血液標(biāo)本的臨床檢驗(yàn)

血液標(biāo)本的臨床檢驗(yàn)第1頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日血液及骨髓標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)第2頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日一、標(biāo)本的采集

1．采血指征：

發(fā)熱(≥38℃)或低溫(≥36℃)寒戰(zhàn)，白細(xì)胞增多，皮膚黏膜出血、昏迷、多器官衰竭，血壓降低，C反應(yīng)蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出現(xiàn)粒細(xì)胞減少，血小板減少等，或同時(shí)具備上述幾種體征時(shí)而臨床可疑菌血癥應(yīng)采集血液培養(yǎng)。第3頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日2．采血時(shí)機(jī)：在患者發(fā)熱期間越早越好，最好在抗菌治療前，以發(fā)熱初期或高峰時(shí)為宜。第4頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日3．采血次數(shù)及間隔：對(duì)懷疑菌血癥的成年病人，推薦同時(shí)在不同部位采集2-3套（包括一套需氧瓶、一套厭氧瓶或2套需氧瓶）但24小時(shí)內(nèi)一般不超過3次。以后2～5天不必采血。但心內(nèi)膜炎、真菌血癥和導(dǎo)管相關(guān)性敗血癥應(yīng)多次采集。嬰幼兒病人，推薦在不同部位采集2套，可不做厭氧培養(yǎng)。第5頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日4．采血量以培養(yǎng)基的1/10為宜。成人每穿刺點(diǎn)應(yīng)采血5～10ml。兒童采血量適當(dāng)減少，嬰兒抽血量1～2ml。5．采血方法：

a.皮膚消毒和無菌操作；

b.從肘靜脈采血；對(duì)于亞急性心內(nèi)膜炎等病人，應(yīng)從肘動(dòng)脈或股動(dòng)脈采血更適宜；

c.不推薦血入瓶前換針頭；第6頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日6。骨髓標(biāo)本：用骨髓穿刺針從髂骨采集7.腦脊液標(biāo)本

1.嚴(yán)格無菌操作，采集后置于無菌試管中，15min內(nèi)保溫送到實(shí)驗(yàn)室，絕不可冷藏。

2.腦脊液標(biāo)本留取最小量：細(xì)菌：≧1ml（但抗酸桿菌≧2ml），真菌：≧2ml第7頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日8.標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：

血培養(yǎng)瓶破裂或有明顯污染培養(yǎng)瓶標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)申請(qǐng)單不符用過期的培養(yǎng)瓶采集標(biāo)本、采血量不足對(duì)于不合格標(biāo)本，及時(shí)通知采集人員重新留取標(biāo)本第8頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日二、標(biāo)本的接種1、血液標(biāo)本采集后，立即注入適當(dāng)?shù)囊后w增菌培養(yǎng)基內(nèi)，迅速輕搖，使充分混合，以防止凝固。2、一般細(xì)菌用普通肉湯或酚紅葡萄糖肉湯，營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌用肝浸液或胰胨肉湯等。3、如果病人曾服用磺胺類藥物，應(yīng)在每100ml培養(yǎng)基內(nèi)加對(duì)氨苯甲酸5mg。如果病人已用青霉素治療，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入青霉素酶100U／50ml（青霉素酶不耐熱，應(yīng)在臨用時(shí)加入）。若病人已用其他抗生素治療時(shí)，可用硫酸鎂肉湯增菌。4、接種時(shí)應(yīng)嚴(yán)格注意無菌操作，避免污染雜菌第9頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日三、細(xì)菌的培養(yǎng)1、標(biāo)本的自動(dòng)化培養(yǎng)

血培養(yǎng)瓶置于全自動(dòng)血培養(yǎng)儀中，陽性儀器報(bào)警。涂片革蘭染色，鏡檢，結(jié)果想臨床醫(yī)師報(bào)告。同時(shí)轉(zhuǎn)鐘血平板、麥康凱或加做巧克力平板，并進(jìn)行直接藥敏試驗(yàn)。挑取菌落涂片鏡檢，分別選用GPI或GNI上機(jī)進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。第10頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日2、標(biāo)本的手工培養(yǎng)

標(biāo)本置35±1℃溫箱內(nèi)孵育，每天取出一次觀察有無細(xì)菌生長，（注意觀察肉湯內(nèi)有無混濁、沉淀、菌膜、色素、血液變色、指示劑變色等現(xiàn)象）。疑有細(xì)菌生長時(shí)，挑取培養(yǎng)物涂片行革蘭染色鏡檢。及時(shí)轉(zhuǎn)種血平板或其他培養(yǎng)基進(jìn)行藥敏試驗(yàn)或分離培養(yǎng)。根據(jù)菌落特征及菌體染色鏡檢形態(tài)，可得出初步印象，并需繼續(xù)培養(yǎng)，按各種屬細(xì)菌加以鑒定。報(bào)告：“有XXX菌生長第11頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日如不見細(xì)菌生長，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至第7天，取出后接種于血平板，經(jīng)培養(yǎng)仍無細(xì)菌生長時(shí)，可報(bào)告為：“經(jīng)7天培養(yǎng)無細(xì)菌生長?！睂?duì)于亞急性心內(nèi)膜炎病人標(biāo)本，應(yīng)培養(yǎng)一個(gè)月，才能作出結(jié)論。3.特殊菌的培養(yǎng)

布魯菌的培養(yǎng)：將血液標(biāo)本接種于肝浸液2支，分別置于10％二氧化碳及普通環(huán)境中35±1℃培養(yǎng)，每2天觀察一次，若有菌生長，作涂片染色鏡檢，并移種于2份肝浸液平板或血平板，分別置于10％二氧化碳及普通環(huán)境下培養(yǎng)。用菌落再作布氏桿菌血清凝集試驗(yàn)，如為陽性，可報(bào)告為：“培養(yǎng)出布氏桿菌”。必要時(shí)，進(jìn)一步鑒定及分型。若培養(yǎng)30天后仍無細(xì)菌生長者，則可報(bào)告：“經(jīng)X周培養(yǎng)無細(xì)菌生長。”第12頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日四、檢驗(yàn)程序第13頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日五、結(jié)果報(bào)告1、陽性結(jié)果報(bào)告分為三級(jí)。一級(jí)報(bào)告：陽性報(bào)警，涂片鏡檢結(jié)果（電話）通知臨床，同時(shí)記錄報(bào)告日期、時(shí)間、內(nèi)容及接受報(bào)告人的姓名。血培養(yǎng)陽性應(yīng)列為危急。二級(jí)報(bào)告：報(bào)告直接藥敏結(jié)果。根據(jù)涂片染色選擇MH或加血MH平板，取培養(yǎng)液0.2ml涂布平板，根據(jù)鏡下特征選擇藥敏紙片，6～7個(gè)小時(shí)讀取初步藥敏結(jié)果。三級(jí)報(bào)告：報(bào)告細(xì)菌種屬、藥敏試驗(yàn)、結(jié)果評(píng)價(jià)和建議。如與初步報(bào)告不符，及時(shí)與臨床溝通，并在書面最終報(bào)告注明變更內(nèi)容第14頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日2、陰性結(jié)果的報(bào)告血培養(yǎng)72小時(shí)，未見細(xì)菌生長，應(yīng)通知臨床醫(yī)生，以便作相應(yīng)處理，但培養(yǎng)瓶要繼續(xù)培養(yǎng)至第5日，方可發(fā)出陰性報(bào)告。如發(fā)現(xiàn)有菌生長，可補(bǔ)發(fā)報(bào)告。對(duì)發(fā)出報(bào)告進(jìn)行銷號(hào)，并做好菌名或無菌及報(bào)告日期登記3、結(jié)果上報(bào)

傳染?。▊抽T菌）報(bào)醫(yī)務(wù)科傳染病菌種保存，交疾病控制中心復(fù)核第15頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日六、注意事項(xiàng)1.抽血后無需更換針頭即可注入血液瓶中2.抽血前應(yīng)貼好標(biāo)簽，標(biāo)簽不能覆蓋條形碼3.若不能立即送實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)置室溫或35培養(yǎng)箱，絕不可放冰箱4.有自動(dòng)鑒定儀的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)24小時(shí)值班，以便及時(shí)處理陽性報(bào)警標(biāo)本。5.如不同部位采集的標(biāo)本結(jié)果不一致，或均陽性為凝固酶陰性葡萄球菌，應(yīng)與臨床溝通。第16頁，共18頁，2023年，2月20日，星期日七、臨床意義引起敗血癥的多為耐藥性金黃色葡萄球菌、某些革蘭陰性桿菌及部分球菌。癤、癰、膿腫和化膿性骨髓炎繼發(fā)的敗血癥主要由金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌引起；尿道、膽道、胃腸道和粘膜損傷引起的敗血癥以大腸埃希菌最常見；燒傷后銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌多見；傷寒和服傷寒于