第四章藥物分析方法驗(yàn)證演示文稿

第四章藥物分析方法驗(yàn)證演示文稿現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一優(yōu)選第四章藥物分析方法驗(yàn)證現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一第一節(jié)

定量分析樣品的前處理方法概述不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法前處理：特殊分析對(duì)象的前處理：藥物制劑、生物樣品

特殊藥物成分的前處理現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一概述前處理的目的：將特定原子或離子從藥物中分離出來(lái)，轉(zhuǎn)變?yōu)檫m合分析狀態(tài)適用藥物對(duì)象：含金屬元素（Bi、Al、Mg、Zn等）含鹵素元素（F、Cl、I）含氮、硫、磷等前處理方法：依據(jù)待測(cè)元素在藥物分子中結(jié)合的牢固程度，各有不同現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一

泛影酸碘番酸

三氯叔丁醇磺溴酞鈉Organichalides（有機(jī)鹵化物）現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一

酒石酸銻鉀富馬酸亞鐵

卡巴胂Organicmetal-containingdrugs（有機(jī)金屬化物）現(xiàn)在是6頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一概述前處理的目的：將特定原子或離子從藥物中分離出來(lái)，轉(zhuǎn)變?yōu)檫m合分析狀態(tài)適用藥物對(duì)象：含金屬元素（Bi、Al、Mg、Zn等）含鹵素元素（F、Cl、I）含氮、硫、磷等前處理方法：依據(jù)待測(cè)元素在藥物分子中結(jié)合的牢固程度，各有不同現(xiàn)在是7頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法

適用于：所含金屬離子或待測(cè)元素易于解離的藥物常用前處理方法：直接測(cè)定法經(jīng)水解后測(cè)定法經(jīng)還原分解后測(cè)定法常用測(cè)定方法：配位滴定，氧化還原滴定，沉淀滴定現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一直接測(cè)定的分析方法－－應(yīng)用示例葡萄糖酸銻鈉的測(cè)定

取本品約0.3g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加水100ml、鹽酸15ml與碘化鉀試液10ml，密塞、振搖后，在暗處?kù)o置10min，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于6.088mg的Sb?，F(xiàn)在是9頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一經(jīng)水解后測(cè)定法－－分析示例三氯叔丁醇的測(cè)定原理三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中加熱回流水解，氯元素全部轉(zhuǎn)變成氯化鈉，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量過(guò)量的硝酸銀滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，過(guò)量的硝酸銀，以Fe3+為指示劑，用硫氰酸銨液回滴定。現(xiàn)在是10頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法

適用于：所含金屬離子或待測(cè)元素易于解離的藥物常用前處理方法：直接測(cè)定法經(jīng)水解后測(cè)定法經(jīng)還原分解后測(cè)定法常用測(cè)定方法：配位滴定，氧化還原滴定，沉淀滴定現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法適用于原子與碳原子結(jié)合牢固的藥物濕法破壞

(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-硫酸鹽法等)干法破壞現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一濕法破壞－－凱氏定氮法凱氏定氮法（Kjeldahlmethod，）是一種常用的確定有機(jī)化合物中氮含量的檢測(cè)方法。這種方法是由凱耶達(dá)爾在1883年發(fā)明的。凱氏定氮法的普遍適用性、精確性和可重復(fù)性已經(jīng)得到了國(guó)際的廣泛認(rèn)可。它已經(jīng)被確定為檢測(cè)食品中蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)方法。

現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一樣本的分解：蛋白質(zhì)+H2SO4→(NH4)2SO4(aq)+CO2(g)+SO2(g)+H2O(g)銨鹽的分解：(NH4)2SO4(aq)+2NaOH→Na2SO4(aq)+2H2O(l)+2NH3(g)氨的固定：B(OH)3+H2O+NH3→NH4++B(OH)4–

返滴定：2NH4++2B(OH)4–

+H2SO4→（NH4)2SO4+2B(OH)3+2H2O現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一凱氏定氮法（kjeldahlnitrogendetermination）儀器裝置

凱氏燒瓶：為30~50ml（半微量法）或500ml（常量法）硅玻璃或硼玻璃制成的硬質(zhì)茄形燒瓶蒸餾裝置（半微量法）：1000ml的圓底燒瓶（A）、安全瓶（B）、連有氮?dú)馇虻恼麴s器（C）、漏斗（D）、直形冷凝管（E）、100ml錐形瓶（F）橡皮管夾（G、H）現(xiàn)在是16頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一注意通過(guò)凱氏定氮法測(cè)得的含氮量一般被稱(chēng)作總凱氮量。總凱氮量有時(shí)并不能真正地反映樣本中的蛋白質(zhì)含量，因?yàn)樗鶞y(cè)定的部分含氮量可能不是由蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化來(lái)的。如今，凱氏定氮法已經(jīng)可以自動(dòng)化進(jìn)行，一些催化劑（如氧化汞或硫酸銅）也被使用來(lái)提高反應(yīng)速率。現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一干法破壞

干法破壞法適用于濕法不易破壞完全的有機(jī)物（如含氮雜環(huán)類(lèi)有機(jī)物）以及某些不能用硫酸進(jìn)行破壞的有機(jī)藥物。

氧瓶燃燒破壞氧瓶燃燒法系將有機(jī)藥物在氧氣中燃燒，燃燒產(chǎn)物被吸收液吸收后，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定，該法適用于含鹵素或含硫、磷、硒等有機(jī)藥物分析的前處理。

現(xiàn)在是19頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一氧瓶燃燒法

原理：氧瓶燃燒法系將有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測(cè)物質(zhì)吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，然后根?jù)欲測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定。適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分析。現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一現(xiàn)在是21頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一氧瓶燃燒法②稱(chēng)樣用材料及稱(chēng)樣

A.固體樣品無(wú)灰濾紙

B.液體樣品紙袋

C.軟膏類(lèi)樣品：將適量樣品置不含被測(cè)成分的蠟油紙中包裹嚴(yán)密，外層再用無(wú)灰濾紙包裹現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一③氧氣④吸收液作用：吸收液的作用是將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價(jià)態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y(cè)定的價(jià)態(tài)。現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一氧瓶燃燒法樣品

吸收液測(cè)定方法FH2O茜素氟藍(lán)分光光度法

ClNaOH溶液

銀量法、汞量法

BrSO2-NaOH液或NaOH液-硫酸肼飽和液銀量法、分光法INaOH液硫酸肼飽和液

銀量法、碘量法、汞量法、分光法現(xiàn)在是24頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一第二節(jié)定量分析方法的特點(diǎn)容量分析法光譜分析法 色譜分析法現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一含量測(cè)定的表述方式原料藥：原料藥的百分含量

W測(cè)定量/W稱(chēng)取量×100%藥物制劑：表示量的百分含量

W測(cè)定的每片主成分含量/W標(biāo)示的每片主成分含量×100%W測(cè)定的每片主成分含量：實(shí)際測(cè)定時(shí)取10-20片計(jì)算平均片重、混合均勻后測(cè)定平均每片的主成分含量現(xiàn)在是26頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一容量分析法容量分析法：用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，滴定一定體積的待測(cè)溶液，直到化學(xué)反應(yīng)完全為止，到達(dá)終點(diǎn)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積和濃度計(jì)算待測(cè)物質(zhì)含量的方法。特點(diǎn)：簡(jiǎn)便，快速，準(zhǔn)確度高，專(zhuān)屬性較差（化學(xué)原料藥分析）現(xiàn)在是27頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一容量分析法滴定度 每1ml標(biāo)準(zhǔn)滴定液相當(dāng)待測(cè)物的mg數(shù)。滴定度計(jì)算現(xiàn)在是28頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一容量分析法直接滴定法的結(jié)果計(jì)算V為滴定液的消耗體積(ml)；T為滴定度；W為供試品的稱(chēng)樣量(g)；10－3為質(zhì)量換算因數(shù)(1mg等于10－3g)；F為滴定液的濃度校正因數(shù)?，F(xiàn)在是29頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一精密稱(chēng)取阿司匹林0.3972g，用氫氧化鈉（0.1021mol/L）滴定,消耗反應(yīng)體積21.35ml。計(jì)算每1ml標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的滴定度，以及阿司匹林的含量。（分子式C9H8O4

分子量180.2）現(xiàn)在是30頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一取司可巴比妥鈉膠囊（標(biāo)示量為0.1g）20粒，除去囊殼后測(cè)得內(nèi)容物總重為3.0780g，稱(chēng)取0.1536g，按藥典規(guī)定用溴量法測(cè)定。加入溴液（0.05mol/L）25mL，剩余的溴液用硫代硫酸鈉液（0.1025mol/L）滴定到終點(diǎn)時(shí)，用去17.94mL?？瞻自囼?yàn)用去硫代硫酸鈉液25.00mL。按每1mL溴液（0.05mol/L）相當(dāng)13.01mg的司可巴比妥鈉，計(jì)算該膠囊標(biāo)示量百分含量。（注：溴與硫代硫酸鈉反應(yīng)摩爾比為1：2）現(xiàn)在是31頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一光譜分析法

光譜分析法是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析的方法。單色光穿過(guò)吸光物質(zhì)溶液時(shí)，在一定的濃度范圍內(nèi)，被該物質(zhì)吸收的光量與該物質(zhì)溶液的濃度和液層的厚度（光路長(zhǎng)度）成正比。其關(guān)系式如下：

現(xiàn)在是32頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一取標(biāo)示量為25mg的鹽酸氯丙嗪片20片，除去糖衣后精密稱(chēng)定，總重量為2.4120g，研細(xì)，精密稱(chēng)量片粉0.2368g，置500ml量瓶中，加鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置100ml量瓶中，加同一溶劑稀釋至刻度，搖勻，在254nm波長(zhǎng)處測(cè)得吸收度為0.435，按百分吸收系數(shù)為915計(jì)算，求其標(biāo)示量百分含量？(10分)現(xiàn)在是33頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一紫外-可見(jiàn)分光光度法紫外-可見(jiàn)分光光度法用于藥物含量測(cè)定的方法有三種：1對(duì)照品比較法分別配制供試品和對(duì)照品溶液，在規(guī)定波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，按下式計(jì)算供試品溶液中被測(cè)組分的濃度。CX=（AX/AR）CR

2吸收系數(shù)法按各品種項(xiàng)下方法，配制供試品溶液，在規(guī)定波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，再根據(jù)吸收系數(shù)按下式計(jì)算供試品溶液的濃度。

現(xiàn)在是34頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一紫外-可見(jiàn)分光光度法3比色法

供試品本身在紫外-可見(jiàn)區(qū)沒(méi)有強(qiáng)吸收，或在紫外區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度，可加入適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色后測(cè)定用比色法測(cè)定時(shí)，由于顯色時(shí)影響的因素較多，應(yīng)取供試品與對(duì)照品同時(shí)操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對(duì)照品或供試品溶液，然后依次加入等量的試劑，并用同樣方法處理，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度后，按對(duì)照品比較法公式計(jì)算供試品溶液的濃度。

現(xiàn)在是35頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一色譜法色譜法（chromatography）是利用混合物不同組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)（或吸附系數(shù)、滲透性等），當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，不同組分在兩相中進(jìn)行多次反復(fù)分配實(shí)現(xiàn)分離后，通過(guò)檢測(cè)器得以檢測(cè)，進(jìn)行定性定量分析?，F(xiàn)在是36頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)指用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)達(dá)到的要求。（一）色譜柱的理論板數(shù)（n）在選定的色譜條件下，測(cè)定主成分或內(nèi)標(biāo)物色譜峰的保留時(shí)間（tR）和半峰寬（W1/2），按塔板理論公式計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)。如果測(cè)得的理論板數(shù)低于各品種項(xiàng)下規(guī)定的最小理論板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的某些條件（如柱長(zhǎng)、載體性能、色譜柱填充的優(yōu)劣等），使理論板數(shù)達(dá)到要求?，F(xiàn)在是37頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一（二）分離度（R）定量分析時(shí)，為便于準(zhǔn)確測(cè)量，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標(biāo)峰之間有較好的分離度。除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5。（三）重復(fù)性取各品種項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次， 除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn) 偏差應(yīng)不大于2.0%。現(xiàn)在是38頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一（四）拖尾因子為保證測(cè)量精度，特別當(dāng)采用峰高法測(cè)量時(shí)，應(yīng)檢查待測(cè)峰的拖尾因子是否符合各種項(xiàng)下的規(guī)定。拖尾因子（T）以下式計(jì)算：除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.95～1.05之間?，F(xiàn)在是39頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一第三節(jié)藥品分析方法的驗(yàn)證

一、目的

證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求，方法驗(yàn)證過(guò)程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品標(biāo)準(zhǔn)起草和修訂說(shuō)明中。

現(xiàn)在是40頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一二、用途1、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。2、藥物合成方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證?，F(xiàn)在是41頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一三、需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目1.鑒別試驗(yàn)；2.雜質(zhì)定量或限度檢查；3.原料或制劑中有效成分含量測(cè)定；4.制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測(cè)定；5.溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等 的測(cè)試方法。現(xiàn)在是42頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一驗(yàn)證內(nèi)容有：

準(zhǔn)確度、 精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、

專(zhuān)屬性、 檢測(cè)限、 定量限、 線性、 范圍和耐用性四、驗(yàn)證內(nèi)容

現(xiàn)在是43頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一

（一）準(zhǔn)確度（accuracy）

準(zhǔn)確度是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。

原料藥可用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較?，F(xiàn)在是44頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一

制劑可用含己知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定，即采用在空白輔料中加入原料藥對(duì)照品的方法。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定?，F(xiàn)在是45頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一

回收試驗(yàn)空白+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M現(xiàn)在是46頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一

加樣回收試驗(yàn)

已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M現(xiàn)在是47頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一數(shù)據(jù)要求

規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次?，F(xiàn)在是48頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一

（二）精密度（precision）

精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示。現(xiàn)在是49頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（RSD），也稱(chēng)變異系數(shù)（CV）現(xiàn)在是50頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一1.重復(fù)性

在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，或制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次或把被測(cè)物濃度當(dāng)作100%，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)價(jià)。現(xiàn)在是51頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一2.中間精密度

同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度?？疾祀S機(jī)變動(dòng)因素的影響。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備現(xiàn)在是52頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一3.重現(xiàn)性不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。如建立藥典分析方法時(shí)通過(guò)協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗(yàn)的過(guò)程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說(shuō)明中。

現(xiàn)在是53頁(yè)\一共有61頁(yè)\編輯于星期一

（三）檢測(cè)限（limitofdetection，LOD