白細(xì)胞血小板配血試驗課件

免疫血液學(xué)----白細(xì)胞血小板輸血前交叉配血試驗一、人類白細(xì)胞抗原

人類白細(xì)胞抗原代表個體特異性與移植排斥有關(guān)的抗原稱為組織相容性抗原或移植抗原-MHS編碼MHS的基因組稱為主要組織相容性復(fù)合物(MHC)人類的MHC是首先在白細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的，稱為人類白細(xì)胞抗原(humanleukocyteantigen，HLA)HLA的研究歷史最早發(fā)現(xiàn)人類白細(xì)胞抗原者為Dausset-1954年HLA不僅僅是白細(xì)胞特異性同種抗原。它是分布廣泛的組織抗原。HLA的遺傳

單體型遺傳存在基因重組多態(tài)性現(xiàn)象連鎖不平衡

HLA抗體及抗體檢測

臨床上HLA抗體多由妊娠、輸血或器官移植等免疫產(chǎn)生HLA在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

一、HLA與輸血HLA與非溶血性輸血反應(yīng)HLA與血小板輸注二、HLA與器官移植(一)腎移植(二)骨髓移植三、HLA與親子鑒定血小板血型相關(guān)抗原：主要與紅細(xì)胞的ABO血型系統(tǒng)以及人類白細(xì)胞抗原(HLA)有關(guān)特異性抗原：由血小板特有的抗原決定簇組成，表現(xiàn)出血小板獨特的遺傳多態(tài)性，在其他細(xì)胞和組織上不能發(fā)現(xiàn)血小板血型血小板表面存在紅細(xì)胞ABO系統(tǒng)的A抗原和B抗原,可能是從血漿中吸附上的。是否還存在其他紅細(xì)胞血型抗原尚在探討之中在我國，通常進(jìn)行ABO同型血小板輸血配合性血小板輸注ABO同型血小板抗體的篩選交叉配合試驗：確保供受體的血小板型和HLA型的配合血小板血型的臨床意義一.血小板輸注無效性(PTR)二.輸血后紫癜(PTP)三.新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜(NAITP)四.血小板的自身免疫作用---特發(fā)性血小板減少性紫癜(簡稱ITP)血小板同種抗體與輸血

1.ABO血型的選擇

一般需要做主側(cè)或次側(cè)的交叉配血，最好輸注ABO血型配合的血小板2．Rh血型的選擇

D陰性的患者，最好要避免用D陽性獻(xiàn)血者的濃縮血小板。對育齡婦女可以注射Rh免疫球蛋白

三、輸血前免疫血液學(xué)檢查

目的:供者與患者的血液

安全有效相容標(biāo)本一、標(biāo)本采集二、紅細(xì)胞懸液的配制三、標(biāo)本的保存標(biāo)本一、標(biāo)本采集1．紅細(xì)胞標(biāo)本-ACD或CPD、(Na2-EDTA)抗凝靜脈血少數(shù)患者有一種自身抗體--不宜用抗凝血液作為紅細(xì)胞抗原標(biāo)本

2．血清標(biāo)本

一般實驗避免使用血漿配血試驗用血清——不超過72小時三、標(biāo)本的保存1．血清標(biāo)本不稀釋的血清標(biāo)本如加有防腐劑可在4℃保存數(shù)月,在一20℃以下可保存數(shù)年如用生理鹽水稀釋的血清只限當(dāng)天使用2．紅細(xì)胞標(biāo)本一般試驗用的凝血標(biāo)本要在5天之內(nèi)使用，以不溶血為準(zhǔn)。如用保存液可保存3周用鹽水配制的紅細(xì)胞懸液只能在當(dāng)天使用

供受雙方ABO、Rh血型鑒定ABO血型正反定型Rh血型鑒定｝試管法抗A、抗B以外的所有抗體統(tǒng)稱為不規(guī)則抗體。常見于多次輸血的人群不規(guī)則抗體的篩選和鑒定交叉配血試驗受者血清+供者紅細(xì)胞受者紅細(xì)胞+供者血清方法主側(cè)次側(cè)鹽水介質(zhì)聚凝胺介質(zhì)抗人球蛋白介質(zhì)（1）低離子聚凝胺交叉配血技術(shù)原理：聚凝胺（Polybrene），一種高價陽離子季胺鹽多聚物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞之間距離減少，能引起正常紅細(xì)胞可逆性的非特異性凝集。如果使抗體致敏的紅細(xì)胞被聚凝胺凝集，則凝集不可逆。試驗分步原理血清紅細(xì)胞懸液加入LIM混合液Polybrene受體血型抗原IgG抗體迅速致敏試驗分步原理Polybrene上海市血液中心血Polybrene分子連接到紅細(xì)胞上加入Polybrene試驗分步原理離心Polybrene拉近紅細(xì)胞間的距離并造成凝集1個IgG分子同時連接兩個紅細(xì)胞試驗分步原理加入重懸液減弱了Polybrene的作用重懸液上海市血液中心血加重懸液試驗分步原理已被血型抗體致敏的紅細(xì)胞不會散開陽性結(jié)果試驗分步原理未被血型抗體致敏的紅細(xì)胞很快散開陰性結(jié)果注意事項按比例加樣致敏時間觀察非特異性凝集觀察結(jié)果關(guān)于冷凝集聚凝胺方法的特點靈敏：靈敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。速度快：實驗時間5分鐘左右。準(zhǔn)確：準(zhǔn)確度高于酶試驗。不適合于Kell系統(tǒng)抗體的檢測，但黃種人群中Kell系統(tǒng)抗體極罕見。操作要求較高（2）微柱凝膠技術(shù)微柱凝膠技術(shù)

凝膠技術(shù)的原理

反應(yīng)室外管壁反應(yīng)室底孔內(nèi)套管壁凝膠或玻璃珠親和凝膠試劑或鹽水特殊粘液凝膠技術(shù)的原理：A、反應(yīng)室：下端底孔很小，液體在孵育過程中不會流入下方微柱中。B、試劑或鹽水層：紅細(xì)胞在離心力作用下穿越該層，紅細(xì)胞與反應(yīng)室中的血清分離并與該層液體中的試劑反應(yīng)。C、粘液：親和柱中有一層粘液，作用與“試劑或鹽水層”相同。1）敏感：在凝膠試驗中常能發(fā)現(xiàn)其它試驗不易發(fā)現(xiàn)的問題。2）結(jié)果可保存凝膠試驗的結(jié)果可在冰箱中保存數(shù)日，并且較容易被拍成照片。3）操作技術(shù)要求較低：凝膠試驗的操作主要是簡單的加樣和判讀，孵育、離心過程都有專門的設(shè)備。其中能被人為改變的因素較少。4)無需洗滌的抗球蛋白試驗：

優(yōu)點：缺點：凝膠試驗方法成本較高，需要特殊設(shè)備。高度敏感有時也會造成不便：有報導(dǎo)應(yīng)用凝膠試驗后，1/300的庫血直抗陽性。2不完全抗體可以結(jié)合在紅細(xì)胞表面,但是不能和兩個紅細(xì)胞同時結(jié)合（致敏）。3加入抗人球蛋白1紅細(xì)胞彼此之間有一定的間距4抗人球蛋白可以同時和兩個不完全抗體的FC段結(jié)合，從而把紅細(xì)胞連接在一起。（3）抗人球蛋白交叉配血法示意圖1.試劑紅細(xì)胞(表面標(biāo)有抗血小板抗體)2.加入供者血小板3.試劑紅細(xì)胞和血小板特異性結(jié)合4.加入受者的血清,如有抗血小板抗體,則和血小板發(fā)生特異性結(jié)合5.凝膠柱中的抗人球蛋白捕獲抗血小板抗體,導(dǎo)致試劑紅細(xì)胞凝集。