色譜指紋圖譜評(píng)價(jià)

色譜指紋圖譜評(píng)價(jià)2023/4/241第1頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六主要內(nèi)容◆

色譜指紋圖譜的緣起、屬性、特點(diǎn)和作用◆

中藥色譜指紋圖譜方法學(xué)◆

中藥色譜指紋圖譜試驗(yàn)的規(guī)范化◆

中藥色譜指紋圖譜的定性評(píng)價(jià)方法◆

應(yīng)用實(shí)踐2023/4/242第2頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六◆

色譜指紋圖譜的緣起、屬性、特點(diǎn)和作用2023/4/243第3頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六中藥質(zhì)量控制現(xiàn)狀《中國(guó)藥典》關(guān)于藥材所收錄的信息【浸出物】【炮制】【性味與歸經(jīng)】【名稱(chēng)】【性狀】【鑒別】【檢查】【含量測(cè)定】【功能與主治】【用法與用量】【貯藏】【來(lái)源】宏觀特征鑒別微觀特征鑒別生藥學(xué)動(dòng)物分類(lèi)學(xué)植物分類(lèi)學(xué)礦物學(xué)微生物分類(lèi)學(xué)藥物分析學(xué)經(jīng)驗(yàn)鑒別定性鑒別含量測(cè)定指標(biāo)成分、對(duì)照藥材2023/4/244第4頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六齊墩果酸、熊果酸、大黃酸、槲皮素、小檗堿目前中藥質(zhì)量控制的局限●缺乏化學(xué)對(duì)照品●化學(xué)對(duì)照品缺乏專(zhuān)屬性●物質(zhì)群體間的量化特征無(wú)法體現(xiàn)黃柏、黃連——小檗堿、巴馬亭的比例人參、西洋參或三七——幾種人參皂苷的比例●中藥整體的用藥的特色無(wú)法體現(xiàn)2023/4/245第5頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六中藥色譜指紋圖譜的提出●

中藥依賴(lài)其所含的多種化學(xué)成份發(fā)揮療效●

任何單一的活性成份或指標(biāo)成份都難以有效地評(píng)價(jià)中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣●

利用現(xiàn)代分析技術(shù)分析不同中（成）藥的整體特征以提高鑒別的準(zhǔn)確性——色譜指紋圖譜分析（ChromatographicFingerprintAnalysis）——梁逸增（中南大學(xué)）

2023/4/246第6頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六中藥色譜指紋圖譜的特點(diǎn)及屬性

中藥指紋圖譜同傳統(tǒng)鑒別方法的區(qū)別在于：它不是從一個(gè)“點(diǎn)”，而是從一個(gè)二維的“面”（一個(gè)在特定條件下的完整色譜的整體特征信息）來(lái)鑒別真?zhèn)危瑫r(shí)在定量操作的前提下，得到“量”方面的信息還可以估量待測(cè)樣品之間總體量的差別，從而從量的角度給以動(dòng)態(tài)的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

色譜指紋圖譜不強(qiáng)調(diào)個(gè)體的絕對(duì)唯一性，而強(qiáng)調(diào)統(tǒng)一藥材群體的相似性，及物種群體內(nèi)的唯一性2023/4/247第7頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六中藥色譜指紋圖譜的特點(diǎn)及屬性整體性模糊性對(duì)照樣品與待測(cè)樣品指紋圖譜的相似性，而不是完全相同比較色譜的“完整面貌”，在不同環(huán)境的樣品色譜中搜索和提取與該藥材指紋圖譜“面貌”相關(guān)的特征，加以區(qū)別因此，中藥色譜指紋圖譜強(qiáng)調(diào)的是準(zhǔn)確的辨認(rèn)，而不是精確的計(jì)算2023/4/248第8頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六◆

中藥色譜指紋圖譜方法學(xué)2023/4/249第9頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六柱色譜ColumnChromatography平面色譜PlanarChromatography液相色譜LiquidChromatography(LC)氣相色譜GasChromatography(GC)薄層色譜ThinLayerChromatography(TLC)毛細(xì)管電泳CapillaryElectrophoresis（CE）2023/4/2410第10頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六反相高效液相色譜(RP-HPLC)ReversedPhaseHighPerformanceLiquidChromatography●適用范圍廣●分離性能好●分析速度快●流動(dòng)相選擇范圍寬●靈敏度高●色譜柱可多次重復(fù)使用●流出組分可以收集●采用多種檢測(cè)器，可同時(shí)獲取保留值信息和化合物的光譜、值譜信息對(duì)較為復(fù)雜的色譜實(shí)驗(yàn)條件要求比較苛刻，由此帶來(lái)不同實(shí)驗(yàn)室之間重現(xiàn)性的難度增大2023/4/2411第11頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六薄層色譜ThinLayerChromatography(TLC)●可在同板同時(shí)分析多達(dá)18個(gè)樣品，時(shí)效高●所用的是正相展開(kāi)劑，其組成變化靈活，可適應(yīng)多種成分的分離●離線操作，即可直觀比較圖譜，又可掃描得到輪廓圖和處理數(shù)據(jù)●占機(jī)時(shí)間短●具有色彩參數(shù)，可獲得色彩豐富的色譜圖像，直觀性強(qiáng)；同時(shí)輔以功能團(tuán)顯色劑還可提示成分的類(lèi)別，提高鑒別的專(zhuān)屬性?！裾咕嗑窒拊?0cm~20cm

，‘柱效’相對(duì)較低，對(duì)復(fù)雜組分不提高分離度則難以提取指紋特征的藥材受到限制?！耖_(kāi)放系統(tǒng)，對(duì)環(huán)境溫度、相對(duì)濕度要求較高2023/4/2412第12頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六氣相色譜GasChromatography(GC)●分離效能高●分析速度快●適用于植物的揮發(fā)油成分及其它易揮發(fā)性成分或可轉(zhuǎn)化為可揮發(fā)的成分測(cè)定●可提供保留值信息，與質(zhì)譜聯(lián)用，還可提供更豐富的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息分辨率高，得到的色譜組份非常復(fù)雜，尤其是含揮發(fā)油藥材，單萜類(lèi)成分組成很不穩(wěn)定，樣品間差異可能很大，處理數(shù)據(jù)和判別相似度時(shí)一定程度的取舍毛細(xì)管電泳CapillaryElectrophoresis●分離效能高●分析速度快●高分辨率●可與紫外、熒光、電化學(xué)、質(zhì)譜、拉曼光譜等聯(lián)用，可提供更豐富的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息2023/4/2413第13頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六◆

中藥色譜指紋圖譜試驗(yàn)的規(guī)范化2023/4/2414第14頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六中藥指紋圖譜的建立指紋圖的獲取方法驗(yàn)證指紋圖的校驗(yàn)和復(fù)核中藥材指紋圖譜飲片指紋圖譜中藥提取物指紋圖譜中藥生產(chǎn)中間產(chǎn)品指紋圖譜中藥各類(lèi)制劑和相關(guān)產(chǎn)品指紋圖譜中藥指紋圖譜2023/4/2415第15頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六指紋圖譜的獲取指紋圖譜建立和辨識(shí)指紋圖譜試驗(yàn)研究對(duì)照品（參比物）供試品收集供試品制備2023/4/2416第16頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六供試品的收集真實(shí)性、代表性；收集量不少于10批原始紀(jì)錄藥材名稱(chēng)供試品來(lái)源藥材名稱(chēng)收集時(shí)間及收集人貨源情況調(diào)查基原鑒定及鑒定人質(zhì)量評(píng)估供試品的留樣、貯藏和標(biāo)簽◆

原料藥材2023/4/2417第17頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六◆

半成品原始紀(jì)錄半成品名稱(chēng)混批前批號(hào)日期提取方法（關(guān)鍵技術(shù)）混批后批號(hào)中藥指紋圖譜供試品的留樣、貯藏和標(biāo)簽2023/4/2418第18頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六◆

成品原始紀(jì)錄供試品批號(hào)生產(chǎn)單位供試品數(shù)量供試品的留樣、貯藏和標(biāo)簽2023/4/2419第19頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六供試品制備取樣稱(chēng)樣制備定容放置標(biāo)簽避光、低溫、密閉容器條件下短期放置標(biāo)示濃度溶劑萃取、固相萃取、其他方法供試品與選樣1:10具有代表性與藥材標(biāo)號(hào)一致2023/4/2420第20頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六對(duì)照品（參照物）◆

對(duì)照品（參照物）的作用

考察指紋圖譜的穩(wěn)定程度和重現(xiàn)性有助于指紋圖譜的辨認(rèn)◆

對(duì)照品（參照物）的選擇供試品種的活性成分或指標(biāo)成分指紋圖譜中的穩(wěn)定的指紋峰內(nèi)標(biāo)物◆

對(duì)照品（參照物）溶液制備2023/4/2421第21頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六色譜方法選擇的原則?

專(zhuān)屬性

建立的指紋圖譜必須能夠表達(dá)該品種的特征?

重現(xiàn)性

同一品種同一樣品指紋圖譜中構(gòu)成指紋特征的各特征峰（或斑點(diǎn)）作為整體（峰位、峰數(shù)、峰的豐度、各峰的大致比例）在不同實(shí)驗(yàn)室和不同操作者之間得到的色譜整體特征應(yīng)有較高的相似度?

普遍適用性

色譜方法和實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)易于推廣和便于操作指紋圖譜的實(shí)驗(yàn)研究2023/4/2422第22頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六中藥指紋圖譜實(shí)驗(yàn)研究的基本要求?

實(shí)驗(yàn)室基本要求●實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備承擔(dān)指紋圖譜測(cè)定的總體能力●

試驗(yàn)設(shè)備通過(guò)檢驗(yàn)證明符合指紋圖譜實(shí)驗(yàn)研究的需要●

技術(shù)人員具備從事指紋圖譜實(shí)驗(yàn)研究的能力●

對(duì)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)能力評(píng)價(jià)應(yīng)由定期的內(nèi)部獨(dú)立檢查●試驗(yàn)數(shù)據(jù)有可追溯，與其它實(shí)驗(yàn)室有可比性●實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有質(zhì)量保證體系，以確保各種措施的透明與一致2023/4/2423第23頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六?

儀器

性能能夠滿(mǎn)足指紋圖譜實(shí)驗(yàn)需要需經(jīng)校驗(yàn)?

試驗(yàn)方法和試驗(yàn)條件優(yōu)選的目的

選取相對(duì)簡(jiǎn)單易行的方法和條件，獲取足以代表品種特征的指紋圖譜，以滿(mǎn)足指紋圖譜的專(zhuān)屬性、重現(xiàn)性和普遍適用性的需要2023/4/2424第24頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六試驗(yàn)需考察的內(nèi)容?

液相色譜

●

色譜柱：比較試驗(yàn)加以選擇2023/4/2425第25頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六●

流動(dòng)相：至少用三種不同組成比較流動(dòng)相1流動(dòng)相2流動(dòng)相32023/4/2426第26頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六●

適宜的柱溫和檢測(cè)波長(zhǎng)2023/4/2427第27頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六?

薄層色譜

●

展開(kāi)劑系統(tǒng)：至少需作三種進(jìn)行比較●

考察濕度和溫度的影響2023/4/2428第28頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六?

氣相色譜

●色譜柱：選擇適宜色譜柱●升溫程序設(shè)定樣品的預(yù)處理不同提取方法比較樣品預(yù)處理前后比較2023/4/2429第29頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六中藥指紋圖譜的方法驗(yàn)證?

目的

考察和證明采用的指紋圖譜測(cè)定方法具有可靠性和可重復(fù)性，符合指紋圖譜的要求。?

驗(yàn)證內(nèi)容

●

專(zhuān)屬性

●準(zhǔn)確度（結(jié)果準(zhǔn)確度和系統(tǒng)準(zhǔn)確度）

●精密度（重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性）

●范圍

●穩(wěn)健性（耐用性）2023/4/2430第30頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六●

專(zhuān)屬性（Specificity）

指紋圖譜的測(cè)定方法對(duì)中藥樣品的分析鑒定能力專(zhuān)屬性的考察參數(shù)

＆峰純度

＆總峰響應(yīng)值

＆容量因子分布

＆最難分離物質(zhì)對(duì)的分離情況

＆總分離效能

此外，還需評(píng)價(jià)有關(guān)樣品（藥材、中間體、制劑和相關(guān)產(chǎn)品）見(jiàn)的相關(guān)性，并盡可能顯示出樣品中特征響應(yīng)2023/4/2431第31頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六●

準(zhǔn)確度（Accuracy）

測(cè)定系統(tǒng)所的指紋圖譜與“對(duì)照用指紋圖譜”之間的相近程度

系統(tǒng)準(zhǔn)確度儀器的操作指標(biāo)與波動(dòng)范圍樣品在分析系統(tǒng)中的殘留和對(duì)基線的響應(yīng)色譜分離情況（峰純度、再現(xiàn)程度、峰型變化描述）指標(biāo)成分的定量?jī)?nèi)容結(jié)果準(zhǔn)確度

多批次（10批以上）樣品測(cè)定結(jié)果的相似度2023/4/2432第32頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六●

精密度（Precision）

規(guī)定條件下對(duì)均質(zhì)樣品多次取樣進(jìn)行一系列檢測(cè)結(jié)果有相近程度（離散度）

重復(fù)性（Repeatability）

同樣的操作條件下在較短的時(shí)間間隔的精密度線性范圍內(nèi)至少測(cè)定9次或100％的試驗(yàn)濃度下測(cè)定6次

中間精密度（IntermediatePrecision）

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部條件改變測(cè)定的精密度

重現(xiàn)性（Reproducibility）

不同實(shí)驗(yàn)室間的精密度2023/4/2433第33頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六●

范圍（Range）

樣品中被分析組分的較高濃度和較低濃度的一個(gè)區(qū)間，并已證實(shí)在此區(qū)間內(nèi)，該方法具有合適的準(zhǔn)確度和精密度

相似度維持在0.9以上的濃度范圍位指紋圖譜測(cè)定范圍●

穩(wěn)健性（Robustness）

不同條件下分析同一樣品所得結(jié)果的變化程度，是中藥指紋圖譜測(cè)定方法耐受環(huán)境變化的顯示2023/4/2434第34頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六指紋圖譜實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程◆

高效液相色譜指紋圖譜實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程◆薄層色譜指紋圖譜實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程◆氣相色譜指紋圖譜實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程◆毛細(xì)管電泳指紋圖譜實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程2023/4/2435第35頁(yè)，共39頁(yè)，2023年，2月20日，星期六◆

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