HLAB高分辨基因分型的臨床演示文稿

HLAB高分辨基因分型的臨床演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有46頁\編輯于星期一優(yōu)選HLAB高分辨基因分型的臨床ppt現(xiàn)在是2頁\一共有46頁\編輯于星期一

HLA-B27分子及其等位基因1

與HLA-B27相關(guān)的疾病2

HLA-B27檢測方法3

本公司試劑盒簡介4現(xiàn)在是3頁\一共有46頁\編輯于星期一

1.HLA-B27抗原分子及其等位基因現(xiàn)在是4頁\一共有46頁\編輯于星期一

HLA-B27抗原分子結(jié)構(gòu)及其特點HLA-B27抗原分子是由位于人類第六號染色體短臂上B*27等位基因編碼的糖蛋白,分子量為56×103U。由兩條多肽鏈組成，一條為α鏈或重鏈，分子量約為44×103U，包括胞外區(qū)，跨膜區(qū)，胞內(nèi)區(qū)三個結(jié)構(gòu)域，其中胞外區(qū)又分為α1，α2，

α3三個結(jié)構(gòu)區(qū)；另一條為β鏈或輕鏈即β2微球蛋白，分子量約12×103U，二者結(jié)合共同組成HLA-B27抗原分子。現(xiàn)在是5頁\一共有46頁\編輯于星期一

HLA-B27抗原分子結(jié)構(gòu)現(xiàn)在是6頁\一共有46頁\編輯于星期一

α1區(qū)與α2區(qū)的肽鏈折疊后共同構(gòu)成一個抗原結(jié)合凹槽，槽內(nèi)形成A,B,C,D,E,F共6個袋狀結(jié)構(gòu)，其中B袋在HLA-B27分子中是最保守的結(jié)構(gòu)。凹槽的作用是結(jié)合抗原肽，使抗原肽與HLA-B27分子牢固的結(jié)合?，F(xiàn)在是7頁\一共有46頁\編輯于星期一HLA-B*27等位基因結(jié)構(gòu)及其特點2002年WHO正式命名的HLA—B*27等位基因達到了24個，其中只有15個有相對應的抗原表達。到2009年11月WHO正式命名HLA—B*27等位基因達到59個(B*2701一B*2759)。HLA—B*27等位基因呈多態(tài)性，主要是因為個別的堿基突變造成的，編碼蛋白的差異主要集中在αl、α2結(jié)構(gòu)區(qū)內(nèi)。現(xiàn)在是8頁\一共有46頁\編輯于星期一

其中HLA-B*2701與HLA-B*2705編碼的蛋白在78-81范圍內(nèi)有2個氨基酸的不同；其中HLA-B*2702與HLA-B*2705編碼的蛋白在78-81范圍內(nèi)有3個氨基酸的不同；其中HLA-B*2703與HLA-B*2705編碼的蛋白僅有1個氨基酸的差別，即在59位前者為組氨酸（His），后者為酪氨酸（Tyr）；現(xiàn)在是9頁\一共有46頁\編輯于星期一

HLA-B*2705基因分布最廣，幾乎見于所有人種。甚至認為其它等位基因都是由HLA-B*2705基因發(fā)生突變、移位形成的。HLA-B*2705編碼的蛋白最為顯著的特點就是在B袋上的45位發(fā)生氨基酸的突變，這一改變直接影響HLA-B27分子在細胞表面的表達，影響HLA-B27分子與抗原肽的結(jié)合，同時影響了HLA-B27分子對胞內(nèi)外抗原的遞呈?，F(xiàn)在是10頁\一共有46頁\編輯于星期一

2.與HLA-B27相關(guān)的疾病現(xiàn)在是11頁\一共有46頁\編輯于星期一

強直性脊柱炎（ankylosingspondylitisAS）幼年類風濕關(guān)節(jié)炎（juvenilerheumatoidarthritisJRA)急性前葡萄膜炎(acuteanterioruveitis，AAU)白血病等疾病現(xiàn)在是12頁\一共有46頁\編輯于星期一強直性脊柱炎（AS）1973年Brewerton和schiosstein發(fā)現(xiàn)強直性脊柱炎（ankylosingspondylitisAS）與HLA-B27抗原有非常強的相關(guān),這是目前唯一有臨床價值的血型相關(guān)抗原,這在迄今已知的HLA與疾病的關(guān)聯(lián)中是最強和最典型的?，F(xiàn)在是13頁\一共有46頁\編輯于星期一AS的抗原學檢測【HLA-B27與強直性脊柱炎的臨床分析】報道：HLA-B27抗原陽性率在AS患者高達96％以上，而正常群體中僅4%-7%,HLA-B27抗原攜帶者發(fā)生AS的相對危險率高達70%?，F(xiàn)在是14頁\一共有46頁\編輯于星期一與AS相關(guān)的B*27等位基因現(xiàn)在是15頁\一共有46頁\編輯于星期一AS的基因?qū)W檢測不同人群的AS患者涉及的B*27等位基因現(xiàn)在是16頁\一共有46頁\編輯于星期一

與AS相關(guān)的B*27等位基因現(xiàn)在是17頁\一共有46頁\編輯于星期一

不同人群AS患者中HLA-B*27等位基因頻率

不同人群AS患者的HLA-B*27等位基因頻率

摘自【HLA—B*27高分辨等位基因在1606例疑似強直性脊柱炎患者中的表達】現(xiàn)在是18頁\一共有46頁\編輯于星期一HLA-B27與AS致病機制的研究HLA-B27分子與非折疊蛋白理論假說HLA-B27分子游離重鏈與AS其它現(xiàn)在是19頁\一共有46頁\編輯于星期一HLA-B27分子非折疊蛋白理論假說

HLAI類分子是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)成熟的，新合成的HLAIα進入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔與鈣連蛋白結(jié)合，使I類分子在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中維持部分折疊，繼而與新合成的β2-微球蛋白組裝成完整的I類分子，此時B27分子才能被認為是成熟的，轉(zhuǎn)運至細胞表面。研究發(fā)現(xiàn)，HLA-B27折疊速度較其他HLA分子（非HLA-B27分子）慢。導致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中出現(xiàn)大量的折疊不良或部分折疊的HLA-B27重鏈部分，通常情況下，非折疊的重鏈在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)能夠被清除，但由于一些相關(guān)物質(zhì)的缺乏或無效，所致非折疊的重鏈堆積，形成了非折疊蛋白反應。有資料報道，AS的發(fā)生可能與這些HLA-B27分子的未折疊有關(guān)?，F(xiàn)在是20頁\一共有46頁\編輯于星期一HLA-B27分子游離重鏈與ASHLA-B27分子的主要功能是：識別和處理抗原肽，然后在遞呈給T淋巴細胞。HLA-B27分子具有特殊的生物學效應，它在體外具有形成重鏈二聚體的能力，主要是通過B27分子第67位氨基酸的殘基半氨酸的二硫鍵結(jié)合形成穩(wěn)定的二聚體。通過認識HLA-B27分子結(jié)構(gòu)的特異性，重要的是深入研究游離重鏈的表達是否應該認為是導致AS的發(fā)病原因之一。當HLA-B27分子適當?shù)摹⒄_的組裝時，其遞呈的抗原肽通常被CD8CTL識別；但當AS發(fā)生時，限制性的CIMTh細胞卻能識別非折疊、空載或缺失的B27分子。在這種情況下，就是HLAII類分子遞呈B27重鏈，降解后形成的多肽被CD4Th細胞識別后導致關(guān)節(jié)炎癥。此研究目前還存在爭議?，F(xiàn)在是21頁\一共有46頁\編輯于星期一其它HLA-B27可提高致關(guān)節(jié)炎的細菌在胞內(nèi)的存活率，從而加劇關(guān)節(jié)炎的嚴重度。B27改變信號轉(zhuǎn)導學說，即HLA-B27通過修飾炎癥因子基因相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導過程而致關(guān)節(jié)炎。HLA-B39,HLA-B60可能對AS的誘發(fā)起到一定的作用。現(xiàn)在是22頁\一共有46頁\編輯于星期一幼年類風濕性關(guān)節(jié)炎（JRA）幼年類風濕性關(guān)節(jié)炎（juvenilerheumatoidarthritisJRA)是類風濕性關(guān)節(jié)炎疾病中的一個特殊類型，而HLA-B27抗原陽性的幼年類風濕關(guān)節(jié)炎又是類風濕關(guān)節(jié)炎疾病中的一個亞型。幼年類風濕性關(guān)節(jié)炎是兒童時期較常見的結(jié)締組織病，國外的報道發(fā)現(xiàn)，較多的幼年類風濕性關(guān)節(jié)炎患者的HLA-B27抗原呈現(xiàn)陽性，且沒有男女性別差異。現(xiàn)在是23頁\一共有46頁\編輯于星期一

【differentialdiagnosisjuvenileankylosingspondylitisandjuvebilerheumatoidarthritisbysubtypesofHLA-B27alleles】報道：和該疾病相關(guān)的HLA-B*27的等位基因涉及B*2705,B*2704,B*2707,B*2702基因。在HLA-B27抗原陽性的JRA患者中，B*2705基因占60.7%，B*2704基因占28.57%，B*2702基因占3.57%，B*2707基因占7.14%。現(xiàn)在是24頁\一共有46頁\編輯于星期一HLA-B27與JRA致病機制的研究以各種感染性微生物作為外來抗原（HLA-B27分子與其結(jié)構(gòu)有相似性），激活免疫細胞，通過損傷或分泌細胞因子觸發(fā)異常的免疫反應，引起自身組織的損害和變性。特別是細菌、病毒的特殊成分作為超抗原，其結(jié)構(gòu)與人類MHC抗原有同源性，不需抗原呈遞細胞加工處理，即可直接與T細胞受體直接結(jié)合（HLA-B27充當細胞表面受體），激活T細胞。現(xiàn)在是25頁\一共有46頁\編輯于星期一急性前葡萄膜炎（AAU)急性前葡萄膜炎(acuteanterioruveitis，AAU)是一類常見的自身免疫性致盲眼病，病因復雜、病程長、易反復發(fā)作,要確定其發(fā)病原因仍比較困難。自1973年BrewertonDA等人首次報道HLA—B27抗原與AAU之間的相關(guān)性以來，迄今為止，已發(fā)現(xiàn)2O多種眼病與HLA抗原具有相關(guān)性，其中最主要的是HLA—B27抗原與AAU之間的相關(guān)性?，F(xiàn)在是26頁\一共有46頁\編輯于星期一

【AssociationbetweenHLA-B27antigenandacuteanterioruveitis】指出：國內(nèi)外報道有所不同，國內(nèi)報道37.0％-60％AAU患者HLA-B27抗原呈陽性，國外報道19％-88％呈陽性,而B*27等位基因與AAU的關(guān)系報道較少?！綼cuteanterioruveitisandHLA-B27】報道，在HLA-B27抗原陽性的AAU患者中,HLA-B*2704基因占44．7%,B*2705基因占56%?，F(xiàn)在是27頁\一共有46頁\編輯于星期一HLA-B27與AAU致病機制的研究葡萄膜炎-受體假說：HLA—B27(+)的AAU可能由于HLA—B27分子擔當細胞表面受體，其與微生物結(jié)合，由此引起葡萄膜炎。分子擬態(tài)假說:HLA—B27分子在結(jié)構(gòu)上與激發(fā)引起AAU的微生物肽序列相似,從而引發(fā)葡萄膜炎?，F(xiàn)在是28頁\一共有46頁\編輯于星期一其它疾病【Geneticmarkerslinkedtorheumatoidarthritisarealsostronglyassociatedwitharticularmanifestationsinulcerativecolitispatients】【Flt3一ITDmutationscangenerateleukaemiaspecificneoepitopes：potentialroleforimmunotherapeuticapproaches】【AnkylosingspondylitisislinkedtoKlebsiella—theevidence】

等三篇文獻報道：HLA-B27抗原與白塞氏病也有一定的相關(guān)性?，F(xiàn)在是29頁\一共有46頁\編輯于星期一

此外，HLA-B27抗原與白血病、心臟疾病、鼻咽癌、銀屑病、關(guān)節(jié)炎型腸炎也有相關(guān)性，但相關(guān)報道較少。現(xiàn)在是30頁\一共有46頁\編輯于星期一

名稱易感性等位基因強直性脊柱炎B*2701,B*2702,B*2704,B*2705,B*2710類風濕性關(guān)節(jié)炎B*2702,B*2704,B*2705,B*2713青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎B*2724脊椎關(guān)節(jié)炎 B*2709，B*2705關(guān)節(jié)炎型炎癥性腸病B*27XX白塞病B*2702銀屑病B*27XX白血病B*27XX銀屑病B*27XX鼻咽癌B*27XX賴姆疏螺旋體病B*27XXHIV-1感染B*27XX現(xiàn)在是31頁\一共有46頁\編輯于星期一

3.HLA-B27的檢測方法現(xiàn)在是32頁\一共有46頁\編輯于星期一

微量淋巴細胞毒實驗（CDC）流式細胞術(shù)（FCM）分子生物學技術(shù)（PCR）

現(xiàn)在是33頁\一共有46頁\編輯于星期一

三種檢測方法的對比

現(xiàn)在是34頁\一共有46頁\編輯于星期一

HLA-B27基因分型檢測方法特異性引物序列聚合酶鏈反應(PCR-SSP)序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應（PCR-SSO）

聚合酶鏈反應-直接測序分型（PCR-SBT）

現(xiàn)在是35頁\一共有46頁\編輯于星期一

PCR-SSP:針對HLA-B*27基因的外顯子2的序列，合成相應的HLA-B*27基因引物，在PCR擴增儀上擴增即可，這種特異性的PCR擴增產(chǎn)物可通過瓊脂糖凝膠電泳檢出，凝膠成像系統(tǒng)下觀察結(jié)果。

現(xiàn)在是36頁\一共有46頁\編輯于星期一

血清學檢測HLA-B27抗原的優(yōu)缺點

實驗操作方面（1）經(jīng)典的血清學分型技術(shù)因其操作簡便，準確率尚可且成本較低，曾得到廣泛應用。（2）所用標本須為新鮮血液標本。

（3）受細胞純度、補體差異、單抗效價的影響，易出現(xiàn)錯判漏判，觀察結(jié)果存在主觀因素。臨床應用方面：血清學檢測的是蛋白抗原，不能檢測出HLA-B*27等位基因，即血清學結(jié)果是陰性，只能說明HLA-B27抗原陰性，并不能確定HLA-B*27基因是否存在。目前尚無針對HLA-B*27不同等位基因的抗體，故不能檢測出對應的HLA-B*27等位基因.

現(xiàn)在是37頁\一共有46頁\編輯于星期一

基因?qū)W方法檢測HLA—B*27基因的優(yōu)缺點（以PCR-SSP為例）：

實驗操作方面（1）只需PCR擴增儀和瓊脂糖凝膠電泳設備；費用中等，適合在我國現(xiàn)有條件下開展。（2）標本需要量少，取材容易，提取的DNA可長期保存；陳舊血、冷凍血也可用于DNA的提取，使留取標本不受時間的限制。（3）結(jié)果準確可靠，分析結(jié)果客觀，根據(jù)內(nèi)對照及有無特異性區(qū)帶來判斷結(jié)果一目了然。（4）PCR時要在嚴格的實驗條件下進行，防止污染。臨床應用方面：能直接檢測出HLA-B*27的等位基因，且不同的等位基因與疾病的相關(guān)性大相徑庭，不同等位基因?qū)е碌呐R床表現(xiàn)各不相同，適于臨床常規(guī)；現(xiàn)在是38頁\一共有46頁\編輯于星期一

檢測結(jié)果不正確主要的危害在于：檢測結(jié)果假陰性：使很多病人在鑒別診斷上缺乏依據(jù)；檢測結(jié)果假陽性：使一些病人誤用治療類風濕和強直性脊椎炎的藥物。HLA-B27高分辨試劑盒能簡單、快捷的檢測出HLA-B*27等位基因，有效地避免了血清學檢測結(jié)果的假陰性造成疾病診斷的漏診；同時也能有效地避免了檢測結(jié)果的假陽性，造成疾病診斷的誤診；同時，直接檢測出的HLA-B*27等位基因與疾病的相關(guān)性各不相同，能有效的指導臨床疾病的診斷?，F(xiàn)在是39頁\一共有46頁\編輯于星期一

4.本公司的HLA-B27試劑盒現(xiàn)在是40頁\一共有46頁\編輯于星期一

HLA-B*27篩查試劑盒HLA-B*27驗證試劑盒HLA-B*27高分辨試劑盒現(xiàn)在是41頁\一共有46頁\編輯于星期一

本公司研制的HLA-B*27基因高分辨引物板試劑盒，采用PCR-SSP方法檢測HLA-B*27等位基因，能直接檢測出中國人常見的HLA—B*2704、2705、2702、2706、2701、2708、2710等基因，用