微生物發(fā)酵工程實驗

微生物發(fā)酵工程實驗第1頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六實驗內(nèi)容實驗一機械攪拌發(fā)酵系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與控制系統(tǒng)實驗二中試攪拌發(fā)酵罐的使用與維護實驗三培養(yǎng)基的分批滅菌實驗四磷細菌高密度發(fā)酵實驗五噴霧干燥第2頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六時間安排11月8、9、12日下午，熟悉發(fā)酵罐系統(tǒng)。11月15日周一，單因子實驗，優(yōu)化磷細菌發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源。11月16日周二下午，單因子實驗，優(yōu)化磷細菌發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源。（完成系列稀釋、涂布，發(fā)酵液還原糖測定）發(fā)酵罐開蓋，清洗。磷細菌種子制備第3頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六11月17日周三上午，發(fā)酵系統(tǒng)啟動，pH電極標定，溶氧電極標定，發(fā)酵培養(yǎng)基配制、裝罐。周三下午，培養(yǎng)基分批滅菌。滅菌培養(yǎng)基取樣、無菌檢查。周三晚上，種子無雜菌檢查。接種，上罐，發(fā)酵控制，接種后取樣測定（細菌數(shù)量、pH、還原糖等）。周三晚上，夜班，關(guān)注發(fā)酵控制參數(shù)，第4頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六周四上午，取樣測定（細菌數(shù)量、pH、還原糖、雜菌率等）周四下午，取樣測定（細菌數(shù)量、pH、還原糖、雜菌率等）周五上午，放罐，清洗發(fā)酵罐；計數(shù)搖瓶實驗結(jié)果周五下午，噴霧干燥。第5頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六優(yōu)化磷細菌發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源（單因子實驗）菌種：無機磷細菌培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基A：可溶性淀粉0.6%，硫酸銨0.5%，硫酸鎂0.06%，磷酸氫二鉀0.1%，酵母粉0.05%，pH7.0-7.5發(fā)酵培養(yǎng)基B：葡萄糖0.2%，可溶性淀粉0.4%，硫酸銨0.5%，硫酸鎂0.06%，磷酸氫二鉀0.1%，酵母粉0.05%，pH7.0-7.5發(fā)酵培養(yǎng)基C：葡萄糖1%，硫酸銨0.5%，硫酸鎂0.06%，磷酸氫二鉀0.1%，酵母粉0.05%，pH7.0-7.5發(fā)酵培養(yǎng)基D：葡萄糖1%，玉米粉0.6%，硫酸鎂0.06%，磷酸氫二鉀0.1%，酵母粉0.05%，pH7.0-7.5無機磷培養(yǎng)基：葡萄糖1%，(NH4)2SO40.5%，NaCl0.03%，KCl0.03%，F(xiàn)eSO4·7H2O0.003%，MnSO4·4H2O0.003%，Ca3(PO4)21%，瓊脂2%，pH7.0-7.5第6頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六實驗步驟配制培養(yǎng)基，分裝于150或250mL三角瓶，包扎后，115℃滅菌20min。發(fā)酵培養(yǎng)基A/B/C/D各3瓶。接種，接種量1%。培養(yǎng)，28℃、150rpm培養(yǎng)18-24h.測定細胞數(shù)量，取發(fā)酵液1mL系列稀釋，取0.1mL菌液涂布無機磷培養(yǎng)基，28℃恒溫培養(yǎng)3d后計數(shù)。第7頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六滅菌培養(yǎng)基無菌度測定（1）顯微鏡觀察法利用剛果紅染色法可以在顯微鏡下快速區(qū)別死活菌。原理：活菌具有排斥染液的能力，而死菌失去了排斥染液的能力，因此，無色透明的是活菌，死菌為藍色或淺藍色。方法：將待測稀釋液與一滴剛果紅染色液很薄的均勻涂在載玻片上，風干后滴鹽酸1-2滴，涂片變藍，風干后在高倍鏡或油鏡下觀察。剛果紅溶液：稱取剛果紅0.1-0.2g，溶于10mL水中。鹽酸酒精溶液：95%酒精1-2mL，蒸餾水10mL，再加入濃鹽酸0.25-0.3mL混合即成。（2）平板培養(yǎng)法可取出少量滅過菌的培養(yǎng)基置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，若無菌生長，即視為滅菌徹底。第8頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六磷細菌高密度發(fā)酵菌種：無機磷細菌培養(yǎng)基種子培養(yǎng)基見講義第7頁發(fā)酵培養(yǎng)基A無機磷培養(yǎng)基見講義第7頁LB培養(yǎng)基見講義第7頁種子制備配制種子培養(yǎng)基，分裝100mL/500mL三角瓶，包扎，115℃滅菌20min，接種，28℃、150rpm培養(yǎng)18-24h問題：用于接種發(fā)酵罐，接種量5%，請問7L培養(yǎng)基需要多少菌種用量？第9頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六種子接入發(fā)酵罐種子質(zhì)量檢查（包括哪些項目？分別用什么方法？）接種前還需要做什么？火圈接種法接種后需要做什么？發(fā)酵參數(shù)調(diào)試穩(wěn)定，如溫度控制系統(tǒng)，空氣