微生物與基因工程

微生物與基因工程第1頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六限制性內(nèi)切酶的命名與分類分類：根據(jù)識(shí)別和切割DNA的特點(diǎn)，可將限制酶分為：I、II、III三種類型命名：（1）屬名的頭一個(gè)字母和種名的頭兩個(gè)字母組成三個(gè)斜體字母加以表示。如大腸桿菌Eco。（2）用一個(gè)寫(xiě)在右下方的標(biāo)注字母代表菌株或型。EcoR.（3）如果同一菌株先后發(fā)現(xiàn)幾個(gè)不同的酶，則用羅馬數(shù)字加以表示。EcoR.I第2頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六

由3個(gè)亞基組成，即有內(nèi)切酶活性，又有甲基化酶活性；輔助因子，二價(jià)金屬鎂離子，ATP、SAM(S－腺苷甲硫氨酸)；他們的切割位點(diǎn)基本上是隨機(jī)的，每1000～5000個(gè)核苷酸切割成約75個(gè)核苷酸缺口；基因工程中沒(méi)有實(shí)際用處。限制性核酸內(nèi)切酶的基本特性I型酶：第3頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六有兩個(gè)亞基（M和R）組成的蛋白質(zhì)復(fù)合物，即有內(nèi)切酶活性，又有甲基化酶活性，M亞基負(fù)責(zé)位點(diǎn)的識(shí)別與修飾，R亞基具有核酸酶的活性。輔助因子，二價(jià)金屬鎂離子，ATP、SAM(S－腺苷甲硫氨酸)。切割位點(diǎn)在識(shí)別序列之外，兼有切割和修飾雙重作用?；蚬こ讨袥](méi)有實(shí)際用處。III型酶：第4頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一般，II型限制酶能識(shí)別由4～6個(gè)核苷酸組成的特定序列。大多數(shù)II型限制酶切割位點(diǎn)的一個(gè)顯著特點(diǎn)是他們具有雙重旋轉(zhuǎn)對(duì)稱的結(jié)構(gòu)或回紋結(jié)構(gòu)。II型限制酶切割DNA后，均產(chǎn)生含5ˊ磷酸基和3ˊ羥基的末端。5ˊ-GAATTC-3ˊ3ˊ-CTTAAG-5ˊ對(duì)稱軸II型酶：第5頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六II型酶的3個(gè)基本特點(diǎn)：（3）斷裂結(jié)果形成的DNA片斷形成具有互補(bǔ)的單鏈延伸末端。（1）是在DNA雙鏈分子上有特異性識(shí)別并容易切割的序列部位，使被切割的DNA分子形成單鏈的斷裂。(2)是在DNA分子上兩個(gè)單鏈斷裂部位通常不是彼此直接相對(duì)的。第6頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六限制酶作用產(chǎn)生的DNA片斷主要有兩種形式：

（1）粘性末端：是指在限制酶作用下DNA分子形成的具有互補(bǔ)堿基的單鏈末端，它們能夠通過(guò)互補(bǔ)堿基間的配對(duì)重新環(huán)化。5ˊ-GAATTC-3ˊ3ˊ-CTTAAG-5ˊ5ˊ-GAATTC-3ˊ3ˊ-CTTAAG-5ˊ（2）平末端：限制酶是在識(shí)別序列的對(duì)稱軸上切割，DNA片段具有平末端。

第7頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六影響核酸內(nèi)切酶活性的因素同裂酶（isoschizomers）:有些來(lái)源不同的限制酶確識(shí)別和切割相同的序列。同尾酶（isocaudomers）:有些來(lái)源不同的限制酶,識(shí)別及切割序列各不相同，但卻能產(chǎn)生相同的粘性末端。（1）DNA的純度。（2）DNA的甲基化程度。（3）酶切消化反應(yīng)的溫度。（4）DNA的分子結(jié)構(gòu)。（5）核酸內(nèi)切酶的緩沖液。第8頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六2、DNA連接酶連接方式：（1）用T4或E.coliDNA連接酶可連接具有互補(bǔ)粘性末端的DNA片斷；（2）用T4DNA連接酶連接具有平末端的DNA片斷；（3）先在DNA片段末端加上人工接頭，使其形成粘性末端，然后再行連接。定義：是一種能夠催化DNA中相鄰的3ˊ－OH和5ˊ磷酸基團(tuán)末端之間形成磷酸二酯鍵并把兩端DNA拼接起來(lái)的一種酶。主要有兩種：T4DNA連接酶，分子量7500，粘性末端連接，NAD+（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸）作為輔助因子；DNA連接酶，分子量6800，粘性末端連接和平末端連接，Mg2+，ATP作為輔助因子。第9頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六3、DNA聚合酶主要功能:是參與DNA的修復(fù)過(guò)程。從大腸桿菌中純化出來(lái)的DNA聚合酶有三種類型：DNA聚合酶I,DNA聚合酶II,DNA聚合酶III.其中只有DNA聚合酶I同DNA的分子克隆有密切的關(guān)系。DNA聚合酶I有三種不同的酶催化活性：5ˊ3ˊ的聚合酶活性；5ˊ3ˊ核酸外切酶活性；3ˊ5ˊ核酸外切酶活性；定義：指能夠把脫氧核糖核苷酸按5ˊ3ˊ方向連續(xù)的加到雙鏈DNA分子引物鏈的3ˊ－OH末端，催化核苷酸的聚合作用，而不發(fā)生從引物模板上解離的情況。第10頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六DNA聚合酶I催化合成DNA必要條件：

（2）帶有3ˊ－OH游離集團(tuán)的引物鏈。（1）全部四種脫氧核苷5ˊ－三磷酸dNTPs和Mg2+離子。（3）DNA模板。第11頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六4、DNA修飾酶堿性磷酸酶，催化磷酸分子脫掉5ˊ磷酸集團(tuán)。5、逆轉(zhuǎn)錄酶DNA甲基化酶，轉(zhuǎn)移甲基的；T4多核苷酸激酶，催化γ－磷酸從ATP分子轉(zhuǎn)移給DNA分子；第12頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六10.5外源基因?qū)胨拗骷?xì)胞一、外源基因與載體的體外連接DNA分子體外重組技術(shù)，主要依賴于核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶的作用。注意問(wèn)題：

①實(shí)驗(yàn)步驟要盡可能簡(jiǎn)單易行。②連接形成的“接點(diǎn)”序列，應(yīng)能被一定的核酸內(nèi)切酶重新切割，以便回收插入的外源DNA片斷。③對(duì)轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯過(guò)程中密碼結(jié)構(gòu)的閱讀不發(fā)生干擾。第13頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六黏性末端連接法平末端DNA連接法接頭或銜接物連接法均聚物加尾法第14頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二、克隆載體對(duì)宿主的基本要求(4)一般為缺陷型菌株，使克隆載體DNA與宿主染色體DNA之間不發(fā)生同源重組。(1)能高效吸收外源DNA。(2)具有使外源DNA進(jìn)行高效復(fù)制的酶系統(tǒng)。(3)不具有限制酶修飾系統(tǒng)，故不會(huì)使導(dǎo)入宿主細(xì)胞內(nèi)DNA發(fā)生降解。(5)便于基因操作和篩選。(6)具有安全性(7)遺傳穩(wěn)定性高。(8)內(nèi)源水解蛋白酶缺失或蛋白酶含量低。(9)在遺傳密碼的使用上無(wú)明顯的偏好性。(10)具有較好的轉(zhuǎn)移后加工機(jī)制。第15頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六（1）、原核生物宿主4、為了便于陽(yáng)性克隆的篩選，作為克隆宿主的基因型應(yīng)與載體的基因形相對(duì)應(yīng)。要求：1、根據(jù)克隆載體性質(zhì)以及它們導(dǎo)入細(xì)胞的方式選擇相應(yīng)的宿主細(xì)胞。2、若選擇噬菌體作為克隆載體，則應(yīng)選擇對(duì)噬菌體敏感的宿主作為克隆載體的宿主。3、若用M13衍生物作為克隆載體，則應(yīng)選擇含有F因子的雄性的大腸桿菌作為宿主。5、嚴(yán)格限制載體的宿主范圍，以達(dá)到盡量避免重組體從實(shí)驗(yàn)室逃逸出去。第16頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六大腸桿菌作為宿主的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：1、遺傳背景清楚。2、單細(xì)胞生物，材料一致性強(qiáng)。3、目標(biāo)基因表達(dá)水平高。4、培養(yǎng)周期短。5、抗污染能力強(qiáng)。6、裸露的DNA，重組率高。缺點(diǎn)：1、條件致病菌。2、對(duì)真核基因缺乏有效的翻譯后加工修飾功能。3、不具真核細(xì)胞的蛋白質(zhì)折疊系統(tǒng)，細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、酶易降解空間構(gòu)象不正確的異源蛋白，造成表達(dá)產(chǎn)物不穩(wěn)定。第17頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六（2）、真核生物宿主5、能將外源基因表達(dá)產(chǎn)物分泌致培養(yǎng)基中。1、基因表達(dá)調(diào)控機(jī)理比較清楚，釀酒酵母的全部基因測(cè)序已完成，并且遺傳操作較為簡(jiǎn)單。2、具有原核細(xì)菌無(wú)法比擬的真核生物蛋白質(zhì)翻譯后修飾加工系統(tǒng)。3、不含有特異性病毒，不產(chǎn)生毒素，屬于安全型基因工程。4、大規(guī)模發(fā)酵工藝簡(jiǎn)單，成本低廉。6、酵母菌是最簡(jiǎn)單的真核生物，利用酵母菌表達(dá)動(dòng)植物基因能在相當(dāng)大程度上，闡明高等真核生物及致人類基因表達(dá)調(diào)控的基本原理及基因密碼。第18頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六原核宿主與真核宿主的比較宿主:大腸桿菌目標(biāo)蛋白表達(dá)形式:包涵體存在位置:細(xì)胞內(nèi)特點(diǎn):

1、對(duì)表達(dá)質(zhì)粒結(jié)構(gòu)要求簡(jiǎn)單。2、表達(dá)量高20％～40％。3、可表達(dá)宿主有毒或有致死效應(yīng)的蛋白。4、避免細(xì)胞內(nèi)蛋白水解的作用。5、需要溶解復(fù)性，有時(shí)不能完全復(fù)性，提高成本。第19頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六宿主:酵母菌目標(biāo)蛋白表達(dá)形式:可溶性蛋白存在位置:細(xì)胞內(nèi)、外、周質(zhì)空間特點(diǎn):1、避免復(fù)性帶來(lái)得問(wèn)題。2、不能表達(dá)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的蛋白質(zhì)，如不能形成二硫鍵。3、分離提純過(guò)程復(fù)雜。第20頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六（1）、外源DNA導(dǎo)入原核細(xì)胞

①重組DNA分子的轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染②

λ噬菌體的體外包裝與感染

①外源DNA導(dǎo)入酵母細(xì)胞原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法；電擊法（電穿孔法）

②外源DNA導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞微量注射法；電穿孔法；（2）、外源DNA導(dǎo)入真核細(xì)胞③外源DNA導(dǎo)入植物細(xì)胞微量注射法；電穿孔法；共培養(yǎng)法；基因槍法；三、外源基因?qū)胨拗骷?xì)胞第21頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六四、目的克隆的篩選與鑒定抗生素抗性選擇法如果外源的DNA片斷插入載體的位點(diǎn)位于抗生素抗性基因之外，將轉(zhuǎn)化后的重組體細(xì)胞置于含有該抗生素的培養(yǎng)基的平板上進(jìn)行培養(yǎng)，仍可長(zhǎng)出菌落。此外，還有一些自身環(huán)化的載體和沒(méi)被酶解的載體，他們的轉(zhuǎn)化細(xì)胞也能在含抗生素平板上生長(zhǎng)并形成菌落，而只有作為對(duì)照的受體細(xì)胞不能生長(zhǎng)。此法缺點(diǎn)是假陽(yáng)性高。1、載體選擇標(biāo)記的鑒定第22頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六插入失活法插入表達(dá)法在某些載體的標(biāo)記基因前面連接一段負(fù)控制序列，當(dāng)外源DNA片斷插入該負(fù)控制序列中，使負(fù)控制序列失活，因而位于下游的標(biāo)記基因解除阻遏而得到表達(dá)。第23頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六β－半乳糖苷酶顯色反應(yīng)

某些載體都攜帶有LacZ’基因一段序列，它編碼β－半乳糖苷酶的a肽，而宿主細(xì)胞為L(zhǎng)acZΔM15的突變株。將上述載體的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)在含有X-gal和IPTG平板中，由于基因內(nèi)互補(bǔ)作用，產(chǎn)生了有活性的β－半乳糖苷酶，把培養(yǎng)基中的無(wú)色X-gal分解成半乳糖和呈藍(lán)色的5－溴－4氯－靛藍(lán)，使菌落呈藍(lán)色。

若將外源DNA插入到載體上LacZ’序列中，使a肽基因失活，失去a－互補(bǔ)作用，將重組轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)在含有X-gal-IPTG平板上，菌落無(wú)色。利用β－半乳糖苷酶顯色反應(yīng)即可挑出含有外源DNA重組體的陽(yáng)性克隆。第24頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六2、目的基因序列的鑒定

將轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)在瓊脂平板上，當(dāng)形成菌落或噬菌斑后，再將硝酸纖維濾膜貼在平板上，使菌落或噬菌斑轉(zhuǎn)印到硝酸纖維膜上。反轉(zhuǎn)此濾膜并置于另一個(gè)不含菌的平板上培養(yǎng)，培養(yǎng)后的濾膜上可長(zhǎng)出菌落或噬菌斑。取出濾膜，用裂解液處理噬菌體裂解，釋放出DNA。再用堿處理，使DNA變性，經(jīng)烘烤將變性DNA固定于濾膜上。然后用放射性同位素標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行分子雜交，并經(jīng)放射自顯影，黑點(diǎn)代表雜交的菌落，即可篩選到陽(yáng)性克隆。（1）菌落（或噬菌斑）原位雜交第25頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六（2）內(nèi)切酶圖譜鑒定（4）DNA序列測(cè)定最后為確定目的基因的正確性，必需對(duì)重組的DNA進(jìn)行序列測(cè)定。將初篩選的陽(yáng)性克隆小量培養(yǎng)后，提取重組質(zhì)?；蛑亟M噬菌體DNA，用1～2種內(nèi)切酶酶切，然后進(jìn)行凝膠電泳，檢測(cè)插入DNA片段大小。（3）PCR鑒定通過(guò)與插入片段兩側(cè)互補(bǔ)的引物，以重組質(zhì)粒DNA作為模板進(jìn)行PCR分析，可快速檢測(cè)出插入DNA片斷大小。第26頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六3、基因表達(dá)產(chǎn)物的鑒定如果表達(dá)產(chǎn)物是一種蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)的一部分，它具有抗原性可與其特異性抗體發(fā)生免疫反應(yīng)。將平板上的克隆轉(zhuǎn)移到濾膜上，處理濾膜使菌體裂解，釋放出蛋白質(zhì)，固定于濾膜上，加入標(biāo)記抗體。如果抗體用放射性同位素標(biāo)記，則免疫反應(yīng)后進(jìn)行自顯影；若加入的抗體用酶偶聯(lián)（酶標(biāo)），那末此酶就可將無(wú)色底物水解成有色底物。（1）表達(dá)產(chǎn)物免疫活性測(cè)定第27頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六（2）表達(dá)產(chǎn)物生物活性檢查可根據(jù)表達(dá)產(chǎn)物的不同情況采用不同的方法檢測(cè)其生物活性。若表達(dá)產(chǎn)物是一種酶，則可測(cè)定其酶活性；若所表達(dá)蛋白質(zhì)是一種酶抑制劑，則可測(cè)定其抑制酶活性能力的大小。（3）表達(dá)產(chǎn)物氨基酸序列測(cè)定測(cè)定表達(dá)產(chǎn)物“N”端氨基酸序列，對(duì)表達(dá)產(chǎn)物的鑒定具有特別重要的意義。第28頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六10.6外源基因在細(xì)菌中的表達(dá)真核細(xì)胞基因在原核細(xì)胞中表達(dá)時(shí)存在的問(wèn)題（1）真核生物的啟動(dòng)子不能被原核細(xì)胞的RNA聚合酶所識(shí)別；（2）真核生物的mRNA上沒(méi)有SD序列，因此不能被原核細(xì)胞核糖體結(jié)合；（3）真核生物的基因含有內(nèi)含子，原核細(xì)胞缺乏將它們的轉(zhuǎn)錄物進(jìn)行拼接加工的機(jī)制；（4）真核細(xì)胞的基因產(chǎn)物，往往需要翻譯后加工，原核細(xì)胞缺乏有關(guān)的加工酶；（5）真核基因表達(dá)的蛋白質(zhì)易被原核細(xì)胞蛋白酶所降解等等；第29頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六原核細(xì)胞表達(dá)真核生物基因注意的問(wèn)題（1）基因的編碼區(qū)必需是連續(xù)的，因此要切除內(nèi)含子的cDNA；（2）基因必須置于原核細(xì)胞啟動(dòng)子、終止子和SD序列的控制之下，才能被宿主的轉(zhuǎn)錄與翻譯系統(tǒng)有效識(shí)別；（3）產(chǎn)生的mRNA必須相對(duì)穩(wěn)定并能進(jìn)行有效翻譯和蛋白質(zhì)折疊。第30頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一、外源基因的轉(zhuǎn)錄1、啟動(dòng)子（promoter）啟動(dòng)子（promoter）：是指RNA聚合酶結(jié)合于DNA并起始合成RNA的一段DNA控制序列。原核基因啟動(dòng)子位于轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)上游，由兩端彼此分開(kāi)且又高度保守的核心序列組成。2、轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)和調(diào)控誘導(dǎo)物誘導(dǎo)溫度誘導(dǎo)RNA聚合酶調(diào)節(jié)3、轉(zhuǎn)錄終止子是指一段基因或操縱子的3′端，具有終止轉(zhuǎn)錄功能的特定DNA序列。第31頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二、外源基因的翻譯1、核糖體結(jié)合位點(diǎn)：在大腸桿菌中，核糖體結(jié)合位點(diǎn)包括起始密碼子及位于起始密碼子上游3～11bp處，3～9bp的序列。2、密碼子的偏愛(ài)性：在原核生物細(xì)胞中，對(duì)應(yīng)于tRNA豐富的密碼子稱為偏愛(ài)密碼子，而對(duì)應(yīng)與tRNA稀少的密碼子稱為稀有密碼子。3、終止密碼子：是指一端位于基因或操縱子的3’末端，具有轉(zhuǎn)錄終止功能的特定DNA序列。第32頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六三、外源基因的表達(dá)產(chǎn)物

所謂非融合蛋白是指外源蛋白不與宿主蛋白融合，使其自身單獨(dú)表達(dá)。1、非融合蛋白表達(dá)為了在原核細(xì)胞中表達(dá)非融合蛋白，可將帶有起始密碼子ATG的真核基因插入到合適的原核啟動(dòng)子和SD序列下游。經(jīng)翻譯和轉(zhuǎn)錄，就可在原核細(xì)胞中，表達(dá)出非融合蛋白。第33頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六2、防止非融合蛋白降解的措施非融合蛋白表達(dá)的優(yōu)點(diǎn)：能夠直接產(chǎn)生天然的外源蛋白。缺點(diǎn)：易被宿主細(xì)胞內(nèi)的蛋白酶降解。措施：一般采用包內(nèi)蛋白酶含量很低的突變株，作為表達(dá)外源蛋白的宿主菌。第34頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六3、外源蛋白的分泌表達(dá)和包涵體優(yōu)點(diǎn)：（1）有利提高外源蛋白的表達(dá)水平和對(duì)產(chǎn)物的純化。（2）可防止蛋白酶對(duì)外源蛋白的降解。（3）可避免外源蛋白對(duì)宿主細(xì)胞的毒害作用。缺點(diǎn)：（1）為了獲得可溶性活性蛋白，必需進(jìn)行變性和復(fù)性處理，不可避免復(fù)性帶來(lái)的問(wèn)題。（2）不能表達(dá)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的蛋白質(zhì)。（3）分離提純過(guò)程復(fù)雜第35頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六四、融合蛋白的表達(dá)

所謂融合蛋白是指蛋白質(zhì)的N端由宿主基因編碼，C端由外源基因編碼。1、融合蛋白的表達(dá)載體為了獲得正確編碼的外源蛋白，外源基因編碼區(qū)在插入表達(dá)載體中原核基因編碼區(qū)時(shí)，閱讀框架應(yīng)保持一致，翻譯才不會(huì)產(chǎn)生移碼突變。方法：構(gòu)建一套表達(dá)載體，第一個(gè)載體有正常的閱讀框架，第二個(gè)載體多了一對(duì)堿基，第三個(gè)載體多了二對(duì)堿基。選擇上述三種載體之一并與外源基因連接，以保證外源DNA閱讀框架的正確。第36頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六2、表達(dá)融合蛋白的優(yōu)點(diǎn)

（1）融合蛋白較易獲得高效表達(dá)（2）融合蛋白在細(xì)胞內(nèi)比較穩(wěn)定（3）許多融合蛋白可作抗原。3、融合蛋白中目的蛋白的分離純化（1）酶法；（2）化學(xué)法；第37頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六10.7基因工程的應(yīng)用與展望一、基因工程藥物

基因工程藥物包括：激素、酶及激活劑和抑制劑、細(xì)胞因子、抗原和抗體、反義核酸、干擾RNA和疫苗等。此外，還可利用重組DNA技術(shù)改造蛋白質(zhì)，設(shè)計(jì)和生產(chǎn)出自然界不存在的新型蛋白質(zhì)藥物。重組疫苗是目前最普遍使用的基因工程藥物。重組胰島素：目前已能在細(xì)菌中克隆人胰島素基因并用于大規(guī)模生產(chǎn)。重組疫苗：利用重組DNA技術(shù)，克隆并表達(dá)抗原基因的編碼序列，并將表達(dá)產(chǎn)物用作疫苗。第38頁(yè)，共43頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二、基因工程在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用轉(zhuǎn)基因植物：包括抗病蟲(chóng)害、抗堿、抗凍、抗除草劑、縮短生產(chǎn)周期和延長(zhǎng)水果蔬菜的儲(chǔ)藏期