顯微鏡的使用及維護

實驗一普通光學(xué)顯微鏡的使用與維護ALEX4/24/2023前言顯微鏡是一種高精密的儀器,目前已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、材料科學(xué)、醫(yī)學(xué)等學(xué)科領(lǐng)域。第一代為光學(xué)顯微鏡，第二代為電子顯微鏡，第三代為掃描隧道顯微鏡。4/24/2023光學(xué)顯微鏡電子顯微鏡掃描隧道顯微鏡4/24/2023一、實驗?zāi)康?.掌握顯微鏡的正確使用2.熟悉顯微鏡的工作原理、基本結(jié)構(gòu)、性能參數(shù)3.了解顯微鏡的拆裝技術(shù)和主要性能參數(shù)的設(shè)定4/24/2023二、顯微鏡1.光學(xué)顯微鏡的成像原理

要獲得清晰的像，被觀察標本AB應(yīng)位于物鏡前焦點外至兩倍焦距之間。標本AB經(jīng)兩級放大，在眼的明視范圍內(nèi)看到放大的A``B``像。

4/24/20232、普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)普通顯微鏡在結(jié)構(gòu)上分：光學(xué)系統(tǒng)，機械系統(tǒng)。光學(xué)系統(tǒng)包括物鏡、目鏡、聚光鏡、反光鏡等。機械系統(tǒng)包括底座、鏡臂粗調(diào)手輪、微調(diào)手輪、載物臺、轉(zhuǎn)換器等。4/24/20231.物鏡顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)最核心的部件，其性能直接關(guān)系到顯微鏡的性能和成像質(zhì)量。

顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)4/24/20232.目鏡也稱接目鏡，實質(zhì)上是放大鏡，其作用是把物鏡分辨和放大的實像再放大并映入觀察者眼中。

顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)4/24/2023聚光鏡光源(燈在底座內(nèi))3.光源4.聚光鏡

顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)4/24/2023聚光鏡孔徑光闌4/24/2023物鏡轉(zhuǎn)換器載物臺調(diào)節(jié)手輪單目鏡鏡筒物鏡轉(zhuǎn)換器顯微鏡的機械系統(tǒng)4/24/2023聚光器升降螺旋玻片夾調(diào)焦螺旋調(diào)焦螺旋鎖顯微鏡的機械系統(tǒng)4/24/20233、普通光學(xué)顯微鏡的正確使用（1）.顯微鏡取鏡放置：①移取時右手握住鏡臂，左手托住鏡座，保持顯微鏡平直②顯微鏡放置在穩(wěn)定的臺面上，離臺邊一定距離（6cm以上）③正確連接接地良好的電源。4/24/2023將主開關(guān)打開，調(diào)節(jié)亮度將樣品置于載物臺，移入光路以轉(zhuǎn)換器使低倍物鏡入光路轉(zhuǎn)動調(diào)焦旋鈕，對樣本聚焦調(diào)節(jié)目鏡瞳間距和屈光度調(diào)節(jié)孔徑光闌和視場光闌將觀察物鏡轉(zhuǎn)入光路，再聚焦再次調(diào)節(jié)亮度，開始觀察（2）.普通光學(xué)顯微鏡的基本觀察步驟3、普通光學(xué)顯微鏡的正確使用4/24/20233、普通光學(xué)顯微鏡的正確使用（3）.清潔收鏡：①觀察完畢，移去標本，扭轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器，使兩低倍物鏡鏡頭呈V字形于載物臺上方②用擦鏡紙擦凈油鏡鏡頭，綢布擦拭鏡身③是有張力的部件處于松弛狀態(tài)（聚光鏡、載物臺）④調(diào)節(jié)光亮度旋鈕將光亮度調(diào)至最暗，關(guān)閉電源。4/24/2023（1）.數(shù)值孔徑

4、顯微鏡的性能參數(shù)又稱鏡口率，是物體與物鏡間媒質(zhì)的折射率n與物鏡孔徑角的一半（β）正弦值的乘積，用NA表示。即：NA＝n×sinβ數(shù)值孔徑與分辨率成正比，與放大率成正比，NA增大，視場寬度與工作距離都會相應(yīng)地變小。4/24/2023（2）.放大倍數(shù)又稱為放大率，指顯微鏡經(jīng)多次成像后最終所觀察到的物像大小相對于原物體大小的比值，常記作M。即：M＝maq

m是物鏡的放大倍數(shù)

a為目鏡的放大倍率

q是在雙目顯微鏡中所增設(shè)的棱鏡產(chǎn)生的放大倍數(shù)（雙目顯微鏡取值為1.6倍，單目顯微鏡q值為1）。4/24/2023物鏡一般刻有放大倍數(shù)×NA（數(shù)值孔徑）如：4×0.1（1組鏡片）10×0.25（2組鏡片）40×0.65（3組鏡片）100×1.25（4組鏡片）160/0.17（機械鏡筒長/蓋玻片的厚度）4/24/2023（3）.工作距離指顯微鏡正常觀察物像時物鏡表面到被觀察標本間的距離顯微鏡使用過程中習(xí)慣所說的“調(diào)焦”指的就是調(diào)整物鏡的工作距離它與物鏡的數(shù)值孔徑成反比，一般情況下，物鏡的數(shù)值孔徑越大，其工作距離越小。4/24/2023（4）.視野視野又稱視場，是指通過顯微鏡所能看到的標本范圍。視野成圓形視野大小決定于物鏡的倍數(shù)及目鏡光闌的大小，小的放大倍數(shù)和大光闌可獲得較大的視野，反之則視野較小因為視野的局限，一般均要通過機械裝置移動、分區(qū)觀察標本。4/24/2023（5）.景深又稱焦點深度，是指在成一幅清晰物像的前提下，像平面不變，景物沿光軸前后移動的距離顯微鏡觀察時，不僅位于聚焦平面上的點是清楚的，而且在景深范圍內(nèi)的各點也是清楚的景深與總放大倍數(shù)及物鏡的分辨率成反比（垂直鑒別能力）4/24/2023三、實驗器材1.普通光學(xué)顯微鏡一臺2.紅細胞懸液3.骨髓片4.微量吸管、一次性塑料吸管等4/24/2023四、操作步驟1、顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)的拆卸和組裝（僅示教）拆卸：拆的次序是由下而上，即先拆光源、后拆聚光鏡、物鏡、目鏡組裝：裝的次序是由上而下，即先目鏡、后物鏡、聚光鏡、光源2、普通光學(xué)顯微鏡的調(diào)試3、顯微鏡光學(xué)性能參數(shù)的設(shè)定4、正確使用光學(xué)顯微鏡觀察不染色標本和染色標本，并總結(jié)其不同之處（不染色標本制備：用微量吸管吸取EDTA抗凝血20ul，加入到5ml生理鹽水中，混勻，用一次性塑料吸管滴加3-5滴與潔凈玻片上）4/24/2023五、注意事項1.轉(zhuǎn)換物鏡時須旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器，勿轉(zhuǎn)物鏡，否則易損壞光軸。2.目鏡不要輕易拿下，否則灰塵會落入物鏡中。3.不用時，使載物臺落下，呈放松狀態(tài)。4.光源燈不用時關(guān)到最小，保護燈泡。

4/24/2023六、維護與保養(yǎng)1.保證良好的使用環(huán)境臺面穩(wěn)固、環(huán)境良好。2.保持正確的使用方法操作輕巧、舒緩，正確旋轉(zhuǎn)各類螺旋，合理使用照明光源和油鏡。3.定期進行清潔維護正確清潔，定期維護。4.擦鏡：1）擦鏡液的配制：乙醇：乙醚=7：3或80%：20%2）先用洗耳球吹去浮塵。3）用長絮棉簽沾檫鏡液由中心向外擦。4/24/2023常見故障原因排除方法視場模糊、視場亮度不均、不能看到完整視場1．物鏡轉(zhuǎn)換器未能正確定位（物鏡未與光路同軸）1．旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器直至選用物鏡完全對中2．聚光器位置太低2．調(diào)整（升高）聚光器位置得到良好物像3．視場光闌未對中3．調(diào)整視場光闌使其良好對中4．視場光闌開得太小4．適當開大光闌七、常見故障與處理4/24/2023常見故障原因排除方法視場內(nèi)有污跡或灰塵1．目鏡、物鏡、聚光鏡等其它光學(xué)部件上有污跡和灰塵（旋動目鏡時污物轉(zhuǎn)動說明目鏡上有污物，否則污物在物鏡或聚光鏡上）1．正確擦拭顯微鏡的光學(xué)部件。擦拭目鏡和物鏡時必須使用合格的拭鏡紙、蘸取無水乙醇擦拭。要避免二次污染2．標本片上有污跡和灰塵2．正確擦拭標本片七、常見故障與處理4/24/2023常見故障原因排除方法觀察效果差、看不清細節(jié)、視場不均勻（反差過大）1．標本片正反面錯放1．翻轉(zhuǎn)，使蓋玻片向上2．