血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定

試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)掌握血紅蛋白測(cè)定方法；學(xué)習(xí)判定血型基本方法，觀察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，掌握ABO血型判定原理。血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第1頁(yè)測(cè)定血紅蛋白意義人血紅蛋白參考值成年男性：13--15克/dl；成年女性：11--14克/dl；兒童：（依年紀(jì)而異）12--14克/dl。臨床意義：大致與紅細(xì)胞增減相同。高原地域居民血紅蛋白濃度普通比平原居民為高，這是機(jī)體對(duì)低氣壓環(huán)境一個(gè)適應(yīng)現(xiàn)象。普通來(lái)說(shuō)，在疾病情況下，血紅蛋白增減是與紅細(xì)胞改變相平行，即引發(fā)紅細(xì)胞增多疾病，也會(huì)使血紅蛋白含量增加。使紅細(xì)胞降低疾病，也使血紅蛋白含量降低。在貧血時(shí)，血液中紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白濃度都有不一樣程度下降，但不一定按相同百分比改變。有時(shí)紅細(xì)胞數(shù)量能夠降低很多，而血紅蛋白濃度降低卻相對(duì)地不那么顯著，見(jiàn)于大細(xì)胞性貧血，因?yàn)閱蝹€(gè)紅細(xì)胞所含血紅蛋白量較正常者為多。相反，也有紅細(xì)胞降低得不很多，而血紅蛋白濃度卻顯著降低，比如缺鐵性貧血，這是因?yàn)槊總€(gè)紅細(xì)胞血紅蛋白含量比正常顯著降低，故血紅蛋白減低程度較紅細(xì)胞降低更為顯著。依據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果，分析病因，做到準(zhǔn)確診療和治療都是很必要。血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第2頁(yè)基本原理血紅蛋白是紅細(xì)胞主要成份，在正常情況下，每個(gè)紅細(xì)胞均含有一定量血紅蛋白。血紅蛋白是由珠蛋白和亞鐵血紅素組成結(jié)合蛋白質(zhì)。血紅蛋白除能與氧結(jié)合形成氧合血紅蛋白外，尚能與一些物質(zhì)作用形成各種血紅蛋白衍生物。它們含有特定色澤和吸光譜，在臨床上，可用以診療一些變性血紅蛋白血癥和血紅蛋白定量測(cè)定。測(cè)定血紅蛋白含量方法很多，試驗(yàn)慣用比色法。其原理是在一定量血液中，血紅蛋白經(jīng)少許鹽酸作用，使亞鐵血紅素變成高鐵血紅素，展現(xiàn)較穩(wěn)定棕色。用水稀釋后與標(biāo)準(zhǔn)色比較，求出每100ml血液中所含血紅蛋白克數(shù)。正常成年男子每100ml血液平均含14.4g，女子為13.1g。血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第3頁(yè)試驗(yàn)原理-血型判定血型普通指紅細(xì)胞血型，是依據(jù)紅細(xì)胞膜外表面存在特異性抗原（鑲嵌于紅細(xì)胞膜上糖蛋白和糖脂）來(lái)確定，這種抗原或凝集原是由遺傳決定?？贵w或凝集素存在于血清中，與紅細(xì)胞不一樣抗原起反應(yīng)，產(chǎn)生凝集，最終溶解，因?yàn)檫@種現(xiàn)象，臨床上在輸血前必須注意判定血型，以確保安全輸血。血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第4頁(yè)ABO血型判定試驗(yàn)原理抗原抗體反應(yīng)——在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。A抗原加抗A抗體或B抗原加抗B抗體，則產(chǎn)生凝集現(xiàn)象→從而測(cè)知受試者紅細(xì)胞膜上有沒(méi)有A或/和B抗原→判斷血型抗體在相鄰紅細(xì)胞表面抗原決定簇之間搭橋形成肉眼可見(jiàn)顆粒狀凝集團(tuán)塊.見(jiàn)圖血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第5頁(yè)IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第6頁(yè)IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖

IgGM在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第7頁(yè)試驗(yàn)材料血紅蛋白計(jì)、0.1mol/L鹽酸溶液；載玻片、刺血針、牙簽、一次性采血管、A型和B型標(biāo)準(zhǔn)血清、生理鹽水、酒精棉球等。血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第8頁(yè)方法與步驟-血紅蛋白測(cè)定于測(cè)定管內(nèi)加入0.1mol/L鹽酸溶液至百分刻度20處。取20μl被檢血液,快速將吸血管插入測(cè)定管底部鹽酸液中，遲緩擠出血液，再吸收上部清液，重復(fù)沖洗吸血管2~3次，并混勻，靜置10min。沿著管壁加入蒸餾水，逐步稀釋至與標(biāo)準(zhǔn)色柱色調(diào)一致后，讀取重量（或百分）刻度值匯報(bào)結(jié)果。

標(biāo)準(zhǔn)制換算：血紅蛋白(g/L)=血紅蛋白(g/dl)×10血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第9頁(yè)方法與步驟-血紅蛋白測(cè)定

血紅蛋白計(jì)包含①標(biāo)準(zhǔn)比色架，架兩側(cè)鑲有兩個(gè)棕色標(biāo)準(zhǔn)玻璃色柱。②血紅蛋白稀釋管，有方形也有圓形。兩側(cè)有刻度，一側(cè)以g為計(jì)數(shù)單位，對(duì)側(cè)以百分率計(jì)，按我國(guó)情況，是以每100ml血液內(nèi)含血紅蛋白14.5g為100%。③20mm3血紅蛋白吸管，還有玻璃棒、滴管。用滴管加0.1mol/LHCl于血紅蛋白稀釋管內(nèi)，到刻度10處。用刺血針刺破指尖采血，血滴宜大些。用血紅蛋白吸管尖端接觸血滴，吸血至刻度20ul處（0.02ml）。血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第10頁(yè)方法與步驟-血紅蛋白測(cè)定

用濾紙片或棉球擦凈吸管口周圍血液，將吸管插入血紅蛋白稀釋管鹽酸內(nèi)，輕輕吹出血液至管底部，重復(fù)吸入并吹出稀釋管內(nèi)上層鹽酸，洗滌吸管屢次，使吸管內(nèi)血液完全洗入稀釋管內(nèi)。搖勻或用小玻璃棒攪勻后，放置10min，使鹽酸與血紅蛋白充分作用。把稀釋管插入標(biāo)準(zhǔn)比色架兩色柱中央空格中，使無(wú)刻度兩側(cè)面位于空格前后方，便于透光和比色。用滴管向稀釋管內(nèi)逐滴加入蒸餾水（每加一滴要攪拌），邊滴邊觀察顏色，直至顏色與標(biāo)準(zhǔn)玻璃色柱相同為止。稀釋管上液面刻度讀數(shù)即為每100ml血液血紅蛋白克數(shù)。血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第11頁(yè)從指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理鹽水小試管內(nèi)，混勻，即得約5％紅細(xì)胞懸液。采血時(shí)應(yīng)注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。)(取少許受檢者紅細(xì)胞（約0.2~0.5ml）用生理鹽水洗滌3次，然后加入適量生理鹽水調(diào)配成5%濃度。方法與步驟-血型判定血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第12頁(yè)方法與步驟-血型判定（1）取雙凹玻片一塊，用潔凈紗布輕拭使之潔凈，在玻片兩端用記號(hào)筆標(biāo)明A及B，并分別各滴入A及B標(biāo)準(zhǔn)血清一滴。（2）用滴管吸收紅細(xì)胞懸液，分別各滴一滴于玻片兩端血清上，注意勿使滴管與血清相接觸。（3）竹簽兩頭分別混合，攪勻。用兩根分別用來(lái)混合A型和B型標(biāo)準(zhǔn)

（4）觀察結(jié)果。如有凝集反應(yīng)可見(jiàn)到呈紅色點(diǎn)狀或小片狀凝集塊浮起。先用肉眼看有沒(méi)有凝集現(xiàn)象，肉眼不易分辨時(shí)，則在低倍顯微鏡下觀察，如有凝集反應(yīng)，可見(jiàn)紅細(xì)胞聚集成團(tuán)。（5）判斷血型依據(jù)被試者紅細(xì)胞是否被A，B型標(biāo)準(zhǔn)血清所凝集，判斷其血型。血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第13頁(yè)血型判定正定型反定型

結(jié)果抗A抗BA型RBCB型RBCO型RBC--++-O+--+-A-++--B++---AB血紅蛋白含量的測(cè)定血型鑒定第14頁(yè)