超氧化物歧化酶SOD的生產(chǎn)-林志豪課件

超氧化物歧化酶（SOD）的生產(chǎn)目錄一.SOD的概況二.SOD的運(yùn)用三.SOD的生產(chǎn)四.SOD使用及生產(chǎn)時(shí)的注意事項(xiàng)五.注意事項(xiàng)一.SOD的概況1.超氧化物歧化酶是一種廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物中的金屬酶，是生物體內(nèi)抗氧化酶系中主要成員之一。SOD是機(jī)體內(nèi)天然存在的超氧自由基清除因子，它通過上述反應(yīng)可以把有害的超氧自由基轉(zhuǎn)化為過氧化氫。盡管過氧化氫仍是對(duì)機(jī)體有害的活性氧，但體內(nèi)6性極強(qiáng)的過氧化氫酶(CAT)和過氧化物酶(POD)會(huì)立即將其分解為完全無害的水。這樣，三種酶便組成了一個(gè)完整的防氧鏈條。2.SOD的分類按其結(jié)合的金屬離子可分為Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三種二.SOD的運(yùn)用1．藥物類，主要集中在炎癥病患者，尤其治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、慢性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、心肌梗塞、心血管病、腫瘤患者以及放射性治療炎癥病患者；2．用于生化制藥，作為一種生化酶制劑，廣泛應(yīng)用于臨床和科研上，具有極強(qiáng)的抗衰老，抗腫瘤、調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌系統(tǒng)作用；3．用于化妝品類，可添加在化妝品中，具有抗氧化抗腐蝕的優(yōu)良性能。以SOD為主要成份的產(chǎn)品風(fēng)靡世界，引發(fā)了化妝品歷史上的一場(chǎng)革命，使人類永葆青春美麗夢(mèng)想成真；4.用作保健食品、飲料、如SOD糖、SOD口服液、SOD干啤等都非常暢銷!在飲料、糖果、糕點(diǎn)等食品中加入SOD既可利用其抗腐蝕性延長保質(zhì)期，又可調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌系統(tǒng)。

SOD被視為生命科技中最具神奇魔力的酶人體內(nèi)的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敵，是機(jī)體內(nèi)氧自由基的頭號(hào)殺手，是生命健康之本。全球118位科學(xué)家發(fā)表聯(lián)合聲明：自由基是百病之源，SOD是健康之本。體內(nèi)的SOD活性越高，壽命就越長。三.SOD的生產(chǎn)1.SOD酶的提取

稱取5克大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎細(xì)胞

后，加入pH7.8,0.05mol/L的磷酸緩沖液

（pH7.8）15ml，繼續(xù)研磨20min,使SOD酶充分

溶解到緩沖液中，然后6000r/min冰凍離心

15min，放棄沉淀，取上清液。

2.去除雜蛋白

上清液中加入0.25倍體積的氯仿——乙醇混合液

攪拌15min,6000r/min離心15min，放棄沉淀，

得到的上清液即是粗酶液

3.SOD酶的沉淀分離

粗酶液在攪拌下緩慢加入固體硫酸銨至飽和濃

度60%，持續(xù)攪拌15min，6000r/min離心

15min，得到SOD酶沉淀4.

將沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L的磷酸緩沖液

5mL中，然后6000r/min離心15min，放棄沉

淀，取上清液，用凝膠sephacylS-200進(jìn)行純

化，然后超濾濃縮。5.

用紫外分光光度計(jì)測(cè)定濃液的蛋白含量6.

將濃縮冷凍干燥后即得成品。

儀器

紫外分光光度計(jì)、pH計(jì),離心機(jī)試劑

⑴0.05mol/L連苯三酚溶液：稱取3.15g連苯三酚用

0.01mol/L鹽酸溶液溶解并定容至500ml

⑵pH=8.3Tris-HCl緩沖溶液

①0.1mol/L三羥甲基氨基甲烷（Tris）溶液:

NH2C(CH2OH)3121.14

取12.114g,溶解，定容至100ml

②0.1mol/L鹽酸:取8.6(9)ml濃鹽酸，稀釋至

1000ml

③50毫升0.1mol/L三羥甲基氨基甲烷（Tris）溶

液

19.9_毫升0.1mol/L鹽酸混勻并稀釋至100

毫升。

(保存溫度:常溫密封避光保存)

沖液，迅速搖勻倒入光徑1cm的比色杯中，在325nm波長下于恒溫池中每隔30s測(cè)A值一次計(jì)算線形范圍內(nèi)，每1minA的增值，此即連苯三酚的自氧化速率，要求自氧化速率控制在0.07OD/min3.酶活測(cè)定測(cè)定方法與測(cè)連苯三酚自氧化速率相同，取1.5ml緩沖液，在25℃水浴中保溫15min,加入3ml酶液，加入10連苯三酚液，迅速搖勻空白：取1.5ml緩沖液，在25℃水浴中保溫15min,加入3ml酶液，加入10緩沖液，迅速搖勻計(jì)算加酶后連苯三酚自氧化速率

4.結(jié)果計(jì)算樣品酶活單位表示，SOD酶活單位（U）/g鮮重樣品酶活單位=式中——酶樣品在325nm處每分鐘光密度變化值V——反應(yīng)液體積n——酶液稀釋倍數(shù)（若酶液足夠多，可不稀釋即n為1）五.注意事項(xiàng)1.SOD的安全性大量試驗(yàn)和臨床應(yīng)用表明，無論何種給藥方式，除罕見的超敏反應(yīng)外，SOD對(duì)人體無毒性。雖然SOD是Mr在30000以上的蛋白質(zhì)，但卻未發(fā)現(xiàn)具有抗原性，其原因也正在進(jìn)一