上海市臨檢中心 地中海貧血基因檢測的道與術(shù)

地中海貧血基因檢測的道與術(shù)亞能生物馬于雷道1地中海貧血簡介2地中海貧血基因檢測產(chǎn)品應具備安全特點什么是地中海貧血？定義：珠蛋白基因缺陷（缺失或/和點突變）導致珠蛋白肽鏈合成減少或不能合成，致使血紅蛋白組分發(fā)生改變而引起的常染色體單基因隱性遺傳病。血紅素成人血紅蛋白示意圖分類α-地中海貧血β-地中海貧血特點具有明顯的種族差異地區(qū)差異危害重型地貧致死中型地貧致殘地中海貧血全球分布地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一，中國南方地區(qū)是地中海貧血的主要分布區(qū)域。估算中國每年新增中間型和重型地貧患兒約3萬例。地貧在我國南方高發(fā)，分布在南方10個?。▍^(qū)、市）中國南方人群地貧基因攜帶率地區(qū)攜帶率（%）地貧地貧合計廣西17.66.424.0云南9.87.317.1海南12.72.715.4廣東8.52.511.0貴州4.25.19.3臺灣7.31.28.5江西（南部）3.52.96.4福建4.11.55.6湖南2.22.04.2四川1.92.24.1重慶1.02.33.3JClinPathol,2004;ClinGenet,2010;中華醫(yī)學遺傳學雜志，2012.夫婦雙方若無攜帶地貧基因，出生地貧患兒的概率為0；夫婦一方攜帶地貧基因，下一代有50%的概率攜帶地貧基因；夫婦雙方均攜帶同型地貧基因，下一代有25%的概率為重癥地貧患兒地貧的遺傳機制（常染色體隱性遺傳?。│?地中海貧血分子基礎(chǔ)缺失型α-地貧：占α-地貧的95%以上；由α-基因缺失引起，中國人群中主要類型有--SEA/、-α3.7/、-α4.2/

非缺失型α-地貧：占α-地貧的約5%；由α-基因點突變引起，中國人群中主要類型有αCSα/、αQSα/、αWSα/分類靜止型α地貧標準型α地貧HbH病HbBart’s胎兒水腫綜合征Normal(αα/αα)

正常無任何α基因缺失或功能喪失α+

地貧(αα/-α3.7)(αα/-α4.2)

靜止型－單一α基因缺失或喪失功能臨床無任何癥狀，一般血液學檢查無異樣，僅平均紅細胞體積(MCV)位于正常值下限。α-地貧的基因型與表現(xiàn)型HbHdisease(-α

3.7/--SEA)(-α

4.2/--SEA)αo

地貧(αα/--SEA)(-α/-α)血紅蛋白H病－3個α基因缺失或喪失功能肝脾腫大，中度貧血。小細胞，低色素，HbH含量較高，易發(fā)生溶血，有些病例需不定期輸血，癥重者甚至需切除脾臟。標準型－2個α基因缺失或喪失功能臨床無明顯癥狀，血液學檢查出現(xiàn)輕微貧血，紅細胞大小不均一，平均紅細胞體積(MCV)及平均血紅蛋白含量(MCH)明顯偏低。α-地貧的基因型與表現(xiàn)型HbBart'sHydrops(--SEA/--SEA)

巴氏水腫胎兒綜合癥－4個基因缺失或喪失功能患胎于妊娠晚期或產(chǎn)后數(shù)小時內(nèi)死亡，全身水腫，肝脾腫大。由于胎兒無法合成珠蛋白，臍血血紅蛋白（HbBart’s，4）含量高。α-地貧的基因型與表現(xiàn)型β-地中海貧血分子基礎(chǔ)絕大多數(shù)β地貧是由于β-基因點突變所致，突變涉及基因內(nèi)及側(cè)翼序列。目前在全世界已發(fā)現(xiàn)了近200種突變類型，包括絕大部分β-基因點突變和少部分β-基因缺失。在中國人群中共發(fā)現(xiàn)約40余種，其中常見的有：CDs41-42,CD654,CDs71-72,-29,-28,CD17,HbE,CDs27-28,CD43，占95%以上。分類β0地貧

β基因突變導致β鏈完全不能合成β+地貧β基因突變導致β鏈部分不能合成β-地貧的基因型與表現(xiàn)型基因型基因型描述表現(xiàn)型0/00地貧純合子或雙重雜合子（如17M/17M）重型地貧0/+0地貧和+地貧雙重雜合子重型地貧+/++地貧純合子中間型地貧0/0地貧雜合子（71-72M/N）輕型地貧+/+地貧雜合子（654M/N）輕型地貧/正常（N/N）正常人中間型/輕型β-地中海貧血輕型β地貧中間型β地貧β+地貧純合子或β0/β+地貧雜合子介于輕型和重型之間，中度貧血，肝、脾輕中度腫大，可能有黃疸，骨骼改變輕。預后：可能需要輸血，病人可活至成年甚至老年。臨床表現(xiàn)β0地貧雜合子（β0/β）、β+地貧雜合子（β+/β）無癥狀或僅有輕度貧血，可能有輕度脾大。多在家系調(diào)查時發(fā)現(xiàn)。預后：壽命與正常人相似。臨床表現(xiàn)重型β-地中海貧血特殊外貌頭顱大顴骨突眼距寬臨床表現(xiàn)β0或β+地貧純合子或β0/β+地貧雜合子出生時正常，半歲左右（3-12月）發(fā)病.慢性進行性貧血：蒼白、輕度黃染、生長發(fā)育遲緩。鼻梁低道2地中海貧血基因檢測產(chǎn)品應具備安全特點1地中海貧血簡介患兒治療三級防控產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷二級防控孕前檢查一級防控世界衛(wèi)生組織的出生缺陷“三級預防”策略孕前和孕期干預是我國出生缺陷預防的重點有效預防重癥地貧兒出生衛(wèi)計委引發(fā)地貧防控項目相關(guān)文件《關(guān)于做好2014年地海貧血防控試點項目全覆蓋工作的通知》《地中海貧血防控試點項目技術(shù)服務規(guī)范（試行）》2014年婦幼司印發(fā)《關(guān)于2015年進一步擴大地中海貧血防控試項目實施范圍的通知》《地中海貧血防控試點項目技術(shù)服務規(guī)范》2015年國家衛(wèi)生計生委印發(fā)?明確工作目標、服務內(nèi)容、服務流程、服務機構(gòu)和職責

?目的——改變傳統(tǒng)地貧預防模式構(gòu)建地貧群體預防模式地中海貧血防控試點項目技術(shù)服務規(guī)范明確檢測突變α-地貧基因檢測：三種缺失型--SEA、-α3.7、-α4.2三種非缺失型CS、QS、WSβ-地貧基因檢測：

17種非缺失型基因突變

10個?。▍^(qū)、市）

35個地市

126個試點縣（市、區(qū)）

地貧防控項目目前實施區(qū)域地貧出生缺陷群體干預工作實施方案新婚、計劃懷孕或孕期夫妻雙方健康教育知情同意、信息采集血常規(guī)檢查一方MCV<80fl或MCH<27pg或MCV<80fl和MCH<27pg血紅蛋白分析HbA2降低、出現(xiàn)異常血紅蛋白區(qū)帶HbF升高HbA2升高α地貧基因檢測β地貧基因檢測α+β地貧基因檢測生育過重型或中間型地貧的夫婦夫妻雙方均為同一型地貧基因攜帶者夫妻一方為β地貧基因復合α地貧基因攜帶者，另一方為任何一型地貧基因攜帶者夫妻雙方均為β地貧基因復合α地貧基因攜帶者產(chǎn)前診斷重型α地貧或重型β地貧靜止型α地貧或輕型α地貧及β地貧HbH病或中間型β地貧繼續(xù)妊娠經(jīng)遺傳咨詢，當事人知情同意后采取干預措施經(jīng)遺傳咨詢，由當事人在充分知情的基礎(chǔ)上自主選擇決定地貧對患者及家庭影響大父母文化程度低，大多數(shù)為初中以下父母職業(yè)以外出務工和務農(nóng)為主90%以上的家庭年收入低于6萬元，近80%家庭有負債，借債額度在1-5萬元.1、患者家庭收入低下，因病致貧現(xiàn)象突出調(diào)查顯示，59.4%患者不能報銷納入藥品報銷目錄的藥品少當?shù)厮幬飪洳蛔?、去鐵費用月均超3000元，六成不能報銷，自費為主地貧造血干細胞移植醫(yī)療資源相對集中，排隊現(xiàn)象嚴重一般家庭很難負擔相關(guān)治療費用2、配型困難、移植費用高地貧家庭經(jīng)濟困難約占四成，接受社會救助的家庭僅有16.3%3、接受救助家庭不足兩成來源于《中國地中海貧血藍皮書》地貧基因檢測產(chǎn)品應具備的特點安全準確性穩(wěn)定性術(shù)1亞能生物安全的地中海貧血基因檢測整體解決方案地貧產(chǎn)品

國家標準起草單位，企業(yè)排名第一

國家參考品設計、制備單位建立國內(nèi)第一個遺傳疾病國家參考盤

α/β-地中海貧血聯(lián)合檢測試劑獲科技部“863項目”資助α-地中海貧血基因檢測試劑盒獲得國家重點新產(chǎn)品獎廣東省科學技術(shù)獎整體方案行業(yè)新標桿亞能地中海貧血基因檢測產(chǎn)品行業(yè)地位及榮譽地貧基因檢測整體解決方案倡導者（亞能生物）常規(guī)聯(lián)檢產(chǎn)品：AB精準分項檢測產(chǎn)品：α、αT和β少見地貧檢測產(chǎn)品罕見地貧檢測服務地貧基因檢測整體解決方案包含98%的地貧基因檢測產(chǎn)品解決方案分項檢測常規(guī)聯(lián)檢3種α-缺失型3種α-非缺失型17種β-突變α-和β-地貧23種方法GAP-PCR法+電泳基因芯片法基因芯片法基因芯片法檢測基因類型--SEA、α3.7、α4.2

αCS、αQS、αWS

CD41-42、654M、-28M、71-72M、17M、βEM、IVS-I-1M、IVS-I-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM和CAPM--SEA、α3.7、α4.2；αCS、αQS、αWS；CD41-42、654M、-28M、71-72M、17M、βEM、IVS-I-1M、IVS-I-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM和CAPM技術(shù)方法：GAP-PCR法檢測基因缺失型：-α3.7

、-a4.2、--SEA覆蓋率：95%基因型條帶大小αα1.7kb-α3.72.0kb-α4.21.4kb--SEA1.2kb分項檢測產(chǎn)品1（缺失型α-地中海貧血基因檢測試劑盒）技術(shù)方法：基因芯片法檢測基因突變型：

αCS、αQS、αWS點突變覆蓋率：98%分項檢測產(chǎn)品2（非缺失型α-地中海貧血基因突變檢測試劑盒）核心技術(shù)：基因芯片法檢測突變點：17個突變位點覆蓋率：98%分項檢測產(chǎn)品3

（β-地中海貧血基因檢測試劑盒）27/28M14-15MCAMP41-42N654N－28N71-72N17NβEN31N27/28M41-42M654M－28M71-72M17MβEM31MIVS1-1M43M－32M－29M－30M14-15MCAPMIntMIVS1-5M常規(guī)聯(lián)檢產(chǎn)品（三合一，α-和β-地中海貧血基因診斷試劑盒）核心技術(shù)：基因芯片法高通量：23種基因突變快速：6小時出檢測報告3.7雜合4.2-QSSEA-654M產(chǎn)品優(yōu)勢快速檢測，6小時出檢測報告，符合地貧防控項目的時效要求操作簡便，多種類型樣本檢測同時檢測23種地貧（3種缺失型α地貧、3種非缺失型α-地貧、17種突變型β-地貧）陽性、陰性符合率均達100%、特異性100%全面簡易快速精準AB試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢稀有型（2%）地貧基因檢測產(chǎn)品和服務少見型地貧檢測產(chǎn)品罕見型地貧檢測服務少見型α地貧產(chǎn)品少見型β地貧產(chǎn)品罕見α-點突變罕見β-點突變香港型α-地貧(HKαα)泰國型α-地貧(Thai)anti4.2α-27.6地貧α-21.9地貧α-fusiongene地貧αααanti3.7β-中國型β-東南亞型β-臺灣型CD74、CD78、CD118、CD13、CD30、CD31、CD43/44、CD49、CD59等。-90、-73、-50、-31、-28、Cap+8、Cap+39、CD19、CD30、IVS-I-2、IVS-I-128、IVS-II-2、IVS-II-5、CD40-41、TermCD+32、CD53、CD13-14、CD15-16、CD37、CD38、CD41-43、CD54-58、CD71-72、CD89-93、CD95、CD112、PolyA等。PCR-RDB方法保證準確性多重PCR擴增靶標基因芯片識別多靶標高靈敏度、高特異性高特異性、高通量、靶標可拓展性強地貧基因檢測產(chǎn)品穩(wěn)定性2014-2018年全國地中海貧血基因分型室間質(zhì)量評價總成績均為滿分。核酸提取PCR擴增目的靶標分子雜交顯色，肉眼即可判讀結(jié)果高通量、自動化的地貧基因檢測產(chǎn)品僅1