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文檔簡介
食品中細菌總數(shù)的檢驗實驗步驟及注意事項一、實驗目的要求1、了解細菌總數(shù)檢驗的意義。234、熟練無菌操作技術。二、原理1g1ml據(jù)。菌落總數(shù)并不表示樣品中實際存在的所有細菌總數(shù),菌落總數(shù)并不能區(qū)分其中細菌的種類,所以有時被稱為雜菌數(shù),需氧菌數(shù)等。三、試劑和儀器(一)最先準備的器材(清洗、烘干、包扎、滅菌)規(guī)格名稱1、500ml2、500ml3、250ml4、18×180mm1123用途:稀釋樣品配制:生理鹽水配制:營養(yǎng)瓊脂稀釋樣品倒營養(yǎng)平板5、1ml移液管5支6、直徑為90mm平皿10套7、250ml量筒1支8、玻璃珠:直徑約5mm(二)應滅菌、消毒的器材111管膠頭4只,開瓶器(三)應制備的培養(yǎng)基培養(yǎng)基總量所用容器1、0.85%NaCl1300ml/500ml2、平板計數(shù)瓊脂(PCA)培養(yǎng)基:2100ml/250ml(一)、基本操作過程:樣品稱量→→樣品稀釋→→傾注平皿→→培養(yǎng)48小時→→計數(shù)報告。(二)、樣品的稀釋(樣品的處理)樣品:袋裝乳粉外包裝消毒→→無菌稱樣品25g→→加無菌生理鹽水→→加蓋振蕩搖均勻175%225mL入(先加入少量生理鹽水將乳粉調成糊狀,再全部加入,以免奶粉結團),搖法(5040cm)1:108000~10000r/min1:1021ml1∶101ml,9ml1∶10031ml101ml42~3101ml25、用1ml生理鹽水作空白對照試驗,做2個平皿。?注意:①吸管尖端不要觸及瓶口或試管口外部,也不得觸及管內(nèi)稀釋液。2.5cm管尖與容器內(nèi)壁緊貼。③進行稀釋時,應使吸管內(nèi)的液體沿管壁小心流加入,以免增加檢液。④每遞增稀釋一次,即換用一支1ml滅菌吸管。(三)、倒平板46℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(水浴保溫)15ml,并轉動平皿使混合均勻。注意:①培養(yǎng)基不能觸及平皿口邊沿,加入培養(yǎng)基后可正反兩個方向旋轉,但不可用力過度,以免濺起觸及上蓋。②檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿,所用時間不宜超過20min。(四)、培養(yǎng)36±1℃48h平皿內(nèi)菌落數(shù)目,乘以稀釋倍數(shù),即得每克(每毫升)樣品所含菌落總數(shù)。注意:(1)瓊脂凝固后,就立即將平板放入培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng),以免細菌蔓延生長。(2)0~4℃24h不同產(chǎn)品菌落總數(shù)測定的培養(yǎng)時間:肉、乳、蛋及制品:37℃48h:30℃48h:味品、糕點、果脯、酒類等:37℃24h1、平皿菌落數(shù)的選擇30~300300其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀2,以代表一個平板的菌落數(shù)。當平板上有鏈狀菌落生長時,如呈鏈狀生長的菌落之間無任何明顯落計算,不要把鏈上生長的每一個菌落分開計數(shù)。2、菌落總數(shù)的計算若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi),計算兩個平g(mL)果。若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時,按如下公式計算:N=∑C/(n1+0.1n2)d…………(1)式中:N?DC?D板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和;nl?Dd?D(第一稀釋度)。若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均>300乘以稀釋倍數(shù)計算。若所有稀釋度平板菌落數(shù)均<30,釋倍數(shù)計算。(5)若所有稀釋度平板均無菌落生長,則應按<1(6)30~300>300,有的又<30,300303、報告方法1~100菌落數(shù)≥10010若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù),則報告菌落蔓延。若空白對照上有菌落生長,則此次檢測結果無效。CFU/gCFU/mL四、實驗內(nèi)容(一)、基本操作過程:樣品稱量→→樣品的稀釋→→傾注平皿→→培養(yǎng)5天→→計數(shù)報告。(二)、樣品的稀釋(樣品的處理)樣品:糖果25g45℃225mL,待溶化后檢驗。175%225mL(5040cm)30min1:10釋液。210ml1∶1010ml,1ml5031ml1∶101ml,9ml1ml51∶10041ml1∶1001ml,9ml101ml5310增稀釋的同1ml2皿。6、用1ml無菌水作空白對照試驗,做2個平皿。?注意:①加入檢樣液時,吸管尖端不要觸及瓶口或試管口外部,也不得觸及管內(nèi)稀釋液,并將吸管內(nèi)的液體沿管壁小心流加入,以免增加檢液。2.5cm管尖與容器內(nèi)緊貼。③每遞增稀釋一次,即換用另一支1ml滅菌吸管。(三)、倒平板46℃的培養(yǎng)基(46℃溫)15ml,并正反轉動平皿使混合均勻。?注意:①培養(yǎng)基不能觸及平皿口邊沿,加入培養(yǎng)基后可正反兩個方向旋轉,但不可用力過度,以免濺起觸及上蓋。②檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿,所用時間不宜過長。(四)、培養(yǎng):25~28℃53510CFU~150
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