生化實驗緒論

生化實驗緒論第1頁/共26頁實驗部分：（32學時）1、表達GFP質(zhì)粒的提取及雙酶切2、瓊脂糖電泳3、化學轉(zhuǎn)化法感受態(tài)細胞的制備、轉(zhuǎn)化及GFP表達菌的篩選4、表達菌的擴大培養(yǎng)和誘導表達5、細胞的超聲波破碎及硫酸銨分級沉淀6、透析、柱層析分離GFP7、SDS測定GFP分子量第2頁/共26頁實驗課的考核方式：考查實驗課成績評定：平時成績占30%，包括課堂知識掌握情況等；實驗成績占70%，包括實驗操作、實驗報告等。第3頁/共26頁實驗課報名要求：將你的姓名、學院、學科專業(yè)、實驗課時間發(fā)到wenjlei@實驗課安排在北校區(qū)8號樓7層，從第3周開始，每周1~5下午，根據(jù)你的情況選擇上實驗課時間。第4頁/共26頁生物化學實驗技術是生物化學的基本組成部分，也是生物化學建立和發(fā)展的基礎。生物化學技術促進了生物學科的建立和發(fā)展。揭示了許多生命現(xiàn)象的本質(zhì)；推動了工業(yè)、農(nóng)業(yè)和醫(yī)療等的發(fā)展。第5頁/共26頁生物化學實驗中，生物分子在溶液進行的生物化學過程與生物化學變化不能直接被觀察，需用各種技術和方法來監(jiān)測生物化學過程。第6頁/共26頁生物化學技術的發(fā)展趨勢：儀器分析技術趨向綜合化；分離提取技術趨向快速高效和超微量；生物大分子結(jié)構(gòu)分析趨向高精確度、高分辨率。技術發(fā)展迅速：離心技術、層析技術、電泳技術、同位素示蹤、HPLC、紅外、紫外、圓二色等光譜技術、核磁共振技術、氨基酸分析儀、DNA序列測定儀、DNA合成儀、高效毛細管電泳技術、PCR等。第7頁/共26頁基本內(nèi)容：生物化學實驗方法和技術原理，如：生化分離方法、生化分析方法和生化制備方法等。生化實驗：基本實驗和綜合實驗。第8頁/共26頁課程要求：掌握生化實驗方法和技術原理；熟練生化實驗的基本操作規(guī)程。目的：獲得實驗知識和實驗技能，為將來的畢業(yè)論文和科研奠定基礎。第9頁/共26頁通過生物化學實驗應該做到①學習設計一個實驗的基本思路，掌握各個實驗的基本原理，合理地組織安排實驗步驟和時間。②學會使用各種生物化學實驗儀器。分光光度計、離心機、核酸蛋白檢測儀、酸度計、電泳裝置等。第10頁/共26頁③觀察記錄實驗現(xiàn)象和數(shù)據(jù)的技能，提高實驗報告的寫作能力，培養(yǎng)嚴謹細致的科學作風。④掌握生物化學的各種基本實驗方法和實驗技術。第11頁/共26頁實驗記錄①實驗前應預習實驗，在記錄本上寫好實驗預習報告，包括詳細的實驗操作步驟和數(shù)據(jù)記錄表格等。②及時準確地記錄所觀察到的現(xiàn)象和數(shù)據(jù)，做到公正客觀。③詳細記錄實驗條件、生物材料的來源、形態(tài)特征、選用的組織及其重量等；試劑的規(guī)格等。第12頁/共26頁實驗報告實驗報告是實驗的總結(jié)和匯報，通過實驗報告的寫作可以分析總結(jié)實驗的經(jīng)驗和問題，學會處理各種實驗數(shù)據(jù)的方法，加深對有關生物化學與分子生物學原理和實驗技術的理解和掌握，同時也是學習撰寫科學研究論文的過程。第13頁/共26頁實驗報告格式①實驗目的②實驗原理③儀器、試劑和實驗材料④實驗步驟⑤數(shù)據(jù)處理⑥結(jié)果討論第14頁/共26頁為了使實驗結(jié)果能夠重復，必須詳細記錄實驗現(xiàn)象的所有細節(jié)，仔細觀察實驗現(xiàn)象常常引起意外的發(fā)現(xiàn)，報告并注意分析實驗中的真實發(fā)現(xiàn)，這是非常重要的科學研究訓練。第15頁/共26頁實驗報告使用的語言應簡明清楚，實驗數(shù)據(jù)盡可能整理成表格并作圖表示。實驗結(jié)果的討論要充分，盡可能多查閱一些有關的文獻，運用己學過的知識和生化原理進行深入探討，提出自己獨特的分析和見解，可對實驗提出改進意見。第16頁/共26頁實驗室規(guī)則①實驗前應預習實驗內(nèi)容，明確實驗原理、目的和要求，寫出實驗預習報告。②按照實驗步驟和操作規(guī)程進行實驗。若有改進和設計新的實驗方法，需經(jīng)教師同意。③保持實驗臺面、水池和所用實驗儀器的整潔。試劑取完后立即放回原處。節(jié)省使用試劑和無離子水。如Sephadex凝膠和DEAE纖維素等，用后必需回收。第17頁/共26頁④做好實驗記錄，及時整理數(shù)據(jù)，按時上交實驗報告。⑤儀器使用應遵守操作規(guī)程，儀器發(fā)生故障或損壞應立即報告教師，不得自己隨意檢修。第18頁/共26頁⑥實驗過程中注意安全。可能存在的危險：著火、爆炸、中毒、化學灼傷、觸電和割傷。實驗室內(nèi)嚴禁吸煙、吃喝。⑦值日生做好實驗室的清潔工作。檢查并關好水、電、門、窗。第19頁/共26頁儀器清洗移液器緩沖液純水第20頁/共26頁磷酸鹽緩沖液磷酸鈉鹽在低溫時難溶，但配制SDS的緩沖液時，只能用鈉鹽。優(yōu)點：①易配制成各種濃度的緩沖液；②適用的pH范圍寬；③pH受溫度的影響??；④緩沖液稀釋后pH變化小。缺點：①易與Ca2+、Mg2+及重金屬離子生成沉淀；②會抑制某些生物化學過程，如對某些酶的催化作用會產(chǎn)生某種程度的抑制作用。第21頁/共26頁Tris-HCl緩沖液的優(yōu)點：對生物化學過程干擾小，不與Ca2+、Mg2+及重金屬離子發(fā)生沉淀。缺點：①緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大；②溫度效應大。③易吸收空氣中的CO2。④對某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用。第22頁/共26頁無離子水是通過聚苯乙烯磺酸型強酸性陽離子交換樹脂和聚苯乙烯季胺型強堿性陰離子交換樹脂進行離子交換生產(chǎn)的。樹脂中的低分子有機化合物可能溶于水造成有機物污染，有可能干擾生化實驗中的某些反應，也會使水的紫外吸收增加。對紫外吸收要求嚴格的實驗，應選用蒸餾水。第23頁/共26頁蒸餾水制備多采用石英管加熱的硬質(zhì)玻璃蒸餾水器。在蒸餾水器中加入高錳酸鉀1g/L和85％的磷酸1ml可除去有機物。制備不含金屬離子的水需用亞沸蒸餾水。實驗中按照排除干擾物質(zhì)的類型選用水的種類，如：無離子水、普通蒸餾水、二次蒸餾水、亞沸蒸餾水及按特殊要求制備的高純水等。第24頁/共26頁當