實驗六體外抑菌實驗定課件

動物機能學實驗2編者：陳小軍實驗內(nèi)容實驗一影響藥物作用的因素實驗二藥物代謝動力學實驗實驗三處方與藥物的配伍禁忌實驗四中毒與解救試驗實驗五藥物對離體腸的影響實驗六抗微生物藥物的體外抑菌實驗實驗七生物堿的提取及其藥敏實驗實驗八藥物對離體心臟的影響實驗五、抗菌藥物的體外抑菌實驗

【實驗目的】

掌握藥敏試驗的方法，了解藥物對常見菌的作用。意義：體外抗菌試驗對臨床用藥具有參考價值。鑒定新藥是否具有抗菌活性。下一張

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【基本原理】抗菌活性：是指抗菌藥抑制或殺滅病原微生物的能力。兩種測定方法：體外與體內(nèi)（化學治療實驗）；評價指標：

（1）最低抑菌濃度（MIC）：

能夠抑制培養(yǎng)基中細菌生長的最低濃度。

（2）最低殺菌濃度（MBC）：能夠殺滅培養(yǎng)基中細菌的最低濃度。下一張

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【試劑與器材】

細菌菌液（如金黃色葡萄球菌、巴氏桿菌、大腸桿菌、沙門氏桿菌）、藥液（青霉素、鏈霉素、磺胺嘧啶鈉、四環(huán)素）、碘酒、牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、氫氧化鈉、高壓滅菌器、小試管、試管架、吸管、平皿等。

藥敏試紙的準備：青霉素1.6萬u/ml、鏈霉素1萬u/ml、1%磺氨嘧啶鈉、四環(huán)素5萬μ/ml256μ/ml青霉素溶液：下一張

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【實驗步驟】一、紙片法

以滅菌小棉簽取金黃色葡萄球菌液（每ml約含3億個細菌），注意不宜蘸取過多，以剛浸濕整個棉簽為度，輕輕地從四個不同方向平行交叉劃線，使菌液均勻涂布于整個瓊脂平板上。同樣方法，也可制作大腸桿菌平板備用。

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二、紙片法

取已經(jīng)制備好的4種藥敏片：青霉素1.6萬u/ml、鏈霉素1萬u/ml、1%磺氨嘧啶鈉、四環(huán)素5萬μ/ml，放置在已接種細菌的瓊脂平板表面的不同區(qū)域。為了位置間隔準確，最好事先在平皿底用蠟筆作上記號。

將培養(yǎng)皿置37℃培養(yǎng)24h，觀察紙片周圍有無抑菌環(huán)，并測量抑菌圈的直徑，比較各藥的抗菌效力。樣例如下圖：下一張

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實驗結(jié)果記錄：抑菌直徑（mm）下一張

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藥物沙門氏桿菌大腸桿菌二、試管二倍稀釋法

取滅菌小試管10支，按照1至10編號，排列于試管架上。按照無菌操作，從第一管到第10管，分別加入牛肉膏湯1ml。用吸管吸取256μ/ml的青霉素溶液1ml放入第一管，并反復吹勻；接著從第一管吸出1ml放入第二管同樣吹勻后吸出1ml放入第三管，依次逐管進行稀釋到第８管，第10管不加青霉素液，作細菌對照組，第９管只加藥物，不加菌液，作為藥物對照組。

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1-8，10各加入培養(yǎng)18h并用牛肉膏湯稀釋至5×107～108cfu/ml的金黃色葡萄球菌菌液0.5ml。放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h后，取出觀察細菌生長情況。以能抑制細菌生長的最小濃度為青霉素對該細菌的最低抑制濃度（MIC）。最低殺菌濃度（MBC）結(jié)果記錄于下表：下一張

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記錄實驗結(jié)果下一張

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【注意事項】1.接種細菌時要在無菌條件下均勻涂抹；用過的棉簽火焰燒灼后丟棄。2.用試管二倍稀釋法測MIC值，稀釋時注意稀釋的順序；每次移液前注意清洗吸管。3.藥敏片之間要間隔適當距離，以免抑菌圈出現(xiàn)交叉。4.四人一組，紙片法每人一個平皿，作四種藥物對一種菌的作用，