎng)基

（1）基本培養(yǎng)基：MS和H培養(yǎng)基：適合雙子葉植物花藥培養(yǎng)；B5培養(yǎng)基：適合豆科和十字花科花藥培養(yǎng)；N6培養(yǎng)基：適合禾谷類作物的花藥培養(yǎng)。我國科學(xué)工作者對水稻、小麥的花藥培養(yǎng)基做了改進(jìn)，研制出N6培養(yǎng)基。在N6培養(yǎng)基上，水稻花粉的出愈率大幅度提高。N6特點(diǎn)：銨離子濃度較低。第30頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2）激素種類和濃度

細(xì)胞分裂素可促進(jìn)胚狀體形成；

生長素可誘導(dǎo)愈傷組織形成。

細(xì)胞分裂素與生長素比值高時(shí)可誘導(dǎo)愈傷組織分化苗第31頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一激素種類和濃度禾本科植物中，常用1-5mg/L2,4-D或NAA誘導(dǎo)花粉愈傷組織形成，再將愈傷組織轉(zhuǎn)移至降低或去除生長素或補(bǔ)加細(xì)胞分裂素類物質(zhì)的分化培養(yǎng)基上，以誘導(dǎo)器官分化和再生植株形成。第32頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一3)糖煙草的最適蔗糖濃度為3％，水稻為3％-6％，玉米則為12％-15％。4）活性炭較高濃度蔗糖可誘導(dǎo)花粉形成愈傷組織；較低濃度蔗糖可使愈傷組織分化成苗。第33頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一

培養(yǎng)的條件：光照(12~18h，5,000~10,000lx，28℃)黑暗(12-16h，22℃)周期交替進(jìn)行。第34頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.1花粉和花藥培養(yǎng)的基本程序2.2影響花藥誘導(dǎo)頻率的因素2.2.1材料的來源2.2.2花粉發(fā)育階段的選擇2.2.3花藥供體植株的生長條件2.2.4培養(yǎng)基2.2.5低溫預(yù)處理2.3產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑2花藥培養(yǎng)技術(shù)第35頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一處理天數(shù)接種花藥（枚）發(fā)生愈傷組織的花藥發(fā)生胚狀體的花藥枚%枚%對照51015202584872390284647043458918530.591.111.002.131.060.69812155230.941.661.660.590.430.69低溫（3℃）處理對四季橘花藥愈傷組織和胚狀體形成的影響2.2.5低溫預(yù)處理第36頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第37頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.1花粉和花藥培養(yǎng)的基本程序2.2影響花藥誘導(dǎo)頻率的因素2.3產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑2花藥培養(yǎng)技術(shù)第38頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.3產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑花粉花粉胚狀體愈傷組織從芽從芽生根移栽脫分化分化再分化誘導(dǎo)第39頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第40頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第一節(jié)花藥和花粉的培養(yǎng)1.花藥培養(yǎng)和單倍體育種2花藥培養(yǎng)技術(shù)3單倍體植株的二倍化3.1自發(fā)加倍3.2人工加倍3.3從愈傷組織再生第41頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一3單倍體植株的二倍化3.1自發(fā)加倍

自發(fā)加倍的頻率在不同的植株上不同。煙草自發(fā)加倍的頻率低，約1%～2%。水稻自然加倍的頻率高達(dá)70%以上。優(yōu)點(diǎn)：不會(huì)出現(xiàn)核畸變，缺點(diǎn)：加倍頻率極低；第42頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一3.2人工加倍用秋水仙堿處理單倍體可使加倍頻率提高。較大濃度的秋水仙素溶液處理單倍體植株，時(shí)間為24-96h。浸泡試管苗方法、處理芽方法、浸根方法第43頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一3.3從愈傷組織再生把單倍體植株的莖、葉柄或根的節(jié)段，誘導(dǎo)形成愈傷組織，把這種愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，在再生植株中將出現(xiàn)許多二倍體植株。第44頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一4花藥和花粉培養(yǎng)的應(yīng)用

----單倍體植株育種

單倍體植物的特點(diǎn):A、體細(xì)胞染色體數(shù)減半；B、生長發(fā)育弱，體形小，各器官明顯減?。籆、雌雄配子嚴(yán)重?cái)∮?，有的甚至不能進(jìn)入有性世代。第45頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一單倍體植物的優(yōu)點(diǎn):1）利于得到純合體——單倍體加倍、后代形狀一致，利于加快純合的二倍體的篩選時(shí)間。2）直接從雜交的優(yōu)良品系的花粉培養(yǎng)篩選，減少優(yōu)良品系篩選時(shí)間3）有利于篩選隱性突變體，提高選擇效率。4）獲得無病毒個(gè)體。第46頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第八章生殖細(xì)胞培養(yǎng)第一節(jié)花藥和花粉的培養(yǎng)第二節(jié)子房和胚珠的培養(yǎng)第三節(jié)離體受精第四節(jié)胚培養(yǎng)第五節(jié)胚乳培養(yǎng)第47頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第二節(jié)子房胚珠的培養(yǎng)1子房培養(yǎng)2胚珠培養(yǎng)3影響子房和胚珠培養(yǎng)的因素4子房胚珠的培養(yǎng)應(yīng)用第48頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一子房壁果皮珠被種皮胚乳胚受精極核受精卵種子果實(shí)子房的結(jié)構(gòu)第49頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一雌蕊與子房的類型第50頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一1子房培養(yǎng)定義：子房培養(yǎng)是指將子房從母體上分離出來，在無菌的人工環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長發(fā)育形成幼苗的過程。類型授粉子房的培養(yǎng)未授粉子房的培養(yǎng)第51頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一（1）子房培養(yǎng)的培養(yǎng)過程1)制備外植體：在開花前后適宜時(shí)期取子房或幼花，消毒2)子房培養(yǎng)：固體或液體培養(yǎng)均可（2）培養(yǎng)基:N6,MS第52頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一性細(xì)胞（卵細(xì)胞、助細(xì)胞、極核、反足細(xì)胞）----胚狀體或愈傷組織----單倍體植株；體細(xì)胞（珠被、子房壁）---胚狀體或愈傷組織----二倍體植株；（3）培養(yǎng)子房的發(fā)育：第53頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第二節(jié)子房胚珠的培養(yǎng)1子房培養(yǎng)2胚珠培養(yǎng)3影響子房和胚珠培養(yǎng)的因素4子房胚珠的培養(yǎng)應(yīng)用第54頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一定義：是指將胚珠從母體上分離出來，在無菌的人工環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長發(fā)育形成幼苗的過程。倒生胚珠2胚珠培養(yǎng)第55頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一胚珠培養(yǎng)類型：1)受精胚珠的培養(yǎng)2)未受精胚珠的培養(yǎng)示胚珠的位置第56頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一（2）培養(yǎng)基：White,Nitsch,MS（3）胚珠的發(fā)育：A受精胚珠：一是形成種子；二是形成愈傷組織B未受精胚珠：形成單倍體植株。（1）胚珠培養(yǎng)的基本過程：第57頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第二節(jié)子房胚珠的培養(yǎng)1子房培養(yǎng)2胚珠培養(yǎng)3影響子房和胚珠培養(yǎng)的因素4子房胚珠的培養(yǎng)應(yīng)用第58頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一3影響子房和胚珠培養(yǎng)的因素3.1基因型---品種間的差異3.2生理狀態(tài)---決定于環(huán)境狀態(tài)溫度、光強(qiáng)、日長、植物營養(yǎng)狀況、環(huán)境脅迫等。

3.3胚囊發(fā)育時(shí)期：以八核胚囊和成熟胚囊期的子房培養(yǎng)具有較高的誘導(dǎo)頻率。第59頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一3.4培養(yǎng)基

（1）基本培養(yǎng)基不同培養(yǎng)基對于子房培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織的誘導(dǎo)率有直接影響，常用培養(yǎng)基是N6、BN、MS，禾本科作物以N6培養(yǎng)基較常用，其它植物則多用MS和BN。第60頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一（2）植物激素的影響

未授粉的子房培養(yǎng)必須加入適宜種類和濃度的植物激素

百合未授粉子房培養(yǎng)2,4-D單獨(dú)使用誘導(dǎo)頻率為18.87%2,4-D＋6-BA誘導(dǎo)頻率為33.73%2,4-D＋KT誘導(dǎo)頻率為47.76%第61頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一（3）蔗糖濃度

蔗糖濃度多在3～10％之間，不同植物材料而異，誘導(dǎo)培養(yǎng)階段蔗糖濃度高，分化培養(yǎng)時(shí)蔗糖濃度低。第62頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一3.5接種方式

極性；營養(yǎng)吸收花柄直插比平放效果好第63頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第二節(jié)子房胚珠的培養(yǎng)1子房培養(yǎng)2胚珠培養(yǎng)3影響子房和胚珠培養(yǎng)的因素4子房胚珠的培養(yǎng)應(yīng)用第64頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一4子房胚珠的培養(yǎng)應(yīng)用挽救雜種胚，促進(jìn)原胚繼續(xù)生長，使雜種幼胚發(fā)育成熟；成功：四季桔、柑、鳳仙花、洋蔥成功的植物：西葫蘆、萵苣、百合等未授粉胚珠和子房，誘導(dǎo)孤雌生殖，產(chǎn)生雌性單倍體第65頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第八章生殖細(xì)胞培養(yǎng)第一節(jié)花藥和花粉的培養(yǎng)第二節(jié)子房胚珠的培養(yǎng)第三節(jié)離體受精第四節(jié)胚培養(yǎng)第五節(jié)胚乳培養(yǎng)第66頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第三節(jié)離體受精1離體受精(invitrofertilization)

從花粉萌發(fā)到受精形成種子，從種子萌發(fā)到幼苗形成的整個(gè)過程，均在試管內(nèi)完成，稱為離體受精，或試管受精。

第67頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一離體受精的意義離體受精技術(shù)在克服自交不親和性與遠(yuǎn)緣雜交障礙，特別是克服花粉在柱頭上不萌發(fā)或萌發(fā)后不能進(jìn)入花柱，或在花柱中生長緩慢，使配子不能如期融合方面有著極其重要的意義。另外，試管受精技術(shù)也為外源特異基因的有性轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)遺傳變異開辟了一條新途徑。

第68頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2離體受精的方法2.1收集花粉

參照花粉培養(yǎng)2.2剝?nèi)∽臃炕蚺咧樽瞿副镜幕ɡ僭陂_花前數(shù)天去雄并套袋，開花前一天取花蕾進(jìn)行常規(guī)表面消毒，在無菌條件下剝?nèi)∨咧椋◣プ虿粠プ┗蜃臃颗囵B(yǎng)。第69頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.3離體受精2.3.1子房試管受粉

人工方法把花粉直接引入子房，使花粉粒在子房腔內(nèi)萌發(fā)并完成受精過程。①直接引入法：把花粉懸浮液直接滴入子房切口后進(jìn)行培養(yǎng)。②注射法：無菌注射器吸取花粉懸浮液，接種于培養(yǎng)基上。第70頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.3.2胚珠試管受粉胚珠剝離后可以從胎座上切下單個(gè)胚珠授粉，也可將帶著完整胎座或部分胎座的胚珠接種到培養(yǎng)基上，并撒播花粉。第71頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.3.3精卵細(xì)胞融合法分離精子細(xì)胞：滲透壓沖擊法、酶解法、擠壓研磨法等；分離卵細(xì)胞：酶解法、解剖法等精卵融合：電融合法、PEG法等第72頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一3影晌離體授粉的因素外植體的發(fā)育階段花粉粒數(shù)量及萌發(fā)力培養(yǎng)基授粉方式和接種方式保留母體組織的影響

第73頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第八章生殖細(xì)胞培養(yǎng)第一節(jié)花藥和花粉的培養(yǎng)第二節(jié)子房胚珠的培養(yǎng)第三節(jié)離體受精第四節(jié)胚培養(yǎng)第五節(jié)胚乳培養(yǎng)第74頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第四節(jié)胚培養(yǎng)1胚培養(yǎng)2植物胚培養(yǎng)的類型3離體胚培養(yǎng)的發(fā)育途徑4胚培養(yǎng)的應(yīng)用第75頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一1含義胚培養(yǎng)：采用人工的方法將胚從種子、子房或胚珠中分離出來，再放在無菌的條件下，讓其進(jìn)一步生長發(fā)育，以至形成幼苗的過程。第四節(jié)胚培養(yǎng)第76頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一

胚培養(yǎng)的意義用于胚的挽救，促使發(fā)育不良或中途敗育的胚發(fā)育成熟打破種子休眠,搶救儲(chǔ)藏過久或儲(chǔ)藏不當(dāng)?shù)姆N子?？朔樾呐叩母蓴_

(多胚性植物－柑橘、芒果、蒲桃、仙人掌）誘導(dǎo)胚狀體及胚性愈傷組織

種子生活力的快速測定

第77頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第四節(jié)胚培養(yǎng)1胚培養(yǎng)2植物胚培養(yǎng)的類型3離體胚培養(yǎng)的發(fā)育途徑4胚培養(yǎng)的應(yīng)用第78頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2植物胚培養(yǎng)的類型即成熟胚的培養(yǎng)和幼胚的培養(yǎng)。成熟胚：一般是指子葉期后至發(fā)育完全的胚，較易成功。幼胚：是指子葉期以前的具胚結(jié)構(gòu)的幼小胚，培養(yǎng)技術(shù)難度較成熟胚大。第79頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.1成熟胚的培養(yǎng)（1）材料的消毒與接種健壯優(yōu)良的個(gè)體自交種或雜交種子，常規(guī)消毒滅菌，剝離胚。（2）培養(yǎng)基大量元素和微量的無機(jī)鹽為基本成分谷氨酰胺作為氮源，可以促進(jìn)胚生長植物天然浸提物（YE）促進(jìn)胚生長硫氨素促進(jìn)胚根的伸長生長素低濃度促進(jìn)胚的發(fā)育（胚根）赤霉素促進(jìn)有后熟作用的種子萌發(fā)（3）培養(yǎng)條件pH一般為5.2~6.312小時(shí)光照和25℃

，熱帶蘭花雜交種胚30℃附加成分第80頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一（4）成熟胚培養(yǎng)過程---以玉米成熟胚培養(yǎng)為例1）玉米種子消毒2）在黑暗條件下，將種子放在無菌濕潤的含濾紙的培養(yǎng)皿中培育6hr。3）將吸漲的種子在無菌培養(yǎng)皿內(nèi)將胚分離出來4）無菌水沖洗3次5）在MS培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)。6）觀察：2d出現(xiàn)胚根，3-4d出現(xiàn)胚芽，10d長成幼苗玉米成熟胚的培養(yǎng)第81頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一2.2原胚(幼胚)的培養(yǎng)（1）

培養(yǎng)方法

①取材取材時(shí)期多為球形胚至魚雷形胚②幼胚剝離一定要注意保濕，且操作要迅速。胚剝離時(shí)應(yīng)帶胚柄，胚柄促進(jìn)幼胚離體生長。③培養(yǎng)條件的控制剝離出來的幼胚要立即接種到培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。第82頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一取子房常規(guī)表面消毒解剖鏡下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。固體培養(yǎng)（2）幼胚培養(yǎng)過程：第83頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一1)無機(jī)氮：2)滲透壓：3)復(fù)雜的天然提取物：4)活性炭：包括硝酸鹽、亞硝酸鹽或銨鹽；蔗糖，8%-10%，不同發(fā)育期，滲透壓不一樣，初期高。因?yàn)樽匀粭l件下，原胚被一層高滲液體包圍著椰乳有促進(jìn)幼胚生長和分化的作用吸附有毒物質(zhì)（3）

原胚培養(yǎng)的條件第84頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一5)環(huán)境條件

對于幼胚培養(yǎng)，初期弱光和黑暗更適宜，6)培養(yǎng)材料

植物培養(yǎng)材料的基因型和胚發(fā)育程度對離體胚培養(yǎng)有重要影響。第85頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一7)有利幼胚培養(yǎng)的因素胚乳看護(hù)培養(yǎng):利于原胚的生長有明顯的促進(jìn)作用。胚柄的存在對于幼胚的存活至關(guān)重要：胚柄促進(jìn)生長的活性，而且保留胚柄減少對胚的直接損失。第86頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第四節(jié)胚培養(yǎng)1胚培養(yǎng)2植物胚培養(yǎng)的類型3離體胚培養(yǎng)的發(fā)育途徑4胚培養(yǎng)的應(yīng)用第87頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一3離體胚培養(yǎng)的發(fā)育途徑按正常胚胎發(fā)育途徑形成植株脫分化形成愈傷組織胚“早熟萌發(fā)”第88頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一成熟胚未成熟胚維持胚的生長，進(jìn)行正常的胚胎發(fā)育成熟，完成胚胎發(fā)育的全過程。正常發(fā)育形成小苗3.1按正常胚胎發(fā)育途徑形成植株第89頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一3.2脫分化形成愈傷組織離體胚小植株愈傷組織激素濃度高胚狀體或不定芽分化培養(yǎng)基第90頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一3.3胚“早熟萌發(fā)”畸形苗發(fā)育不正常而死未成熟幼胚分離變異體離體的幼胚在培養(yǎng)基上不能長出成熟胚的各種結(jié)構(gòu)，越過正常胚胎發(fā)生過程中的若干階段，直接長成幼苗。第91頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第四節(jié)胚培養(yǎng)1胚培養(yǎng)2植物胚培養(yǎng)的類型3離體胚培養(yǎng)的發(fā)育途徑4胚培養(yǎng)的應(yīng)用第92頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一4胚培養(yǎng)的應(yīng)用1)在遠(yuǎn)緣雜交育種中：克服雜種胚不能正常發(fā)育2)克服珠心胚的干擾，提高育種效率3)縮短育種周期4)測定休眠種子的萌發(fā)率5)理論研究中的應(yīng)用第93頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第八章生殖細(xì)胞培養(yǎng)第一節(jié)花藥和花粉的培養(yǎng)第二節(jié)子房胚珠的培養(yǎng)第三節(jié)離體受精第四節(jié)胚培養(yǎng)第五節(jié)胚乳培養(yǎng)第94頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第五節(jié)胚乳培養(yǎng)1胚乳培養(yǎng)2胚乳培養(yǎng)過程3影響胚乳培養(yǎng)的因素4胚乳再生植株的染色體倍性變異5胚乳培養(yǎng)的應(yīng)用第95頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一

胚乳：X＝3（2♀極核＋1♂精子）是營養(yǎng)組織，影響胚的發(fā)育。有些植物在胚發(fā)育過程中把胚乳消耗盡（豆科和葫蘆科）有些植物，胚乳在成熟種子中存在，貯存大量營養(yǎng)物質(zhì)（禾谷類，椰子，咖啡）第五節(jié)胚乳培養(yǎng)第96頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一1.胚乳培養(yǎng)：將胚乳從母體上分離出來，放在無菌的人工環(huán)境條件下，讓其進(jìn)一步生長發(fā)育，以至形成幼苗的過程。第97頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一胚乳培養(yǎng)的意義胚乳培養(yǎng)再生植株證明了全能性理論；研究胚和胚乳的關(guān)系及胚乳組織的功能；再生植株多為三倍體，產(chǎn)生無籽果實(shí)；可以從胚乳愈傷中分離和篩選各種類型的非整倍體植株。胚乳細(xì)胞是研究淀粉、蛋白質(zhì)和脂類天然產(chǎn)物代謝途徑的理想系統(tǒng)。第98頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一由胚乳再生完整植株的物種12科，20多種。薔薇科：蘋果，梨，桃。禾本科：大麥、玉米和水稻。茄科：枸杞，馬鈴薯。第99頁，共109頁，2023年，2月20日，星期一第五節(jié)胚乳培養(yǎng)1胚乳培養(yǎng)2胚乳培養(yǎng)過程3影響胚乳培養(yǎng)的因素4胚乳