第三章第三節(jié)電泳技術(shù)演示文稿

第三章第三節(jié)電泳技術(shù)演示文稿現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一優(yōu)選第三章第三節(jié)電泳技術(shù)現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一一、電泳技術(shù)的概念在直流電場(chǎng)中，帶電粒子向與其電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象稱為電泳（electrophoresis）。利用各種帶電粒子電泳速度不同，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離，然后對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析方法稱為電泳分析法，也叫電泳技術(shù)?，F(xiàn)在是3頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一二、電泳技術(shù)的分類電泳技術(shù)的分類方法有多種，可從分離目的、電場(chǎng)強(qiáng)度、電泳媒介、電泳裝置、緩沖液pH等不同角度進(jìn)行分類?，F(xiàn)在是4頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（一）按照電場(chǎng)強(qiáng)度的不同，分為常壓電泳和高壓電泳常壓電泳的電場(chǎng)強(qiáng)度一般在2~10V/cm（電壓在500V以下）高壓電泳的電場(chǎng)強(qiáng)度一般在20~220V/cm（電壓在500V以上）現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（二）按照電泳媒介不同（有無(wú)支持物），分為自由電泳和區(qū)帶電泳1．自由電泳自由電泳的媒介為溶液（不用支持物），帶電粒子在溶液中自由移動(dòng)，適用于生物細(xì)胞和生物大分子的電泳分離，如顯微電泳、等電聚焦電泳、密度梯度電泳等?，F(xiàn)在是6頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一2．區(qū)帶電泳媒介為支持介質(zhì)，被分離的物質(zhì)經(jīng)電泳后在支持介質(zhì)上形成區(qū)帶稱為區(qū)帶電泳。區(qū)帶電泳是目前應(yīng)用最廣泛的一種電泳技術(shù)，適用于蛋白質(zhì)、核酸等標(biāo)本的分離。區(qū)帶電泳根據(jù)支持介質(zhì)的不同又分為濾紙電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等?，F(xiàn)在是7頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（三）按照分離目的的不同，分為分析電泳和制備電泳。（四）按照支持物的裝置形式（電泳裝置）不同，分為水平電泳（支持物水平放置，最常用）和垂直電泳等?，F(xiàn)在是8頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（五）按照緩沖液pH值是否均一分為連續(xù)pH電泳和不連續(xù)pH電泳。1．連續(xù)pH電泳支持介質(zhì)各處的pH相同，如濾紙電泳、醋酸纖維素薄膜電泳等。2．不連續(xù)pH電泳支持介質(zhì)各處的pH不同，聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電聚焦電泳等。現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一三、電泳技術(shù)的特點(diǎn)1．凡是帶電物質(zhì)均可應(yīng)用某一電泳技術(shù)進(jìn)行分離，并可進(jìn)行定性或定量分析。2．分辨率高。3．可在常溫下進(jìn)行。4．樣品用量少。5．操作省時(shí)簡(jiǎn)便。6．設(shè)備簡(jiǎn)單?，F(xiàn)在是10頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一第二節(jié)

電泳技術(shù)的基本原理現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一一、電泳遷移率在溶液中，若能吸附帶電質(zhì)點(diǎn)或者帶有可解離基團(tuán)的物質(zhì)在一定的pH條件下在直流電場(chǎng)中收到所帶電荷相反的電極吸引而發(fā)生移動(dòng)。根據(jù)Stoke定律，用Q表示顆粒帶電量，v表示電泳速度（cm/s），E表示電場(chǎng)強(qiáng)度（V/cm），顆粒半徑r，介質(zhì)粘度系數(shù)η。v=EQ/(6π·r·η)現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一遷移率（μ）：帶電顆粒在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的電泳速度。μ=v/E=Q/(6π·r·η)各種帶電物質(zhì)在一定的條件下測(cè)得的遷移率是一物理常數(shù)?，F(xiàn)在是13頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一表2-1血清蛋白等電點(diǎn)與電泳遷移率血清蛋白等電點(diǎn)電泳遷移率cm2/(V·s)分子量白蛋白4.845.9×10-569000α1-球蛋白5.065.1×10-5200000α2-球蛋白5.064.1×10-5300000β-球蛋白5.122.8×10-590000～150000γ-球蛋白6.85～7.301.0×10-5156000～300000現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一

現(xiàn)在是15頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一二、影響電泳遷移率的因素（一）樣品被分離物質(zhì)的帶電荷量和電泳速度成正比。帶電荷量越多，電泳速度越快。若帶電量相同，分子量大的電泳速度慢。分子大小與電泳速度成反比。現(xiàn)在是16頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（二）電場(chǎng)強(qiáng)度電場(chǎng)強(qiáng)度也稱電勢(shì)梯度，是指單位長(zhǎng)度（每1cm）的電壓降（電位降）。常壓電泳的電場(chǎng)強(qiáng)度一般為2～10V/cm，高壓電泳的電場(chǎng)強(qiáng)度一般為20～200V/cm。常壓電泳多用于分離蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，高壓電泳則用來(lái)分離氨基酸、小肽、核苷等小分子物質(zhì)。電泳速度與支持介質(zhì)兩端的電壓成正比?，F(xiàn)在是17頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一例如：以濾紙作支持物，其兩端浸入電極緩沖液中，電極緩沖液與濾紙交界面的紙長(zhǎng)20cm，測(cè)得的電壓降為200V，那么，電場(chǎng)強(qiáng)度為200V/20cm=10V/cm?，F(xiàn)在是18頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（三）電泳緩沖液電泳緩沖液起著決定粒子電荷性質(zhì)和電荷量的作用，同時(shí)起導(dǎo)電作用，電泳時(shí)對(duì)緩沖液的化學(xué)組成、pH值和離子強(qiáng)度都有一定的要求?，F(xiàn)在是19頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一1．緩沖液的化學(xué)組成（緩沖溶質(zhì)）緩沖體系的組成常選用弱酸/弱酸鹽、酸式鹽/次級(jí)鹽。對(duì)緩沖液的要求是化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、電導(dǎo)率低、緩沖容量大、粒子移動(dòng)性好。按此要求，緩沖液的pH值確定后，第一，選擇緩沖液時(shí)要盡量選擇pKa接近緩沖液pH的弱酸成分，此時(shí)緩沖容量最大。第二，優(yōu)先選用離子價(jià)數(shù)為1價(jià)的電解質(zhì)，目的是保持離子的活度。第三，優(yōu)先選擇正、負(fù)離子移動(dòng)速度相近的電解質(zhì)，使電泳時(shí)離子分布均勻，保證電泳區(qū)帶的整齊。現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一常用的緩沖液有巴比妥/巴比妥鈉、檸檬酸/檸檬酸鈉、NaH2PO4/Na2HPO4、Tris/HCL等。巴比妥/巴比妥鈉是血清蛋白電泳常用的電泳緩沖液?，F(xiàn)在是21頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一2．pH值溶液的pH值決定了帶電顆粒解離的程度，也決定了物質(zhì)所帶凈電荷的多少。如緩沖溶液的pH值大于待分離的蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)pI，則蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。當(dāng)分離某一蛋白質(zhì)混合物時(shí)，應(yīng)選擇一種能擴(kuò)大各種蛋白質(zhì)所帶電荷量差異的pH值，以利于各種蛋白質(zhì)的分離，當(dāng)然不能過(guò)酸過(guò)堿，以免引起蛋白質(zhì)變性。緩沖液的pH值一般設(shè)在4.5～9.0為宜?，F(xiàn)在是22頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一3．離子強(qiáng)度除了要求緩沖液具有合適的化學(xué)組成和pH值以外，還要求具有一定的導(dǎo)電能力。緩沖液的導(dǎo)電能力可用離子強(qiáng)度表示。在稀溶液中離子強(qiáng)度可用下式計(jì)算：I=ΣCiZi2/2I：離子強(qiáng)度，Ci：離子的濃度，Zi：離子的價(jià)數(shù)，Σ代表累加。現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一例：求0.015MNa2SO4溶液的離子強(qiáng)度：I=（0.015×2×12+0.015×22）/2=0.045（mol/L）緩沖液的離子強(qiáng)度影響緩沖容量、產(chǎn)熱效應(yīng)和電泳速度。離子強(qiáng)度大，緩沖容量大，pH值穩(wěn)定；但離子強(qiáng)度大，電泳速度慢；同時(shí)離子強(qiáng)度大，電流強(qiáng)度大，產(chǎn)熱多，蒸發(fā)快。速度慢，會(huì)導(dǎo)致時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，標(biāo)本擴(kuò)散。速度快，導(dǎo)致區(qū)帶不整齊，分辨率低。綜合考慮，離子強(qiáng)度最好選在0.02～0.2mol/L之間?，F(xiàn)在是24頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（四）支持介質(zhì)支持介質(zhì)對(duì)電泳的影響主要表現(xiàn)為電滲作用和吸附作用。1．電滲作用液體在電場(chǎng)中對(duì)于一個(gè)固體支持物的相對(duì)移動(dòng)，稱為電滲作用。在電泳時(shí)應(yīng)盡量避免使用具有高電滲作用的支持物。2．吸附作用支持介質(zhì)的表面對(duì)被分離的物質(zhì)具有一定的吸附作用，使被分離樣品滯留而降低電泳速度，造成樣品拖尾，使電泳的分辨率降低。電泳時(shí)，要選擇吸附作用小的支持介質(zhì)?，F(xiàn)在是25頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（五）溫度電泳過(guò)程中由于通電產(chǎn)生焦耳熱，熱對(duì)電泳有很大影響。溫度每升高1℃，遷移率約增加2.4%。為降低熱效應(yīng)對(duì)電泳的影響，可控制電壓或電流，或安裝冷卻散熱裝置。（六）分子的性質(zhì)和形狀（七）蒸發(fā)現(xiàn)在是26頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一第三節(jié)電泳儀電泳儀是進(jìn)行電泳分析的儀器主要由電源和電泳槽兩部分組成現(xiàn)在是27頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一一、電源電源是產(chǎn)生電泳電場(chǎng)的裝置，常為可調(diào)式直流電源。一般都用交流電源經(jīng)過(guò)整流、濾波后獲得，主要部分是一個(gè)整流器，可用晶體管、電子管或可控硅整流。多數(shù)裝有穩(wěn)壓裝置，用電壓表和電流表指示輸出電壓及電流的大小?，F(xiàn)在是28頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一二、電泳槽電泳槽是用來(lái)盛裝緩沖液和進(jìn)行電泳的場(chǎng)所，多用透明塑料膜壓或用有機(jī)玻璃膠合而成。電泳槽外形有水平式、垂直式和圓盤式等多種，其中水平式電泳槽一般由電極、緩沖液槽、電泳介質(zhì)支架和一個(gè)透明的絕緣蓋等幾部分組成。電極分別裝在兩個(gè)緩沖液槽內(nèi)。電極應(yīng)具有良好的導(dǎo)電性、抗腐蝕性和抗電解作用，常用鉑絲或鎳鉻合金絲等材料。現(xiàn)在是29頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一支持介質(zhì)放在兩個(gè)支架上，其兩端與電泳液接通而形成鹽橋。通電后，電流只能在支持介質(zhì)體上通過(guò)，電泳物質(zhì)在其上泳動(dòng)。絕緣蓋起防止緩沖液蒸發(fā)以及防觸電的保護(hù)作用。有些電泳槽有冷卻裝置以保證電泳介質(zhì)的溫度不至過(guò)高。電泳操作一般有支持介質(zhì)的制備或飽和，加樣，電泳分離樣品、染色及洗脫比色或光密度掃描定量等步驟?，F(xiàn)在是30頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一第四節(jié)

幾種常用電泳技術(shù)現(xiàn)在是31頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一一、醋酸纖維素薄膜電泳醋酸纖維素薄膜電泳（celluloseacetateelectrophoresis,CAE）是以醋酸纖維素薄膜作為支持物的一種區(qū)帶電泳技術(shù)。醋酸纖維素薄膜是將纖維素的羥基乙?；纬衫w維素醋酸酯，然后將其溶于有機(jī)溶劑后涂抹成均勻的薄膜，干燥后就成為醋酸纖維素薄膜。該膜具有均一的泡沫狀結(jié)構(gòu)，厚度約為120μm，通透性好，對(duì)分子移動(dòng)阻力少，是一種良好的電泳支持物?，F(xiàn)在是32頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（一）優(yōu)點(diǎn)1．吸附作用和電滲作用都很小2．分離速度快3．分離區(qū)帶清晰，分辨率高4．樣品用量少5．操作簡(jiǎn)便6．易定量、可長(zhǎng)期保存現(xiàn)在是33頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（二）缺點(diǎn)1．薄膜吸水性差2．分辨率比聚丙烯酰胺凝膠電泳低3．不適于制備現(xiàn)在是34頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一【實(shí)驗(yàn)名稱】醋酸纖維素薄膜電泳分離血漿蛋白質(zhì)【實(shí)驗(yàn)原理】

血漿中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，一般都低于pH7.4。它們?cè)趐H8.6的緩沖液中均解離帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。由于血漿中各種蛋白質(zhì)分子大小、形狀及所帶的電荷量不同，因而在醋酸纖維素薄膜上電泳的速度也不同。因此可以將它們分離為清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白，纖維蛋白原６條區(qū)帶。（三）操作步驟現(xiàn)在是35頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（三）操作步驟處理膜→點(diǎn)樣→電泳→染色→漂洗→透明→測(cè)定吸光度

現(xiàn)在是36頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一操作步驟1、薄膜準(zhǔn)備①將醋酸纖維素薄膜切成2×8cm的小條。②在薄膜粗面一端1.5cm處用鉛筆輕輕畫一橫線。③在薄膜角上用鉛筆作一標(biāo)記。④將醋酸纖維素薄膜浸泡于緩沖液中20min。

現(xiàn)在是37頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一操作步驟醋酸纖維素薄膜規(guī)格及點(diǎn)樣位置8cm2cm點(diǎn)樣線點(diǎn)樣區(qū)1.5cm(粗面）現(xiàn)在是38頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一操作步驟2、電泳儀準(zhǔn)備在電泳槽內(nèi)加入緩沖液，使兩個(gè)電極槽內(nèi)的液面等高。先剪裁尺寸合適的濾紙條，取雙層濾紙條附著在電泳槽的支架上，使它的一端與支架的前沿對(duì)齊，而另一端浸入電極槽的緩沖液內(nèi)。用緩沖液將濾紙全部潤(rùn)濕并驅(qū)除氣泡，使濾紙緊貼在支架上，即為濾紙橋。它是聯(lián)系醋酸纖維薄膜和兩極緩沖液之間的“橋梁”。現(xiàn)在是39頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一操作步驟3、點(diǎn)樣（電泳的關(guān)鍵步驟）用鑷子把膜條從緩沖液中取出，夾在兩層濾紙中間，吸去多余的液體，然后平鋪在玻璃板上（粗面朝上），將點(diǎn)樣器先在培養(yǎng)皿的血漿中沾一下，再在膜條點(diǎn)樣線處輕輕地水平落下并隨即提起，這樣即在膜條上點(diǎn)上了細(xì)條狀的血漿樣品。點(diǎn)樣線盡量點(diǎn)得細(xì)窄而均勻。寧少勿多?，F(xiàn)在是40頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一操作步驟4、上槽待血漿吸入膜后，以薄膜粗面向下、點(diǎn)樣端置陰極端，兩端緊貼在濾紙鹽橋上，膜應(yīng)輕輕拉平，加蓋，平衡約5min，使薄膜滲透的緩沖液達(dá)到平衡。

切勿使點(diǎn)樣處與電泳槽接觸現(xiàn)在是41頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一操作步驟5、電泳檢查電泳裝置是否正確，開(kāi)啟電源，調(diào)節(jié)電壓、電流，然后通電40~60min。

電壓：110~130V（10V/cm膜長(zhǎng)）薄膜的有效長(zhǎng)度是兩電極緩沖液面之間濾紙鹽橋和薄膜的長(zhǎng)度之和。

電流：0.4~0.6mA/cm膜寬有數(shù)條膜便求數(shù)條膜寬的總和。

現(xiàn)在是42頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一操作步驟6、染色和漂洗電泳完畢后，關(guān)閉電源，將膜取出，直接浸于染色液中5min。取出膜，盡量瀝凈染色液，移入漂洗液中浸洗脫色（一般更換2~3次），至背景顏色脫凈為止。取出膜，用濾紙吸干即可?，F(xiàn)在是43頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一操作步驟血漿蛋白醋酸纖維素薄膜電泳圖譜－＋電泳方向Aα1βγα2纖維蛋白原現(xiàn)在是44頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一操作步驟7、透明薄膜完全干燥后，浸入透明液中20min后，取出平貼在玻璃板上（不要留有氣泡），完全干燥后即成透明的薄膜圖譜，要作掃描或照相用?？砷L(zhǎng)期保存。現(xiàn)在是45頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一操作步驟8、定量（略）①洗脫比色法②光密度計(jì)掃描法現(xiàn)在是46頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一血清蛋白電泳光密度掃描現(xiàn)在是47頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（五）應(yīng)用醋酸纖維素薄膜電泳已廣泛用于各種生物分子的分離分析中，如血紅蛋白、血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、同工酶及類固醇等的分離和測(cè)定?，F(xiàn)在是48頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一正常人血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳示意圖

現(xiàn)在是49頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一二、瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳（agarosegelelectrophoresis,AGE）是以瓊脂糖凝膠作為支持物的一種區(qū)帶電泳技術(shù)。瓊脂糖凝膠電泳的吸附作用和電滲作用均較小，分辨率和重現(xiàn)性較好，電泳圖譜清晰，電泳速度快，區(qū)帶易染色、洗脫和定量，常用于生物大分子如：血漿脂蛋白、免疫球蛋白、同工酶和DNA酶切片段的分離?，F(xiàn)在是50頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一三、聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE）是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持物的一種區(qū)帶電泳技術(shù)。這種凝膠電泳的主要特點(diǎn)是凝膠具有電泳和分子篩的雙重作用，大大提高了分辨能力。聚丙烯酰胺凝膠電泳能精細(xì)分離各種蛋白質(zhì)，還可測(cè)定蛋白質(zhì)和核酸的分子量，進(jìn)行核酸的序列分析等，特別在基因變異或同工酶的研究中應(yīng)用廣泛?，F(xiàn)在是51頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一現(xiàn)在是52頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（一）聚丙烯酰胺凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn)1．具有分子篩作用，分離效果好。2．設(shè)備簡(jiǎn)單，樣品用量少（1～100微克），不易擴(kuò)散，分辨率高。3．不帶電荷，幾乎沒(méi)有電滲作用。4．可通過(guò)控制凝膠濃度來(lái)調(diào)節(jié)凝膠的孔徑，以適合不同分子量樣品的分離。5．化學(xué)穩(wěn)定性好，由于分子結(jié)構(gòu)中富含酰胺基，聚丙烯酰胺凝膠是一種穩(wěn)定的親水膠體。6．機(jī)械強(qiáng)度好，有彈性，無(wú)色透明，易觀察，可用檢測(cè)儀直接測(cè)定?，F(xiàn)在是53頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一不足之處是聚丙烯酰胺凝膠單體對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)及皮膚有毒性作用，但聚合后就沒(méi)有毒性了?，F(xiàn)在是54頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（二）聚丙烯酰胺凝膠的聚合聚丙烯酰胺是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺通過(guò)化學(xué)聚合或光聚合反應(yīng)而形成的大分子。聚合時(shí)，丙烯酰胺（CH2＝CH－CO－NH2）的雙鍵打開(kāi)，通過(guò)加成反應(yīng)形成含有酰胺基側(cè)鏈的脂肪族長(zhǎng)鏈，相鄰的兩條鏈通過(guò)甲叉雙丙烯酰胺以亞甲基橋方式交聯(lián)起來(lái)，形成具有三維結(jié)構(gòu)的多聚物。現(xiàn)在是55頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一現(xiàn)在是56頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一過(guò)硫酸銨－四甲基乙二胺（TEMED）為化學(xué)催化系統(tǒng)。當(dāng)在丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺的溶液中加入這種催化系統(tǒng)后，過(guò)硫酸銨作為引發(fā)劑提供自由基，通過(guò)自由基傳遞，形成丙烯酰胺自由基從而引發(fā)聚合反應(yīng)。四甲基乙二胺作為加速劑，可加快引發(fā)劑釋放自由基的速度，具體反應(yīng)為過(guò)硫酸銨在溶液中形成過(guò)硫酸自由基（SO4?–），該自由基可激活加速劑，加速劑作為電子載體提供一個(gè)未配對(duì)電子將丙烯酰胺單體轉(zhuǎn)化為丙烯酰胺自由基，經(jīng)反應(yīng)多聚物聚合成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。聚合的速度與溫度成正比，如溫度過(guò)低，或體系中有氧分子及不純物質(zhì)都會(huì)延緩凝膠的聚合。為了防止溶液氣泡中含有氧分子而妨礙聚合，在聚合前最好先將溶液分別抽氣除氧，再混合配制?，F(xiàn)在是57頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一核黃素－TEMED為光催化系統(tǒng)，在光照下部分核黃素被還原成無(wú)色核黃素，在有痕量氧存在的條件下，無(wú)色核黃素再被氧化為帶有自由基的核黃素，從而引發(fā)聚合反應(yīng)，在此系統(tǒng)中，核黃素是引發(fā)劑，四甲基乙二胺是加速劑?，F(xiàn)在是58頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一（三）聚丙烯酰胺凝膠孔徑和機(jī)械強(qiáng)度的調(diào)節(jié)聚丙烯酰胺凝膠的孔徑、機(jī)械強(qiáng)度、彈性和透明度都與凝膠總濃度（T）和交聯(lián)度（C）有關(guān)。T表示每100ml凝膠溶液中含有單體和交聯(lián)劑的總克數(shù)（g/dl）。C則表示凝膠溶液中交聯(lián)劑占單體和交聯(lián)劑總克數(shù)的百分比?，F(xiàn)在是59頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一凝膠的孔徑主要由T決定，也與C有關(guān)。T值越大，凝膠孔徑越小。當(dāng)T值固定不變，C值在5%時(shí)，凝膠孔徑最小，大于或小于5%時(shí)凝膠的孔徑都會(huì)增大。在電泳中凝膠的孔徑是一個(gè)重要因素，往往會(huì)對(duì)分離效果起決定作用。常用于分離血漿蛋白的聚丙烯酰胺凝膠是標(biāo)準(zhǔn)凝膠，T為7.5g/dl，孔徑大約為5nm，適用于分子量104～106的蛋白質(zhì)的分離。在科研工作中，一般是先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以選出最適的凝膠濃度。現(xiàn)在是60頁(yè)\一共有65頁(yè)\編輯于星期一凝膠的機(jī)械強(qiáng)度、彈性和透明度主要取決于T及單體與交聯(lián)劑的比值。通常T值越大，機(jī)械強(qiáng)度越強(qiáng)，其中單體與交聯(lián)劑的比值尤為重要。實(shí)驗(yàn)表明，T<2.5g/dl，不能成膠；T<5g/dl，凝膠成膠胨狀；T>15g/dl，凝膠的硬度、脆性增加，易于折斷。單體與交聯(lián)劑的比值小于10，交聯(lián)度過(guò)大，凝膠