食品中細菌總數(shù)的檢驗實驗步驟及注意事項

食品中細菌總數(shù)的檢驗實驗步驟及注意事項一、實驗目的要求1、了解細菌總數(shù)檢驗的意義。234、熟練無菌操作技術。二、原理1g1ml據(jù)。菌落總數(shù)并不表示樣品中實際存在的所有細菌總數(shù)，菌落總數(shù)并不能區(qū)分其中細菌的種類，所以有時被稱為雜菌數(shù)，需氧菌數(shù)等。三、試劑和儀器（一）最先準備的器材（清洗、烘干、包扎、滅菌）規(guī)格名稱1、500ml2、500ml3、250ml4、18×180mm1123用途:稀釋樣品配制:生理鹽水配制:營養(yǎng)瓊脂稀釋樣品倒營養(yǎng)平板5、1ml移液管5支6、直徑為90mm平皿10套7、250ml量筒1支8、玻璃珠：直徑約5mm（二）應滅菌、消毒的器材111管膠頭4只，開瓶器（三）應制備的培養(yǎng)基培養(yǎng)基總量所用容器1、0.85%NaCl1300ml/500ml2、平板計數(shù)瓊脂（PCA）培養(yǎng)基：2100ml/250ml（一）、基本操作過程：樣品稱量→→樣品稀釋→→傾注平皿→→培養(yǎng)48小時→→計數(shù)報告。（二）、樣品的稀釋（樣品的處理）樣品：袋裝乳粉外包裝消毒→→無菌稱樣品25g→→加無菌生理鹽水→→加蓋振蕩搖均勻175%225mL入（先加入少量生理鹽水將乳粉調成糊狀，再全部加入，以免奶粉結團），搖法（5040cm）1:108000~10000r/min1：1021ml1∶101ml，9ml1∶10031ml101ml42～3101ml25、用1ml生理鹽水作空白對照試驗，做2個平皿。?注意：①吸管尖端不要觸及瓶口或試管口外部，也不得觸及管內(nèi)稀釋液。2.5cm管尖與容器內(nèi)壁緊貼。③進行稀釋時，應使吸管內(nèi)的液體沿管壁小心流加入，以免增加檢液。④每遞增稀釋一次，即換用一支1ml滅菌吸管。（三）、倒平板46℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（水浴保溫）15ml，并轉動平皿使混合均勻。注意：①培養(yǎng)基不能觸及平皿口邊沿，加入培養(yǎng)基后可正反兩個方向旋轉，但不可用力過度，以免濺起觸及上蓋。②檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿，所用時間不宜超過20min。（四）、培養(yǎng)36±1℃48h平皿內(nèi)菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得每克（每毫升）樣品所含菌落總數(shù)。注意：（1）瓊脂凝固后，就立即將平板放入培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)，以免細菌蔓延生長。（2）0～4℃24h不同產(chǎn)品菌落總數(shù)測定的培養(yǎng)時間：肉、乳、蛋及制品：37℃48h：30℃48h：味品、糕點、果脯、酒類等：37℃24h1、平皿菌落數(shù)的選擇30～300300其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀2，以代表一個平板的菌落數(shù)。當平板上有鏈狀菌落生長時，如呈鏈狀生長的菌落之間無任何明顯落計算，不要把鏈上生長的每一個菌落分開計數(shù)。2、菌落總數(shù)的計算若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平g（mL）果。若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按如下公式計算：N=∑C/（n1+0.1n2）d…………（1)式中：N?DC?D板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；nl?Dd?D（第一稀釋度）。若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均>300乘以稀釋倍數(shù)計算。若所有稀釋度平板菌落數(shù)均<30，釋倍數(shù)計算。（5）若所有稀釋度平板均無菌落生長，則應按<1（6）30～300>300，有的又<30，300303、報告方法1～100菌落數(shù)≥10010若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則報告菌落蔓延。若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結果無效。CFU/gCFU/mL四、實驗內(nèi)容（一）、基本操作過程：樣品稱量→→樣品的稀釋→→傾注平皿→→培養(yǎng)5天→→計數(shù)報告。（二）、樣品的稀釋（樣品的處理）樣品：糖果25g45℃225mL，待溶化后檢驗。175%225mL（5040cm）30min1:10釋液。210ml1∶1010ml，1ml5031ml1∶101ml，9ml1ml51∶10041ml1∶1001ml，9ml101ml5310增稀釋的同1ml2皿。6、用1ml無菌水作空白對照試驗，做2個平皿。?注意：①加入檢樣液時，吸管尖端不要觸及瓶口或試管口外部，也不得觸及管內(nèi)稀釋液，并將吸管內(nèi)的液體沿管壁小心流加入，以免增加檢液。2.5cm管尖與容器內(nèi)緊貼。③每遞增稀釋一次，即換用另一支1ml滅菌吸管。（三）、倒平板46℃的培養(yǎng)基（46℃溫）15ml，并正反轉動平皿使混合均勻。?注意：①培養(yǎng)基不能觸及平皿口邊沿，加入培養(yǎng)基后可正反兩個方向旋轉，但不可用力過度，以免濺起觸及上蓋。②檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿，所用時間不宜過長。（四）、培養(yǎng)：25～28℃53510CFU～150