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植物染色體標(biāo)本的制備第1頁,共10頁,2023年,2月20日,星期六目的要求學(xué)習(xí)植物染色體標(biāo)本的制備技術(shù),了解Feulgen反應(yīng)的基本原理,學(xué)習(xí)其操作方法和壓片法,初步掌握細(xì)胞分裂各期的主要特點。第2頁,共10頁,2023年,2月20日,星期六實驗原理Feulgen反應(yīng)的原理是根據(jù)DNA經(jīng)弱酸(1mol/L)水解后,打開嘌呤和脫氧核糖連接的鍵,在脫氧核糖的一端形成游離的醛基.這些醛基就在原位與Schiff試劑結(jié)合,形成含醌基的化合物,醌基是一個發(fā)色團(tuán)所以具有顏色,因此凡有DNA的部位,就呈現(xiàn)紫紅色。第3頁,共10頁,2023年,2月20日,星期六實驗用品一、材料蠶豆、豌豆(或玉米、水稻)
二、器材顯微鏡,擦鏡紙,剪子,鑷子,小平皿,載玻片,蓋玻片。三、試劑
Carnoy固定劑,95%酒精,1mol/LHCl,Schiff試劑,亞硫酸第4頁,共10頁,2023年,2月20日,星期六實驗方法1、將植物種子放在潮濕的濾紙上,20℃使其發(fā)芽。2、預(yù)處理:切取的0.5cm長的根尖浸入0.1%秋水仙素液中,室溫下處理3~4小時。3、固定、水解及染色:Carnoy固定劑固定10~30分鐘→95%酒精10分鐘→70%酒精10分鐘→蒸餾水→1mol/LHCl,60℃15分鐘→Schiff試劑40~60分鐘→亞硫酸水(1,2,3)→換3次,每次5分鐘自來水→將染色后的根尖漂洗干凈,選擇染色效果好的材料→蒸餾水→壓片→鏡檢第5頁,共10頁,2023年,2月20日,星期六觀察蠶豆根尖2n=2x=12第6頁,共10頁,2023年,2月20日,星期六豌豆根尖2n=2x=14第7頁,共10頁,2023年,2月20日,星期六玉米根尖2n=2x=20第8頁,共10頁,2023年,2月20日,星期六水稻根尖2n=2x=24第9頁,共10頁,2023年,2月20日,星期六思考題1、簡述Feulgen反應(yīng)的原理2、欲得到一張好的Feulgen反應(yīng)制片,制片過
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