微生物限度檢查操作規(guī)程

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文件編號：版 文件名：微生物限度檢查法制定人：制定日期：分發(fā)份數(shù)：3審核人：審核日期：頒發(fā)部門：GMP批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期：生效日期：分發(fā)至：質(zhì)量保證部、質(zhì)監(jiān)科、質(zhì)量檢驗中心目的：標(biāo)準(zhǔn)微生物限度檢查操作，以保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。范圍：微生物限度檢查。責(zé)任：質(zhì)量保證部、質(zhì)監(jiān)科、質(zhì)量檢驗中心、檢驗操作人員。內(nèi)容：干凈度級別檢查方法通常承受塵粒數(shù)及浮游菌數(shù)或沉降菌數(shù)測定法。塵粒數(shù)/m3≥0.5≥5100≥0.5≥5100≤3,500≤0≤510000≤350,000≤2023≤100100000≤3,500,000≤20,000≤500(GB/T16294-1996)10010000100000

個/(∮90mm，0.5h)≤1≤3≤10浮游菌數(shù)測試方法〔GB/T6293—1996。沉降菌數(shù)測定〔Ⅱ法〕．無菌室操作臺消毒擦拭處理后，先啟動層流凈扮裝置30min，經(jīng)314.3.2．無菌操作臺或凈化工作臺要定期檢測其干凈度，應(yīng)到達(dá)100效及中效過濾器應(yīng)依據(jù)檢測狀況，必要時予以更換處理。消毒處理 無菌室應(yīng)在每次操作前后均用0.1%苯扎溴銨溶液或其他消毒液擦拭操作ABC

文件編號：版 臺及可能污染的死角。開動層流凈扮裝置，同時用紫外殺菌燈照耀30min。其他設(shè)備凈化工作臺、恒溫培育箱(30～35℃)、生化培育箱(25～25℃)，微波爐(或(3000~8000r/min)、恒溫水浴、電熱枯燥箱(250～供試品抽樣、保存及檢驗量抽樣〔以備復(fù)試。的包裝不得作為樣品。凡能從藥品〔觀看出長螨接判為不合格品，無需再抽樣檢驗。保存保存條件不妥引起致死，損傷或生殖。試品。檢驗量全部劑型的檢驗時均需取2個以上包裝單位。固體及半固體〔粘稠性供試品〕制劑檢驗量為10g。液體制劑檢驗量為10ml。3g，6ml，3ml，5g。操作方法試驗前預(yù)備〔1ml10ml稀釋劑等移至無菌室內(nèi)。每次試驗所用物品必需事先打算，預(yù)備足夠用量，避開操作中出入操作間。編號后將全部外包裝〔牛皮紙〕去掉。30min。0.1%苯扎ABC

文件編號：版 溴銨溶液或其他消毒液洗手或用乙醇棉擦手，穿戴無菌衣、帽、口罩、手套?！惨部捎靡掖济耷颉巢潦霉┰嚻菲?、盒、袋等的開口處四周，待干后用滅菌手術(shù)鑷或剪將供試品啟封。供試液的制備液體供試品取供試品10固體、半固體或粘稠供試品稱取供品10g，置于勻漿杯或適當(dāng)滅菌容器中，參與〔3000～5000r/，2～4min〕,振蕩器或乳缽研磨等方法分散混勻。供試液的稀釋〔10倍遞增稀釋法〕〔此時操作一般為：左手執(zhí)試管并10ml。加完稀釋劑后，試管塞應(yīng)馬上塞上。11ml1：101ml，參與裝有9ml1：10、1：100、1：1000〔31在作101102注平皿 在進(jìn)展10倍遞增稀釋的同時，以該稀釋級吸管，吸取各級稀釋液各1ml至每個滅菌平皿中〔從高稀釋級至低稀釋級吸液時可用1支吸管，每一稀釋級注2～3個平〔此時，一般為左手執(zhí)平皿，將蓋半開，右手執(zhí)吸管1ml1支1ml1ml，分別流氓行為個平皿中。其中22YPD2數(shù)陰性比照)。紅鈉瓊脂〕熔化，冷至約45℃15ml，以順時針或反時針方向快速旋轉(zhuǎn)平皿混勻，留意，混勻時勿將培育基濺到皿邊及皿蓋上，置操作臺待凝。培育細(xì)菌計數(shù)平板倒置于30～35℃培育箱中培育48小時。霉菌、酵母菌計數(shù)平板ABC

文件編號：版 25～2872菌落計數(shù)背景，認(rèn)真觀看。勿漏計細(xì)小的瓊脂層內(nèi)和平皿邊緣生長的菌落。留意細(xì)菌菌落與霉菌菌落和酵母菌菌落以及它們與供試品顆粒、培育基沉淀物、氣泡等的鑒別。必要時用放大鏡或用低倍顯微鏡直接觀看或挑取可疑物涂片鏡檢。菌數(shù)內(nèi)。排解的方法需按該制劑微生物品種而定，并須觀看菌落特征及染色形態(tài)。后有時形成數(shù)量很多且難與菌落肉眼相鑒別的有形物。為了有利于菌落計數(shù)，可在操作時將適宜稀釋級的供試液多增加注皿1～2，注皿后不經(jīng)培育而放置于冰箱〔勿結(jié)凍〕計數(shù)菌落時作為比照?；蛴?.001％TTC開來。襯于白色背景上易于點計。22假設(shè)平板生長有鏈狀菌落，菌落間無明顯界限，一條鏈作作為一個菌落計，但假設(shè)鏈上消滅性狀與鏈狀菌落不同的可辨菌落時，仍應(yīng)分別計數(shù)，假設(shè)生長集中的較大的片狀菌落或花斑樣菌落，一般不宜作為計數(shù)用。2個或3151210，4～12，5～14，6～15。超出以上范圍即視為操作誤差，不得作為計數(shù)依據(jù)。以下狀況下、點計菌落時間需提前或延長培育時間：2448點計〔點計霉菌菌落數(shù)時，動作宜輕，勿反復(fù)翻轉(zhuǎn)平板或造成震驚，使早期形成的孢子散落在平板的其他部位，又萌生的霉菌菌落，導(dǎo)致計數(shù)誤差。4～7天，再點計菌落數(shù)。ABC

文件編號：版 對有疑議的供試品以YPD培育基作酵母菌計數(shù)時，可培育至1周再點計菌落數(shù)。霉菌菌落數(shù)，一般液體供試品按玫瑰紅鈉瓊脂平板點計霉菌及酵母菌總數(shù)。菌數(shù)報告規(guī)章30～10030～300〔30～100〕之間，則將該稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。如有2個相鄰稀釋級平均菌落數(shù)在30~300〔30~100〕時，則按比值計算。當(dāng)比值以稀釋倍數(shù)報告。高稀釋級平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)低稀釋級平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)30～300〔30～100〕2算級間比值報告。300〔100〕以上，則按最高稀釋級平均菌落數(shù)乘以稀釋4.7.8.630～30〔30～10030的稀釋級平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告。1數(shù)﹤10/gml。如供試品原液平板均未生長霉菌及酵母菌，報告未檢出霉菌及酵母菌/ml。平均菌落數(shù)時，應(yīng)以培育基稀釋法重測定，按測定結(jié)果報告菌數(shù)。培育基稀釋法：取低稀釋級供試品〔1：10〕31ml55個以上平皿中〔0.2ml＜0.2ml115ml，后，倒置培育，計數(shù)。1ml33份低稀釋級供試液菌落數(shù)的平均值乘以稀釋倍數(shù)報告。結(jié)果報告ABC

文件編號：版 菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按實有數(shù)據(jù)報告。菌落數(shù)大于100時，取兩位有效數(shù)字報告，第三位按數(shù)字修約規(guī)章處理。4.7.11.復(fù)試 一項一次檢驗不合格應(yīng)重取2倍包裝量供試品，依法作單項復(fù)試兩份，以三次檢驗結(jié)果的均值報告。留意事項4.81.任何器物，滅菌吸管不得用口吸。1細(xì)胞生殖或死亡。供試液稀釋及注皿時應(yīng)取均勻的供試液，以免造成試驗誤差。為避開細(xì)菌菌落集中生長，宜實行以下方法處理：1～2后合蓋，放入培育箱培育；4.8.4..2加TTC 養(yǎng)分瓊脂內(nèi)參與滅菌1%TTC溶液1ml〔最終濃度為0.001%，混