移液管和加樣槍的使用

生物化學(xué)課程網(wǎng)站訪問路徑:“三峽大學(xué)”-“求索學(xué)堂”-“課程總攬”-“醫(yī)學(xué)院”-“生物化學(xué)與分子生物學(xué)”-“醫(yī)用生物化學(xué)”網(wǎng)站內(nèi)有理論課和實(shí)驗(yàn)課的教學(xué)大綱、教案ppt、習(xí)題和考試樣卷等，根據(jù)需要下載學(xué)習(xí)現(xiàn)在是1頁\一共有31頁\編輯于星期日生化實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度和實(shí)驗(yàn)要求1.準(zhǔn)時到實(shí)驗(yàn)室，不遲到，不早退。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室須穿實(shí)驗(yàn)服。2.保持環(huán)境的肅靜，不高聲說話，嚴(yán)禁用器械及動物開玩笑。3.嚴(yán)格按操作規(guī)程使用儀器，儀器發(fā)生故障、損壞、丟失時，應(yīng)立即報告老師，凡違反操作規(guī)程而損壞儀器者，要追究責(zé)任。4.認(rèn)真觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象并記錄好原始數(shù)據(jù)；節(jié)約試劑，節(jié)約水電。5.實(shí)驗(yàn)完畢，洗凈所用器材，合理處理固體舍棄物和廢液。經(jīng)指導(dǎo)教師同意，方能離開實(shí)驗(yàn)室。6.值日生負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生，關(guān)好水、電、門窗，經(jīng)教師檢查后方可離開?，F(xiàn)在是2頁\一共有31頁\編輯于星期日試劑使用1.仔細(xì)辨認(rèn)標(biāo)簽，確定所需試劑及濃度。2.吸量管與所需試劑號碼務(wù)必對準(zhǔn)。3.用后蓋好瓶蓋，歸還原處，以免影響他人使用?，F(xiàn)在是3頁\一共有31頁\編輯于星期日本學(xué)期實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1刻度吸管、可調(diào)式移液器的校正與誤差分析-教師講解2分光光度法測定物質(zhì)的濃度-教師講解3血清堿性磷酸酶活性測定：1、2、3組講演4血紅蛋白與核黃素的凝膠層析分離：4、5、6組講演5

血清蛋白質(zhì)醋酸纖維素薄膜電泳：1、2、36酶的競爭性抑制：4、5、67血糖測定：1、2、38血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活性測定：4、5、69質(zhì)粒DNA的提?。?、2、310DNA的瓊脂糖凝膠電泳分析：4、5、6,實(shí)驗(yàn)總結(jié)：1-6組現(xiàn)在是4頁\一共有31頁\編輯于星期日實(shí)驗(yàn)課教學(xué)改革改革方案：前2次實(shí)驗(yàn)由老師講解，從第3次實(shí)驗(yàn)開始，同學(xué)們參與實(shí)驗(yàn)教學(xué)，擔(dān)任“小老師”，具體安排如下：本實(shí)驗(yàn)室共分為6個小組，每組4~5人，各組推選1名組長；第3個實(shí)驗(yàn)，由1、2、3組各自準(zhǔn)備與本次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容相關(guān)的ppt，并各選派1位同學(xué)講演，每位同學(xué)講演時間10~12分鐘，講演結(jié)束后為自由提問、討論和老師點(diǎn)評時間（30分鐘）；第4個實(shí)驗(yàn)，由4、5、6組進(jìn)行ppt準(zhǔn)備和發(fā)言，方法同上；第5-10個實(shí)驗(yàn)依次類推；注意：每次的ppt準(zhǔn)備需全小組同學(xué)共同參與，但由小組內(nèi)的不同同學(xué)發(fā)言，做到每個同學(xué)都有發(fā)言機(jī)會；ppt制作（包括材料的收集準(zhǔn)備、內(nèi)容的條理性和演示效果等）、每個同學(xué)的講演（內(nèi)容的熟悉程度、講解的條例性、對同學(xué)問題的回答情況）、回答問題、團(tuán)隊合作都將計入實(shí)驗(yàn)成績。現(xiàn)在是5頁\一共有31頁\編輯于星期日實(shí)驗(yàn)成績計算方法實(shí)驗(yàn)成績占生化總成績的35%實(shí)驗(yàn)成績考勤：10%實(shí)驗(yàn)報告：20%操作：30%ppt制作、講演、回答問題情況：40%自評：每次講演完后，各組評出自己組內(nèi)的前兩名互評：非講演組（如4、5、6組）給講演組（如1、2、3組）分別從ppt制作、講演、回答問題、團(tuán)隊合作方面進(jìn)行排序教師評價：教師從ppt制作、講演、回答問題、團(tuán)隊合作等方面對講演組進(jìn)行評價，提出表揚(yáng)和改進(jìn)意見等現(xiàn)在是6頁\一共有31頁\編輯于星期日實(shí)驗(yàn)評分標(biāo)準(zhǔn)考勤：遲到扣10分；曠課為0分操作：不穿白大褂，-10分不帶實(shí)驗(yàn)教材，-10分沒有預(yù)先預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)，-10分實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范，-5分過失造成玻璃器皿損壞，-5分過失造成儀器損壞，-10分沒有清洗玻璃器皿和還原儀器，-10分沒做清潔，-10分實(shí)驗(yàn)報告:

沒有實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?5分沒有實(shí)驗(yàn)原理，-5分沒有實(shí)驗(yàn)過程，-10分涂改實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，-20分沒有分析與實(shí)驗(yàn)討論，-15分沒有報告臨床意義，-5分現(xiàn)在是7頁\一共有31頁\編輯于星期日刻度吸管&微量可調(diào)式移液器的使用、校正與數(shù)據(jù)處理彭帆E-mail:Officetel物化學(xué)基本實(shí)驗(yàn)技能訓(xùn)練（一）現(xiàn)在是8頁\一共有31頁\編輯于星期日實(shí)驗(yàn)?zāi)康那宄锘瘜W(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度和實(shí)驗(yàn)要求掌握刻度吸管的分類和使用方法掌握微量可調(diào)式移液器的原理和使用方法，了解可調(diào)式移液器的校正方法建立實(shí)驗(yàn)誤差、準(zhǔn)確度和精確度的概念，掌握誤差分析計算方法現(xiàn)在是9頁\一共有31頁\編輯于星期日問題：將溶液從一容器轉(zhuǎn)移到另一個容器。用什么量具？如何確定容量？是否精準(zhǔn)？現(xiàn)在是10頁\一共有31頁\編輯于星期日一、刻度吸管(pipette)的分類和操作

分類：10mL,5mL,2mL,1mL,0.5mL,0.2mL,0.1mL(吹?)現(xiàn)在是11頁\一共有31頁\編輯于星期日

刻度吸管的操作方法1．使用前：檢查刻度吸管是否配套。2．吸液：排→插→吸→按3．調(diào)節(jié)液面：放→靠4．放出溶液：靠→放→停；*若吸管上標(biāo)有“吹”，則需將管內(nèi)殘余液體吹出。

現(xiàn)在是12頁\一共有31頁\編輯于星期日工欲善其事，必先利其器微量可調(diào)式移液器(俗稱“加樣槍”)的構(gòu)造和操作

5mL移液器(1-5mL)1mL移液器(200-1000uL)200uL移液器(20-200uL)100uL移液器(20-100uL)10uL移液器(0.5-10uL)2uL移液器(0.1-2uL)現(xiàn)在是13頁\一共有31頁\編輯于星期日微量可調(diào)式移液器的構(gòu)造扭動轉(zhuǎn)軸，可調(diào)整移液器容量手指把手吸頭的排出器容量指示窗口吸頭排出器套筒吸頭圓錐體現(xiàn)在是14頁\一共有31頁\編輯于星期日加樣槍的操作方法1.容量調(diào)節(jié)：選定加樣槍，調(diào)定所需容量讀數(shù)。*請勿將按鈕旋出量程以外?。。?.槍頭裝配:將加樣槍垂直插入槍頭中，稍用力左右轉(zhuǎn)動使其緊密結(jié)合。*請勿使勁敲擊槍頭盒?。。‖F(xiàn)在是15頁\一共有31頁\編輯于星期日4．放出溶液：按1st→按2nd→松

3.吸液：按1st→插→松→靠

(a)StartDispensing

(b)1stStop=Dispense(c)2ndStop=Expel5．棄去槍頭：按排現(xiàn)在是16頁\一共有31頁\編輯于星期日注意事項(xiàng)

加樣槍的正確放置當(dāng)加樣槍的槍頭里有液體時，應(yīng)垂直放置加樣槍。維護(hù)保養(yǎng)不使用時，把加樣槍的量程調(diào)至最大刻度；定期清洗移液槍(肥皂水或60％異丙醇+蒸餾水+自然晾干)；重復(fù)稱量蒸餾水進(jìn)行校準(zhǔn)，環(huán)境溫度為20-25℃?，F(xiàn)在是17頁\一共有31頁\編輯于星期日問題獲得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)后，所得數(shù)據(jù)是否準(zhǔn)確？可靠性如何？如何正確記錄與處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)？現(xiàn)在是18頁\一共有31頁\編輯于星期日三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)處理

準(zhǔn)確度:分析結(jié)果與真值的接近程度,用誤差表示.

誤差:測定結(jié)果(X)與真實(shí)值(XT)之間的差值.

系統(tǒng)誤差:

偶然誤差:

絕對誤差(Absoluteerror):E=X-XT

相對誤差(Relativeerror):

準(zhǔn)確度與誤差(Accuracy&Error)現(xiàn)在是19頁\一共有31頁\編輯于星期日

系統(tǒng)誤差:由于分析過程中某些固定的原因造成的誤差.1.性質(zhì)：（1）單向性、重復(fù)性（2）與測定次數(shù)無關(guān)（3）可以校正，大小、正負(fù)可以測定2.產(chǎn)生原因：（1）方法誤差（2）儀器和試劑誤差（3）操作誤差（4）主觀誤差3.校正：改變方法，校正儀器，采用高等級試劑等?，F(xiàn)在是20頁\一共有31頁\編輯于星期日

偶然誤差

1、性質(zhì):（1）大小可變（2）方向不定，有時正、有時負(fù)。（3）只能減小，不能消除。

2、產(chǎn)生原因：溫度、氣壓、濕度、儀器性能、人為的終點(diǎn)判斷的變化等。

3、校正：不能消除，只有增加平行實(shí)驗(yàn)次數(shù).現(xiàn)在是21頁\一共有31頁\編輯于星期日

精密度與偏差(Precision&Deviation)精密度:在相同條件下,各次分析結(jié)果間的接近程度，用偏差表示.偏差:測定結(jié)果(X)與平均值()之間的差值.偏差小,表示數(shù)據(jù)集中,精密度高;反之,數(shù)據(jù)分散,精密度低.偶然誤差影響分析結(jié)果的精密度.絕對偏差(Absolutedeviation,di)

：

di=單個測量值(Xi)-平均值()相對偏差(Relativedeviation,dr)

：

均值:

X=

現(xiàn)在是22頁\一共有31頁\編輯于星期日

標(biāo)準(zhǔn)偏差(Standarddeviation，SDorS)

相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RelativeStandardDeviation,RSD)，又稱變異系數(shù)(CoefficientofVariation,CV)

現(xiàn)在是23頁\一共有31頁\編輯于星期日？？準(zhǔn)確度和精確度BothaccurateandprecisePrecisebutnotaccurateNeitheraccuratenorprecise現(xiàn)在是24頁\一共有31頁\編輯于星期日問題當(dāng)你把微量可調(diào)式移液器容量設(shè)定在100ul并把液體從試劑瓶轉(zhuǎn)移到了試管。你是否確定所轉(zhuǎn)移的液體體積就是100ul？如果所轉(zhuǎn)移的液體體積與標(biāo)示量不符，如何校正？現(xiàn)在是25頁\一共有31頁\編輯于星期日

體積準(zhǔn)確度

（平均誤差）精確度

（重現(xiàn)性）

ul誤差（uL）誤差（％）S.D.（uL）R.S.D.（uL）P202±0.1±5.0≤0.03≤1.55±0.1±2.0≤0.04≤0.8010±0.1±1.0≤0.05≤0.5020±0.2±1.0≤0.06≤0.30P10020±0.35±1.8≤0.10≤0.550±0.40±0.8≤0.12≤0.24100±0.80±0.8≤0.15≤0.15P20050±0.5±1.0≤0.20≤0.40100±0.8±0.8≤0.25≤0.25200±1.6±0.8≤0.30≤0.15P1000200±3±1.5≤0.60≤1.30500±4±0.8≤1.0≤0.201000±8±0.8≤1.5≤0.15移液器的準(zhǔn)確度與精確度現(xiàn)在是26頁\一共有31頁\編輯于星期日微量可調(diào)式移液器系統(tǒng)誤差的校正校準(zhǔn)方法？必須考慮的環(huán)境與儀器的影響因素？溫度、濕度、天平的精度、水的純度等如何消除偶然誤差的影響？現(xiàn)在是27頁\一共有31頁\編輯于星期日實(shí)驗(yàn)步驟

一、刻度吸管的操作：選擇5mL、2mL的刻度吸管，按照教師要求，把相應(yīng)體積的ddH2O移取到燒杯中，稱重。重復(fù)該步驟3次。二、微量可調(diào)式移液器的操作：選擇1000L、200L的微量可調(diào)式移液器，按照教師要求，把相應(yīng)體積的ddH2O移取到燒杯中，稱重。重復(fù)該步驟3次。現(xiàn)在是28頁\一共有31頁\編輯于星期日實(shí)驗(yàn)結(jié)果刻度吸管真值(mL)次數(shù)123456測量值(g)計算體積(mL)平均值(mL)SD校正值微量可調(diào)式移液管真值(uL)次數(shù)123456測量值(g)計算體積(uL)平均值(uL)SD校正值現(xiàn)在是29頁\一共有31頁\編輯于星期日DensityofwateratdifferenttemperatureT(0C)Density(g/cm