細菌鑒定流程

細菌鑒定流程第1頁/共21頁CONTENTS分離環(huán)境形態(tài)及理化特征16sRNA基因PCR結果及網(wǎng)上比對結果參考文獻結論與討論第2頁/共21頁分離環(huán)境時間采集地分離基物2015年手指表面生科院2019室受試菌的采集步驟：在酒精燈火焰旁，半開皿蓋，用手指（洗手前）在平板上輕輕按一下，迅速蓋上皿蓋。第3頁/共21頁形態(tài)及理化特征菌落形態(tài)在培養(yǎng)基上呈黃色菌落。菌落圓形，凸起，光滑且有光澤，邊緣整齊。形態(tài)特征：菌落特征第4頁/共21頁形態(tài)及理化特征顯微特征圓球狀，無鞭毛且不可運動形態(tài)特征鞭毛染色1、步驟制片：滴菌液→傾斜玻片→室溫干燥染色：A液3-5min→水洗→B液沖殘水，覆蓋染色→出現(xiàn)明顯褐色時輕輕水洗→晾干2、結果受試菌無鞭毛不可運動第5頁/共21頁形態(tài)及理化特征革蘭氏染色形態(tài)特征1、步驟制片：載玻片：火燒去脂→水滴：小→菌：少(薄而均勻)染色：滴加結晶紫染液初染2min→水洗→沖殘水后滴加盧戈氏碘液媒染1min→水洗→吸殘水后滴加95%乙醇脫色約30s→滴加沙黃染液復染1-2min→水洗→吸干水，鏡檢2、結果受試菌為革蘭氏染色陽性菌G+（金黃色葡萄球菌）受試菌G-（大腸桿菌）第6頁/共21頁形態(tài)及理化特征TITLETITEXT枯草芽孢桿菌淀粉水解實驗大腸桿菌1、步驟：固體淀粉培養(yǎng)基→劃線接種→37℃培養(yǎng)24h→滴加碘液（均勻鋪滿平板）→觀察2、結果：受試菌周圍未出現(xiàn)無色透明圈說明不能分泌胞外淀粉酶受試菌理化特征第7頁/共21頁形態(tài)及理化特征變形桿菌糖發(fā)酵實驗大腸桿菌1、步驟葡萄糖發(fā)酵半固體培養(yǎng)基（含指示劑溴甲酚紫）→穿刺接種→37℃培養(yǎng)24~48h→觀察培養(yǎng)基顏色和是否產(chǎn)生氣泡乳糖發(fā)酵半固體培養(yǎng)基（含指示劑溴甲酚紫）→穿刺接種→37℃培養(yǎng)24~48h→觀察培養(yǎng)基顏色和是否產(chǎn)生氣泡2、結果受試菌在培養(yǎng)基中生長，但葡萄糖和乳糖半固體培養(yǎng)基均為紫色，且未裂開，說明受試菌進行葡萄糖和乳糖發(fā)酵均不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣受試菌理化特征變形桿菌大腸桿菌受試菌葡萄糖乳糖第8頁/共21頁形態(tài)及理化特征氨芐青霉素抗性實驗1、步驟氨芐青霉素濾紙條→垂直接種→培養(yǎng)→觀察、測量濾紙條距菌起始位置的距離2、結果受試菌對青霉素敏感理化特征受試菌大腸桿菌芽孢桿菌葡萄球菌平板編號大腸桿菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌受試菌11.803.70（？）3.782.702——2.102.902.60抑菌長度（cm）第9頁/共21頁形態(tài)及理化特征API20NE試劑條檢測1.試劑條接種和培養(yǎng)a)選擇菌落（先確定是否為單一純菌株）b)向培養(yǎng)盒中加入少許無菌水（保持濕度）c)挑取單菌落至2mL0.85%NaCl(aq)（已滅菌）中，使菌濃度達到0.5個麥氏單位標準濁度。用同一槍頭分別接種鹽水菌懸液從NO3到PNPG試劑管（120μL/管）。d)將剩余的200μL生理鹽水菌懸液加至APIAUX培養(yǎng)基，仔細混勻，注滿由GLU至PAC管（250μL/管）。e)GLU,ADH,URE三個管用礦物油覆蓋f)將API20ESTRIP放入盒中，蓋上盒蓋，在30℃培養(yǎng)24h。理化特征2.試劑條的結果觀察a)培養(yǎng)后，將一滴NIT1和NIT2試劑進入到NO3中，5min后，紅色表示陽性反應；陰性反應的，為排除N2的影響，加入鋅粉5min，無色表示陽性反應。b)將JAMES試劑加入TRP，立即顯現(xiàn)粉紅色為陽性反應c)其他見實驗結果判定表第10頁/共21頁形態(tài)及理化特征API20NE試劑條檢測理化特征（24h，30℃）（48h，30℃）第11頁/共21頁形態(tài)及理化特征API20NE試劑條檢測理化特征結果API20NE硝酸鹽還原API20NE產(chǎn)生吲哚API20NE酸化葡萄糖API20NE精氨酸雙水介酶活API20NE脲酶活API20NEβ-葡萄糖甙酶活API20NE明膠蛋白酶活API20NEβ-半乳糖苷酶活API20NE可以同化的碳源

陰性

陰性

陰性

陰性

陰性

陰性

陽性

陰性

葡萄糖，麥芽糖，苯乙酸第12頁/共21頁形態(tài)及理化特征API20NE試劑條檢測理化特征“0050202”第13頁/共21頁16sRNA基因PCR結果及網(wǎng)上比對結果16sRNA基因PCR結果GCGTGCTTACCATGCAGTCGAACGATGAAGCCCAGCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCTTAACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATAGGAGCGCCCACCGCATGGTGGGTGTTGGAAAGATTTATCGGTTTTGGATGGACTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGTAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGTCGTGAAAGTCCGGGGCTTAACCCCGGATCTGCGGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCATGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGTTGGGCACTAGGTGTGGGGACCATTCCACGGTTTCCGCGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATGTTCTCGATCGCCGTAGAGATACGGTTTCCCCTTTGGGGCGGGTTCACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGTTCCATGTTGCCAGCACGTCGTGGTGGGGACTCATGGGAGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGAGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAATGGGTTGCGATACTGTGAGGTGGAGCTAATCCCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCACGAAAGTTGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCTAACCCTTGTGGGGGAGCCGTCGAAG第14頁/共21頁16sRNA基因PCR結果及網(wǎng)上比對結果網(wǎng)上比對結果最相似菌種名Micrococcusluteus最高相似度99.00%第15頁/共21頁結果與分析由16sRNA基因檢測結果與數(shù)據(jù)庫對比與Micrococcusluteus最高相似度99.00%從伯杰氏手冊查的藤黃微球菌的特征為：球菌，直徑為1.0-2.0微生，細胞單生，對生和向幾個方向分裂而形成四聯(lián)體、不規(guī)則的堆團或規(guī)則的立方堆形。不運動。生成四聯(lián)或不規(guī)則細胞堆團的菌株形成光滑、凸起并具有整齊邊緣的菌落。形成立方堆菌株表面常呈現(xiàn)顆粒狀和無光澤。菌落黃色、黃綠色或橙色，有些菌株形成一種能擴散到培養(yǎng)基內(nèi)的紫色素。在液體培養(yǎng)基中渾濁均勻，隨之變清，產(chǎn)生一些細的像顆粒狀或粘液狀的沉淀。通常從碳水化合物中不產(chǎn)生可察覺的酸，在葡萄糖培養(yǎng)液中最終PH值在6.4-8.2.含碳化合物包括乙酸鹽、乳酸鹽、丙酮酸鹽、琥珀酸鹽、果糖、半乳糖、葡萄糖、甘油、麥芽糖、蔗糖，都可氧化為水和二氧化碳。對甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、鼠李糖、核糖、木糖和淀粉的氧化作用都是可變的，不能氧化衛(wèi)矛醇。藤黃微球菌Micrococcusluteus第16頁/共21頁結果與分析藤黃微球菌Micrococcusluteus可以水解蛋白質(zhì)、多肽和脂肪。通常不水解精氨酸。通常不還原硝酸鹽。有些菌株能生長在含有丙酮酸（作為碳源和能源）、谷氨酸、生物素和無機鹽的培養(yǎng)基上。另一些菌株需要含某些氨基酸更復雜的培養(yǎng)基。專性好氧，最適生長溫度約為35℃。大多數(shù)菌株可在10℃生長，有些在45℃生長。能在5%NaCl生長，但不常在10%或15%NaCl中生長。大多數(shù)菌株對溶菌酶和新生素敏感。

對植物和動物不致病。通常存在于土壤、灰塵、水、人和其他動物皮膚上。建議新的模式菌株：CCM169;ATCC44698;NCTC2665.第17頁/共21頁結果與分析分析比較項目菌形態(tài)革蘭氏染色葡萄糖分解運動性菌落特征有無鞭毛藤黃微球菌球狀陽性不分解不運動金黃色無受試菌球狀陽性不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不運動金黃色無由于API的結果查詢需要付費應此因此沒有得到其結果，根據(jù)16sRNA的查詢結果，對比受試菌與藤黃微球菌兩則的基本特征，發(fā)現(xiàn)都吻合顧初步判定受試菌即為藤黃微球菌。第18頁/共21頁參考文獻NCBIBlast百度百科Wikipedia中國科技資源共享網(wǎng)伯杰氏系統(tǒng)細菌學手冊沈萍陳向東主編《微生物學實驗（第4版）》PeterKa¨mpfer,HolgerC.Scholz,BirgitHuber,EnevoldFalsenandHans-Ju¨rgenBusse.Ochrobactrumhaematophilumsp.nov.and