生化課件 06第6章蛋白質(zhì)的分離純化

Chapter6PurificationandIdentification

ofProteins分離純化蛋白質(zhì)的意義Significanceofpurificationofprotein

蛋白質(zhì)的純化比起DNA克隆和操作來(lái)更具有藝術(shù)性，盡管DNA序列具有異乎尋常的多樣性（因?yàn)樗俏ㄒ贿m合遺傳物質(zhì)的），但它卻有標(biāo)準(zhǔn)的理化性質(zhì)，而每一種蛋白質(zhì)則有它自已的氨基酸序列決定物理化學(xué)性質(zhì)（因?yàn)樗哂袌?zhí)行眾多生物學(xué)功能的用途）生化分離技術(shù)separationtechnique生化檢測(cè)技術(shù)detectiontechnique蛋白質(zhì)分離純化的一般程序

GeneralProcedureofPurification(1)選擇一種目的蛋白(interestprotein)含量豐富(abundant)、穩(wěn)定性(stability)好的樣品材料(material)。(2)將蛋白質(zhì)從樣品(sample)中抽提(extract)出來(lái)。(3)確定分離純化的方法method，使粗品的純度達(dá)到預(yù)定要求。(4)建立靈敏（sensitive）、特異、精確的（exact）檢測(cè)手段testmethods，分步(step-by-step)測(cè)定(determine)蛋白質(zhì)的含量(content)，檢驗(yàn)蛋白質(zhì)純度(purity)。(5)在操作、分析過(guò)程中注意(attention)保護(hù)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，防止變性(topreventdenaturation)。一般程序的選擇策略是：選擇不同機(jī)制的分離單元組成一套工藝，將含量多的雜質(zhì)先分離去除，以盡快縮小樣本體積，提高產(chǎn)物濃度。盡早采用高效分離手段，將最昂貴、最費(fèi)時(shí)的分離單元放在最后階段。蛋白質(zhì)分離純化的一般原則前處理（pretreatment）粗分級(jí)分離(Roughfractionation)細(xì)分級(jí)分離(finefractionation)前處理(pre-processing)樣品選擇的原則(principle)：有效成分(effectivecomponent)含量高、穩(wěn)定性好、來(lái)源豐富、保持新鮮，實(shí)驗(yàn)條件恒定、取材工藝(craft)簡(jiǎn)單，有綜合利用價(jià)值(worth)等。在實(shí)踐過(guò)程中則需抓住主要矛盾、全面考慮、綜合權(quán)衡。

前處理(pre-processing)

：有些樣品需冰凍(frozen)保存;有些樣品需去掉(abscise)結(jié)締組織(connectivetissue);有些樣品需去掉脂肪組織(fattytissue)。根據(jù)不同組織選擇適當(dāng)方法將組織或細(xì)胞破碎。

粗分級(jí)分離(Roughfractionation)

把蛋白質(zhì)與雜蛋白、核酸、多糖分開(kāi)方法：鹽析、等電點(diǎn)、有機(jī)溶劑體積大的樣品采用：超濾、凝膠過(guò)濾、凍真空干燥、聚乙二醇細(xì)分級(jí)分離(finefractionation)

凝膠過(guò)濾、離子交換、吸附層析、親和層析區(qū)帶電泳、等電聚焦結(jié)晶依分離現(xiàn)象或儀器設(shè)備分類(lèi)生化分離技術(shù)沉淀分離技術(shù)precipitationseparation膜分離技術(shù)membraneseparation層析分離技術(shù)chromatographicseparation電泳分離技術(shù)electrophoreticseparation離心分離技術(shù)centrifugalseparation萃取分離技術(shù)extractionseparation根據(jù)蛋白質(zhì)在溶液中的性質(zhì)來(lái)分類(lèi)分子大小溶解度電荷吸附性質(zhì)對(duì)配體分子的生物學(xué)親和力一、提取與沉淀分離技術(shù)extractionandprecipitationseparation細(xì)胞破碎celldisruption提取extraction沉淀分離precipitationseparation機(jī)械法mechanicalmethod物理法physicalmethod化學(xué)法Chemicalmethod酶法Enzymicmethod

細(xì)胞破碎機(jī)械法mechanicalmethod通過(guò)機(jī)械運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的剪力的作用，使細(xì)胞破碎的方法稱(chēng)為機(jī)械破碎法分為搗碎法(comminute)；研磨法(trituration)；勻漿法(homogenate)物理法physicalmethod

通過(guò)溫度(temperature)、壓力(pressur)、聲波(soundwave)等各種物理因素的作用，使組織細(xì)胞破碎的方法分為溫度差(temperaturehead)破碎法；壓力差deliveryhead破碎法；超聲波破ultrasonicwave碎法化學(xué)法chemicalmethod通過(guò)各種化學(xué)試劑對(duì)細(xì)胞膜的作用，而使細(xì)胞破碎的主法所用化學(xué)試劑(chemicalagents)：甲苯(methylbenzene)、丙酮acetone、丁醇(butanol)、氯仿(chloroform)、吐溫(Twain)酶促破碎法Enzymicmethod

通過(guò)細(xì)胞本身的酶系或外加酶制劑的催化作用，使細(xì)胞外層結(jié)構(gòu)受到破壞，而達(dá)到破碎細(xì)胞目的的方法溶菌酶lysozyme、葡聚糖酶glucanase、纖維素酶cellulase抽提(Extraction)：是指在一定的條件下，用適當(dāng)?shù)娜軇╯olvent）（溶液）處理原料，使欲分離物質(zhì)充分溶解到溶劑中的過(guò)程。溶液應(yīng)具備的條件是：對(duì)有效成分溶解度大、破壞性小，對(duì)雜質(zhì)不溶解或溶解度很小，來(lái)源廣泛、價(jià)格低廉、操作安全等。提取方法：鹽溶液(saltsolution)提??；酸溶液(acidsolution)提??；堿溶液(basesolution)提取；有機(jī)溶劑(organicsolvent)提取影響提取的因素(factorsofimpactingextraction)1.溶解度solubility：水溶性物質(zhì)；脂溶性物質(zhì)2.擴(kuò)散速度diffusionvelocity3.溫度temperature4.pH值

蛋白質(zhì)的分離純化方法沉淀分離precipitationseparation

沉淀分離：是通過(guò)改變某些條件或添加某種物質(zhì)，使某溶質(zhì)在溶液中的溶解度降低，從溶液中沉淀析出，而與其他溶質(zhì)分離的技術(shù)過(guò)程。分類(lèi)

鹽析沉淀法(saltprecipitation)；等電點(diǎn)沉淀法(isoelectricprecipitation)；有機(jī)溶劑沉淀法(organicsolventprecipitation)；金屬鹽沉淀法；選擇性變性沉淀法(selectivitydenaturationprecipitation)鹽析法(saltfractionation;Saltingout)在稀鹽溶液中，蛋白質(zhì)的溶解度隨鹽濃度的增加而升高，這種現(xiàn)象稱(chēng)為鹽溶(Saltingin)。但當(dāng)鹽濃度增加到一定量時(shí)，其溶解度又逐漸下降，直到某一濃度時(shí)便從溶液中沉出，即為鹽析(Saltingout)。這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子吸附某種鹽離子后，其帶電表層使蛋白質(zhì)分子彼此排斥，而蛋白質(zhì)分子與水分子間的相互作用卻加強(qiáng)，因而溶解度提高。但當(dāng)大量中性鹽加入，使水的活度降低，進(jìn)而導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子表面電荷逐被中和，水化膜逐漸被破壞，最終引起蛋白質(zhì)分子間相互聚集并從溶液中析出。用于鹽析的中性鹽通常有硫酸銨(AmmoniumSulfate)、硫酸鈉(sodiumsulfate)和硫酸鎂(MagnesiumSulfate)等，而以硫酸銨為最佳，它在水中溶解度大而溫度系數(shù)小(在25℃時(shí)，溶解度為767g/L；在0℃時(shí)，溶解度為697g/L)，分離效果好，能保持蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象，且價(jià)廉可得。不同蛋白質(zhì)鹽析時(shí)所需鹽濃度不同，故調(diào)節(jié)鹽濃度可適當(dāng)?shù)貙⒌鞍踪|(zhì)分開(kāi)。添加飽和硫酸銨溶液，公式如下：式中，V為需加入飽和硫酸銨的體積（ml）

V0為原來(lái)溶液的體積（ml）

S2為需達(dá)到的硫酸銨飽和度(saturation)S1為原來(lái)溶液的硫酸銨飽和度固體硫酸銨直接加入到原蛋白質(zhì)溶液中，計(jì)算方法式中，W為將1升S1飽和度的溶液提高到S2飽和度時(shí)所需加入的固體硫酸銨的重量（g）

A、B為常數(shù)，與溫度有關(guān)，如℃時(shí)，A為0.27，B為707，20℃時(shí)，A為0.29，B為756鹽析時(shí)的注意事項(xiàng)announcements在鹽析過(guò)程中，注意所添加硫酸銨(AmmoniumSulfate)的純度purity同一溶液中欲分離幾種蛋白質(zhì)，可采用分段(segmenting)鹽析法(saltfractionation)鹽析和等電點(diǎn)沉淀相配合鹽析酶制劑(enzymepreparation)時(shí)，注意溫度蛋白質(zhì)濃度(concentration)應(yīng)適度appropriate等電點(diǎn)沉淀法(isoelectricprecipitation)proton酸是質(zhì)子（H+）供體（donor），堿是質(zhì)子的受體(acceptor)有機(jī)溶劑沉淀法(Organicsolventsprecipitation)

有機(jī)溶劑的存在會(huì)使溶液的介電常數(shù)降低，溶液介電常數(shù)降低，就使溶質(zhì)分子間的靜電引力增大，互相吸引而易于凝集；有機(jī)溶劑與水互相作用，使溶質(zhì)分子表面的水膜破壞，也使其溶解度降低而沉淀析出。介電常數(shù)又叫介質(zhì)常數(shù)，介電系數(shù)或電容率，它是表示絕緣能力特性的一個(gè)系數(shù)，以字母ε表示，單位為法/米

附常見(jiàn)溶劑的介電常數(shù)

H2O(水)78.5

HCOOH(甲酸)58.5

HCON(CH3)2(N,N-二甲基甲酰胺)36.7

CH3OH(甲醇)32.7

C2H5OH(乙醇)24.5

CH3COCH3(丙酮)20.7

n-C6H13OH（正己醇）13.3

CH3COOH(乙酸或醋酸)6.15

C6H6(苯)2.28

CCl4(四氯化碳)2.24

n-C6H14（正己烷）1.88

復(fù)合沉淀法

在溶液中加入某些物質(zhì)使它與蛋白質(zhì)等形成復(fù)合物而沉淀下來(lái)，從而達(dá)到分離的方法常用的復(fù)合沉淀劑有單寧、聚乙二醇聚、丙烯酸等沉淀法。

金屬鹽沉淀法利用溶液中某種溶質(zhì)與某些金屬離子反應(yīng)，生成金屬鹽沉淀，而與其他組分分離的方法。選擇性變性沉淀法二、膜分離技術(shù)

Membraneseparationtechnique

膜分離（membraneseparation）利用具有一定選擇性透過(guò)特性的過(guò)濾介質(zhì)進(jìn)行物質(zhì)的分離純化。

膜分離技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)(advantage)處理效率高(efficient)，設(shè)備易于放大可在室溫或低溫下操作，適宜于熱敏物質(zhì)分離濃縮化學(xué)與機(jī)械強(qiáng)度最小，減少失活(lesseninactivate)無(wú)相轉(zhuǎn)變，省能(tosaveenergy)有相當(dāng)好選擇性，可在分離、濃縮的同時(shí)達(dá)到部分純化的目的選擇合適膜與操作參數(shù)，可得到較高回收率系統(tǒng)可密閉循環(huán)，防止外來(lái)污染(topreventpollution)不外加化學(xué)物，透過(guò)液可循環(huán)使用，降低了成本，并減少對(duì)環(huán)境的污染膜分離存在的不足(deficiency)：膜面發(fā)生污染，使膜性能降低耐藥性、耐熱性、耐溶劑能力都有限。單獨(dú)采用膜分離技術(shù)效果有限膜的分類(lèi)按分離粒子或分子的大小分類(lèi)依據(jù)膜內(nèi)平均孔徑、推動(dòng)力和傳遞機(jī)制分類(lèi)依據(jù)形態(tài)學(xué)孔膜大小：微濾膜0.05～10μm；超濾膜1～50n

m

膜對(duì)稱(chēng)性依據(jù)化學(xué)特性分類(lèi)依據(jù)組件的個(gè)形和種類(lèi)來(lái)分離微濾（0.05-10um）超濾(0.001-0.05um)反滲透(0.1-1nm)透析透析膜一般為孔徑

5-10nm，主要用于分離和濃縮濃差極化與膜污染及清洗方法濃差極化(concentrationpolarization)：是指在分離過(guò)程中，料液中的溶劑在壓力驅(qū)動(dòng)下透過(guò)膜，溶質(zhì)被載留，于是在膜表面與臨近膜面區(qū)域濃度越來(lái)來(lái)越高。在濃度梯度作用下，溶質(zhì)由膜面向本體溶液擴(kuò)散，形成邊界層，使流體阻力與局部滲透壓增加，從而導(dǎo)致溶劑透過(guò)量下降。溶劑向膜面流動(dòng)相起溶質(zhì)向膜面流動(dòng)，當(dāng)溶質(zhì)向膜面的流動(dòng)速度與濃度梯度使溶質(zhì)向本體溶液擴(kuò)散速度達(dá)到平衡時(shí)，膜面附近存在一個(gè)穩(wěn)定的濃度梯度區(qū)，這一區(qū)域稱(chēng)為濃度極化邊界層，這一現(xiàn)象稱(chēng)為濃差極化膜污染(membranespollution)：是指處理物料中的微粒、膠體粒子或溶質(zhì)大分子由于與膜存在物理化學(xué)相互作用或機(jī)械作用而引起的在膜表面或膜孔內(nèi)吸附、沉積造成膜孔徑變小或堵塞，使膜產(chǎn)生透過(guò)流量與分離特性的不可逆變化現(xiàn)象。

清洗方法(washmethod)物理方法化學(xué)方法高流速水沖洗脈沖電解清洗電滲透反洗法稀酸稀堿酶法層析分離(chromatographicseparation)是利用混合液(mixedliquor)中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)（分了的大小(size)和形狀(shape)、分子極性(polarity)、吸附力(adsorptivepower)、分子親和力affinity、分配系數(shù)(partitioncoefficient)等）的不同，使各組分以不同比例分布在兩相中（固定相；流動(dòng)相）三、層析技術(shù)

chromatographytechnique層析技術(shù)分類(lèi)Classification凝膠過(guò)濾層析gelfiltrationchromatography離子交換層析ionexchangechromatography親和層析affinitychromatography反相層析reversedphasechromatography疏水層析hydrophobicchromatography吸附層析adsorptionchromatography分配層析partitionchromatography根據(jù)分離原理分類(lèi)按流動(dòng)相分類(lèi)氣相層析液相層析按固定相分類(lèi)紙層析柱層析薄層層析薄膜層析1.凝膠過(guò)濾層析

gelfiltrationchromatography

凝膠過(guò)濾層析(Gelfiltrationchromatography)是利用具有一定孔徑的多孔凝膠作為固定相，把分子大小不同的物質(zhì)分離開(kāi)來(lái)的一種層析技術(shù)，又叫凝膠過(guò)濾(Gelfiltration)、分子篩層析(Molecularsievechromatography)和凝膠滲透層析(Gelpermeationchromatography)。目前經(jīng)常使用的凝膠有葡聚糖凝膠(商品名為Sephadex)、聚丙烯酰胺凝膠(生物膠、BioGelP)、瓊脂糖凝膠(Sepharosegel)及由烷基葡聚糖與甲叉丙烯酰胺共價(jià)交聯(lián)制成的Sephacryl等。

凝膠過(guò)濾層析的優(yōu)點(diǎn)(advantage)1.凝膠介質(zhì)不帶電荷(noelectriccharge)，具有良好的穩(wěn)定性(stability)，在很寬的范圍內(nèi)呈化學(xué)惰性。2.溶液中各種離子、小分子、去污劑、表面活性劑、蛋白變性劑等不會(huì)對(duì)分離產(chǎn)生影響。3.應(yīng)用范圍廣，分子量(molecularweight)從幾百到百萬(wàn)4.設(shè)備(equipment)相對(duì)簡(jiǎn)單simple、易于操作，分離周期短，連續(xù)分離時(shí)介質(zhì)不需再生凝膠過(guò)濾原理principle凝膠過(guò)濾介質(zhì)的參數(shù)(parameter)及性質(zhì)(properties)粒度：理論塔板數(shù)，均勻度交聯(lián)度和網(wǎng)度結(jié)構(gòu)：sephadexG-15;G-25;G-50;G-75;G-100;G-150;G-200機(jī)械強(qiáng)度物理和化學(xué)穩(wěn)定性2.離子交換層析

ionexchangechromatography

是指液相中的離子與固相交換基團(tuán)中的離子的可逆交換反應(yīng)。利用這個(gè)反應(yīng)將要分離的蛋白質(zhì)混合物先在一個(gè)pH值的溶液中全部溶解，而后流經(jīng)固定相使之與固相上的離子進(jìn)行交換，并吸附于固相上。再根據(jù)混合物中各組分解離度的差異，用不同離子強(qiáng)度或pH值的溶液分別洗脫下來(lái)，以達(dá)到分離混合物組分的目的。此即為離子交換層析。聚焦層析聚焦層析是在等電聚焦的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，它以等電點(diǎn)的差異和離子交換行為為依據(jù)來(lái)分離純化蛋白質(zhì)的一種層析方法。既具有聚焦作用的性能，又有濃縮樣品和分辨率高的優(yōu)點(diǎn)。聚焦層析的固定相為多緩沖交換劑，流動(dòng)相為多緩沖劑。制備電泳蛋白質(zhì)的分離純化方法利用吸附能力不同的分離純化方法

吸附層析(Absorbentchromatography)是利用吸附劑對(duì)不同物質(zhì)的吸附力不同，而使混合液中各組分分離的方法。通常用于蛋白質(zhì)分離純化吸附劑有硅藻土、氧化鋁、磷酸鈣、羥基磷灰石(Hydroxyapatite,HA)和活性炭等。一般從柱上洗脫出次序是：堿性蛋白→中性蛋白→酸性蛋白。不能用離子交換或凝膠層析等方法分開(kāi)的蛋白質(zhì)，如血清、粘蛋白、微管蛋白等，用此法分離有時(shí)可得到較好的效果。由于HA的吸附容量高、穩(wěn)定性好，因此，在分離純化蛋白質(zhì)、酶、核酸和病毒等物質(zhì)方面得到廣泛應(yīng)用，對(duì)于分離RNA、單鏈與雙鏈DNA及雜型雙鏈DNARNA等也是好材料。

蛋白質(zhì)的分離純化方法利用生物功能專(zhuān)一性的純化方法親和層析(Affinitychromatography)又稱(chēng)功能層析(Functionchromatography)和生物專(zhuān)一吸附(Biospecificabsorption)。它是根據(jù)生物大分子能與一些物質(zhì)進(jìn)行專(zhuān)一結(jié)合的特性而設(shè)計(jì)的層析方法。例如，一些酶的底物、輔酶、抑制劑、調(diào)節(jié)效應(yīng)物能與相應(yīng)的酶專(zhuān)一結(jié)合。激素和受體、抗原和抗體亦互為配基。因此，用化學(xué)方法可以把一種酶的底物或抑制劑連接到某種固相支持物(如Sepharose4B)上以制成專(zhuān)一吸附劑，并裝進(jìn)層析柱，再用含這種酶的樣品溶液通過(guò)層析柱，結(jié)果該酶吸附在層析柱上，而其他不被吸附的酶或蛋白質(zhì)等全部流出。接著用適當(dāng)緩沖溶液把欲分離純化的酶從層析柱上洗脫下來(lái)，這樣酶可一次提純。親和層析的方法簡(jiǎn)便、迅速、高效、操作步驟少、活性不易喪失，是分離純化蛋白質(zhì)、酶、激素與重組蛋白最有潛力的技術(shù)。缺點(diǎn)是要分離一種物質(zhì)必須找到適宜配基，并將其制成固相載體后方可進(jìn)行這種層析。該法成功的另一關(guān)鍵是防止配基的脫落，通常選用的配基以親和力適中，且特異性較強(qiáng)。

電泳技術(shù)

electrophoretictechnique所謂電泳，即帶電顆粒在電場(chǎng)的作用下，向著與其電性相反的電極(Electrode)移動(dòng)的現(xiàn)象。目前所采用的電泳方法，大致可分為三類(lèi)：顯微電泳、自由界面電泳及區(qū)帶電泳。以區(qū)帶電泳應(yīng)用最廣。區(qū)帶電泳(Zoneelectrophoresis)是樣品物質(zhì)在一隋性支持物上進(jìn)行電泳的過(guò)程，因電泳后樣品的不同組分可形成帶狀區(qū)間。采用不同類(lèi)型的支持物進(jìn)行該電泳時(shí)，能分離鑒定小分子物質(zhì)(如氨基酸、肽類(lèi)和核苷酸等)和大分子物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、核酸以及病毒顆粒等)。電泳的方式方法雖有所不同，但基本原理是相同的。顆粒在電場(chǎng)中的移動(dòng)方向，決定于它們所帶電荷的性質(zhì)。移動(dòng)速度主要決定于本身所帶的凈電荷量、顆粒的大小和形狀。此外，還受到電場(chǎng)強(qiáng)度、溶液pH、離子強(qiáng)度、支持物的特性及電滲(Electronosmosis)等外界條件的影響。帶電顆粒在單位電場(chǎng)中泳動(dòng)的速度稱(chēng)為泳動(dòng)率(Migrationrate,m)或遷移率。醋酸纖維薄膜電泳

celluloseacetatemembraneelectrophoresis

有電滲小、分離速度快、樣品用量少、分離清晰、對(duì)樣品無(wú)拖尾和無(wú)吸附現(xiàn)象等優(yōu)點(diǎn)，并且染色后可透明，更便于保存和定量分析。目前已廣泛用于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、同工酶、胎兒甲種球蛋白、體液和核酸等方面的檢測(cè)，并已成為醫(yī)學(xué)和臨床檢驗(yàn)的常規(guī)技術(shù)。2.瓊脂和瓊脂糖凝膠電泳

AgaroseGelElectrophoresis

瓊脂糖很容易制成各種形狀的凝膠，容易掌握，容易保存，凝膠的均一性好、牢固、富有彈性，容易固定和干燥，還可制成清晰的干膜長(zhǎng)期保存。瓊脂或瓊脂糖凝膠電泳(AgarorAgarosegelelectrophoresis)因膠的網(wǎng)孔大，液體多，近似于自由電泳，具有電泳速度快、區(qū)帶整齊、分辨率高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。聚丙烯酰胺凝膠電泳

acrylamidegelelectrophoresis

是以人工合成的聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的一種電泳技術(shù)。聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(ACr)和交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺(Bis)在催化劑作用下聚合交聯(lián)而成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。聚合時(shí)所用的催化劑可以是化學(xué)聚合催化劑過(guò)硫酸銨和四甲基乙二胺(TEMED，加速劑)，也可以是光聚合催化劑核黃素和TEMED。凝膠的機(jī)械強(qiáng)度、彈性、網(wǎng)孔的大小主要取決于Acr和Bis的比例，膠的總濃度及聚合條件。

PAGE可按凝膠的形狀分為盤(pán)狀和垂直板電泳。又按凝膠中pH、緩沖液組成、凝膠孔徑和電壓梯度是否一致分為連續(xù)電泳和不連續(xù)電泳兩種。不連續(xù)電泳具有較高的分辨力，這是因?yàn)樵诜蛛x過(guò)程中，除了具有一般電泳的電荷效應(yīng)外，還有濃縮效應(yīng)和分篩效應(yīng)。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）十二烷基硫酸鈉(Sodiumdecylsulfate,SDS)是一種陰離子去污劑，它能以一定的比例和蛋白質(zhì)結(jié)合，形成一種SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物（compound）。此復(fù)合物可用具有SDS的PAGE進(jìn)行分離，通常把這種電泳稱(chēng)為SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE)。SDSPAGE則是根據(jù)各種蛋白質(zhì)分子量的不同進(jìn)行分離的。電泳前，在蛋白質(zhì)溶液中加入SDS和巰基乙醇進(jìn)行熱變性，巰基乙醇即使蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵還原，SDS破壞蛋白質(zhì)亞基間的非共價(jià)鍵，使含有亞基(Subunit)的蛋白質(zhì)解離成各個(gè)亞基。由于SDS帶有較強(qiáng)的負(fù)電荷，使SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物大大超過(guò)天然蛋白原有的電荷，從而消除或掩蓋了不同種類(lèi)蛋白質(zhì)分子原有電荷的差異。并且SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合后，引起蛋白質(zhì)構(gòu)象的變化，在水溶液中都變成長(zhǎng)橢圓形，其短軸長(zhǎng)度都為1.8nm左右，而長(zhǎng)軸長(zhǎng)度則與蛋白質(zhì)分子量成正比。故蛋白質(zhì)在SDSPAGE中的泳動(dòng)率不再